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细胞发生凋亡时, 会激活一些DNA内切酶,这些内切酶会切断核小体间的基因组DNA,产生180 bp-200 bp的 DNA 片段,表现为琼脂糖凝胶电泳中呈现的特异的梯状Ladder图谱。基因组DNA双链或单链断裂时会出现产生大量的粘性3'-OH末端,可在脱氧核糖核苷酸末端转移酶(TdT)的催化作用下,与SF/Cy-dUTP结合,从而通过荧光显微镜或流式细胞仪直接进行凋亡细胞的检测,这类方法称为脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法(Terminal -deoxynucleotidyl transferase mediated nick end labeling, TUNEL)。由于正常的或正在增殖的细胞几乎没有DNA的断裂,因而没有3'-OH形成,很少能够被染色。Tunel法可以对完整的单个凋亡细胞核或凋亡小体进行原位染色,能准确地反应细胞凋亡典型的生物化学和形态特征,可检测出极少量的凋亡细胞,因而在细胞凋亡的研究中广泛采用。本试剂盒应用范围广,可用于检测冷冻或石蜡切片中的细胞凋亡情况,也可检测培养的贴壁细胞或悬浮细胞的凋亡情况。可选择性的检测凋亡细胞,而非坏死细胞或因辐照和药物治疗而造成的 DNA 链断裂的细胞。本试剂盒检测细胞凋亡,耗时短,只需一步染色反应,洗涤后即可检测。
注意事项
1.使用前请将产品瞬时离心至管底,再进行后续实验。
2.染色背景较重或非特异性着色明显时可适当减少染色时间。
3.实验时建议增加阴性对照和阳性对照组。
4.组分A使用时请佩戴口罩、手套,如接触皮肤,请立即用大量水冲洗。
5.荧光染料均存在淬灭问题,请尽量注意避光,以减缓荧光淬灭。
6.为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。