华韵自主研发生产的BspQI,是从大肠杆菌表达纯化获得的一种限制性内切酶[1],是SapI、LguI、PciSI的同裂酶(Isoschizomers),其基本信息如下:
识别序列 |
缓冲液兼容性(%) |
酶切温度 |
失活条件 |
甲基化干扰? |
GCTCTTC(N)1^ |
1X B |
1X G |
1X O |
1X R |
1X Y |
2X Y |
50ºC |
80ºC 20min |
无 |
CGAGAAG(N)4^ |
50-75 |
50-75 |
50-75 |
50-75 |
100 |
50-75 |
华韵生产的BspQI酶切DNA双链的效果请参考图1。
图1.华韵生产的BspQI (D6132)和国外同类产品(Competitor)的酶活性检测效果对比图。使用本产品或国外N公司的BspQI,在20µl反应体系中加入图中指定量的本产品或国外N公司的BspQI,在1X Buffer Y中酶切含一个BspQI位点的300bp的DNA片段,50ºC孵育1小时进行酶切反应,酶切产物为两个长度不等的200bp和100bp片段,随后80ºC孵育20分钟使酶失活,然后电泳并进行核酸染色和荧光成像分析。如图所示,本产品与N公司的产品相比,具有类似的酶切效果。M, DNA marker (DNA Ladder (0.2-12 kb, 12 bands) (D0110))。实际检测效果会因实验条件、检测仪器等的不同而存在差异,图中数据仅供参考。
酶储存液组成为:20mM Tris-HCl (pH7.4 at 25ºC), 500mM KCl, 1mM DTT, 0.1mM EDTA, 500μg/ml BSA, 50% Glycerol and 0.1% Triton X-100。
1X Buffer Y组成为:33mM Tris-acetate (pH7.9 at 37ºC), 10mM Magnesium acetate, 66mM Potassium acetate, 0.1mg/ml BSA。
酶切和连接效率:50倍过量的本内切酶消化1小时,>95%被酶切的片段可以被连接并被重新酶切(Recut)。
活性单位定义:One unit is defined as the amount of BspQI required to digest 1µg of λDNA in 1 hour at 50ºC in a total reaction volume of 50µl.