知识库
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如何选择细菌接种方法？
划线接种法：适用于从混杂微生物群体中分离出单一菌株，如在临床样本或环境样本中分离特定病原菌。通过在固体培养基表面连续划线，使细菌逐渐分散，最终在划线末端形成单个菌落，便于挑取纯化。稀释涂布平板法：将菌液进行一系列梯度稀释后，取适量稀释液涂布于固体培养基表面，使细菌均匀分布，经培养后形成单个菌落
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为什么要用无血清培养基？无血清替代添加物有哪些？
是一种专门设计用于细胞培养的培养基，不含传统培养基中的血清成分。血清通常是从动物血液（如胎牛血清，Fetal Bovine Serum, FBS）中提取，含有丰富的生长因子、激素、蛋白质和其他营养成分，支持细胞的生长和繁殖。然而，由于血清成分复杂且批次间差异大，同时可能携带病原体，因此科学家开发了无血清培养基。
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微生物检验中培养基制备的注意事项
培养基是用于保证微生物繁殖、鉴定、保持活力的物质，按照物理性质可以分成液体培养基、固体培养基、半固体培养基和脱水培养基，按照化学性质可以分成天然培养基、组合培养基和半组合培养基，按照功能可以分成选择性培养基、鉴别培养基。不同培养基要求不同，保存方式也不同。在受热、吸潮后，培养基极易被微生物污染或分解变质，需在避光、防潮、阴凉处储存。
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细胞转染—脂质体（Liposome）转染法
脂质体作为体内和体外输送载体的工具，已经研究的十分广泛，中性脂质体是利用脂质膜包裹DNA，借助脂质膜将DNA导入细胞膜内。带正电的阳离子脂质体，DNA并没有预先包埋在脂质体中，而是带负电的DNA自动结合到带正电的脂质体上，形成DNA-阳离子脂质体复合物，从而吸附到带负电的细胞膜表面，经过内吞被导入细胞。
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底物浓度对酶促反应速率的影响
Vmax和kcat(催化常数)的意义：在一定酶浓度下，酶对特定底物的Vmax（Vmax=k3*E0，k3代表酶饱和时[ES]→P+E的速率常数，E0代表此时的酶量）也是一个常数。Vmax与Km相似，同一种酶对不同底物的Vmax也不同。pH、温度和离子强度也影响Vmax的数值。kcat（k3）也称为酶的转换数(TN)，它是酶的最大催化活力的量度
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温度、PH和激活剂对酶促反应的影响
在温度较低时，温度对碰撞机会影响较大，反应速率随温度升高而加快，但温度超过一定数值后，酶受热变性的因素占优，反应速率反而随温度上升而下降，形成倒V形曲线。在此曲线顶点所代表的温度下，酶活性最高,这时的温度被称为酶的最适温度。最适温度：在较低的温度范围内，酶反应速率随温度升高而增大，但超过一定温度后
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IF免疫荧光实验，指甲油居然还能这么用
准备已转染48h后的细胞，用移液枪弃去24孔板中的完全培养基，加入适量4%的多聚甲醛。（适量即使PFA没过每个孔的孔底）。静置20min使细胞固定在爬片上，固定好后，用移液枪将所有的多聚甲醛进行收集，当做废液处理。（多聚甲醛对人体有害，注意收集处理）。24孔板中的每个孔加入500μL PBS、浸泡5min，浸泡好后
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菌种保存方法，甘油用起来！
挑取菌苔至液体菌种保存管，首先观察平板上的菌落大小，若单个菌落在2-3毫米，则需挑取2-3个单个菌落进行接种；若单个菌落较小，则需挑取3个以上单个菌落进行接种，以保证菌种保存液浓度大约为3-4麦氏吡浊度。将挑取的菌苔接种至液体菌种保存管中，然后盖上盖子，上下颠倒使菌种与保存液充分融合，必要时可使用移液枪吹打，之后放入超低温冰箱进行保存。
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免疫组化IHC实验过程及操作演示
将内源性过氧化物酶滴在组织上，放入37℃烘箱孵育7-8分钟，取出湿盒，PBS洗3次，每次5分钟。准备好两缸柠檬酸钠，一缸用来后续补加，将染色架放入柠檬酸钠浸泡，将切片盒放入微波炉中，设置P100,1次5分钟，P80 3-4次各5分钟，加热期间需要观察水分是否有损失，如果低于载玻片就要加入修复液，结束后放置于试验台上冷却至室温，冷却完后用PBS洗3次
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细胞生物实验——PBS溶液配置
事先计算试剂用量，使用称量天平进行试剂量取，量取试剂量较少时，可轻抖手臂让粉末少量取定量超纯水在雏形瓶中溶解试剂粉末，放入干净转子，在磁力搅拌器上搅拌溶解试剂粉末，完全溶解后使用PH计，进行测定。如该溶液的ph，在7.2-7.4范围内，不需要调节ph，取一只定容瓶进行验漏，超纯水润洗干净，使用干净玻璃棒将溶液引流入定容瓶
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ELISA 实验的材料仪器、步骤、注意事项、常见问题
血清标本宜在新鲜时检测。如有细菌污染，菌体中可能含有内源性 HRP，也会产生假阳性反应。如在冰箱中保存过久，其中的可发生聚合，在间接法 ELISA 中可使本底加深。一般说来，在 5 天内测定的血清标本可放置于 4 ℃，超过一周测定的需低温冰存。冻结血清融解后，蛋白质局部浓缩，分布不均，应充分混匀宜轻缓，避免气泡
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Pull-down实验
将一种蛋白质固定于某种基质上（如Sepharose），但细胞抽提液经过该基质时，可与该固定蛋白相互作用的配体蛋白被吸附，而没有被吸附的“杂质”则随洗脱液流出。被吸附的蛋白可以通过改变洗脱液或洗脱条件而回收下来。为了更有效地利用pull down技术，可以将待纯化的蛋白以融合蛋白的形式表达，即将“诱饵”蛋白与一种易于纯化的配体蛋白相融合
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冰冻切片免疫荧光实验流程
1、冰冻切片固定：冰冻切片37℃烘烤10至20分钟，控干水分，置于4%多聚甲醛固定30min。于PBS缓冲液中晃动洗涤3次，每次5分钟。2、抗原修复：将切片浸没在升满EDTA抗原修复缓冲液（PH8.0）的修复盆中，置于微波炉内进行抗原修复，修复条件：中火8min至沸——停火8min保温——中低火7min（整个过程需防止修复液过度蒸发，切勿干片
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采用 qRT-PCR 检测细胞炎性因子
细胞培养：将待检测的细胞接种在培养皿中，依据实验目的处理细胞，待收集细胞时，用 PBS 轻柔清洗 2~3 次以去除培养基对后续试验的干扰。RNA 提取：使用 RNA 提取试剂盒，从细胞中提取总 RNA，并使用紫外分光光度计检测 RNA 浓度和纯度，A260/A280 在 1.8~2.1，表明 RNA 样品可用。RNA 很不稳定，易降解，建议测定完成后尽快进行反转录反应。
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逆转录病毒感染悬浮细胞（上清感染）
293T细胞不能铺得太稀或者太满，确保 24 h 内进行转染，否则产病毒颗粒效率低，导致感染效率低。293T 包病毒的第 48 h 观察培养基颜色是否为橙红色，若出现黄色或者金黄，说明 293T 状态不行，或者铺板时候细胞太多了。出现该情况不建议再进行感染，放弃本次实验。收集 72 h 病毒后，可取部分 293T 细胞进行转染效率验证
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干货分享 | PCR 纯化回收
PCR 产物可通过硅胶柱纯化回收，硅胶膜在高盐度缓冲液中可以结合 DNA，低盐度缓冲液或水可洗脱 DNA（硅胶膜表面的硅胶醇基团呈弱酸性，水化后带负电荷。当溶液中存在一定浓度的阳离子后，形成的阳离子电子桥能够中和 DNA 和硅烷醇基团之间的表面负电荷，从而使 DNA 牢固的吸附在硅胶膜表面。相反，处于低盐水溶液状态下时
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干货分享 ▎常见的细胞培养基以及血清介绍
细胞培养基是人工模拟细胞在体内生长的营养环境，是提供细胞营养和促进细胞生长增殖的物质基础。培养液或培养基的含义几乎相同，英文都是medium。当它是粉剂时，倾向性地称为培养基，而将粉剂配成液体后，多称为培养液。培养液中常常补加血清、抗生素等成分。培养基主要包括天然细胞培养基、合成细胞培养基和无血清细胞培养基等
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细胞培养FAQ汇总，不容错过！
收到细胞后先不要开盖，放在培养箱静置若干小时后（看细胞密度而定）在倒置显微镜下观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照（建议对收细胞时的培养基拍一张照片，观察培养基的颜色和是否有漏液情况，显微镜下拍细胞100X，200X各一张），排除细胞本身污染的情况；收到细胞未开封，出现污染状况一般可以再申请免费发送一株细胞
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Transwell侵袭实验操作步骤
Transwell侵袭实验是一种用于研究细胞侵袭能力的体外实验方法，常用于肿瘤细胞侵袭和转移的研究。基质胶在铺板前需充分融化并保持低温操作，避免基质胶提前凝固。接种细胞时，细胞悬液的浓度和体积要准确，避免细胞团块的形成。实验过程中要保持无菌操作，防止污染。不同细胞的侵袭能力不同，需要根据细胞类型优化实验条件，如培养时间、基质胶浓度等
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【实验小课堂】IHC疑难解答
IHC（免疫组化）是一种检测生物组织中蛋白质的方法，常用于癌症和其他疾病的诊断。在IHC过程中，可能会遇到背景染色、非特异性染色和假阳性等问题。要解决这些问题，可以优化抗体浓度、缓冲液pH值和染色时间。
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WB蛋白免疫迹常见问题与解决方案
Western Blot（WB）蛋白免疫印迹实验是分子生物学和生物化学领域常用的技术，用于检测和分析特定蛋白质的表达水平等。优化转膜条件：根据蛋白分子量大小调整转膜时间、电流或电压。可以通过预实验确定最佳转膜条件，也可使用丽春红染色检测转膜效果。调整上样量：增加蛋白上样量，确保上样蛋白量在检测范围内。检查上样缓冲液是否正确配制，样品是否充分变性。
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蛋白质修饰对WB条带迁移的影响
蛋白翻译后修饰（PTM）是指在蛋白质分子上发生的化学修饰，通过改变蛋白质的结构和功能来调控细胞和生物体的生理过程。蛋白修饰可以发生在蛋白质的氨基酸残基上，包括磷酸化、甲基化、乙酰化、泛素化等多种修饰方式，并在细胞内发挥着重要的调控作用。它可以影响蛋白质的折叠、稳定性、相互作用以及定位，从而调节蛋白质的功能、活性和降解。蛋白修饰还参与信号转导、细胞周期、基因表达调控等关键生物过程
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基于噬菌体展示技术的单链抗体展示
可变结构域、轻链可变区（VL）和重链可变区（VH）组成了单克隆抗体，也就是重组抗体，单克隆抗体通过其可变片段去识别靶抗原。在1980年代，BIrd等人设计了单链抗体（scFv）作为VL和VH的遗传融合体，它通过短柔性肽去链接VL和VH。scFv是具有抗体活性的最小结合单元，由于其缺少Fc结构域，因此它的体积很小，约为25 kDa，与全长抗体相比，它更容易渗透在肿瘤组织中，能够应用于靶向癌症治疗药物方面
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重组蛋白表达的几种形式
基于基因层面的各种技术目前被使用在很多方面，通过这种方法能够进行重组蛋白表达，经过转录、翻译等，可以得到想要的蛋白。大肠杆菌、昆虫、哺乳动物细胞（尤其是CHO、HEK293细胞被用于瞬时蛋白表达）、酵母被广泛采用。其中，大肠杆菌表达系统是进行原核表达的首要选择，在进行真核蛋白表达时，CHO细胞是首要选择
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LC-MS/MS技术的原理
自19世纪60年代以来，许多临床实验室开始使用质谱法。其中，液相色谱-串联质谱（LC-MS/MS）技术主要应用于小分子的定量，如类固醇。并且LC-MS/MS技术是定量研究副神经节瘤中肾上腺素，以及多囊卵巢综合征的总睾酮和游离睾酮的首选。LC-MS/MS技术能够分析同一批样品中的多种物质，并且具有高度特异性，有助于识别免疫测定的结果
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Denovo测序的原理”
Denovo测序的主要是在提取未知肽段后，通过组装成完整的蛋白质序列去分析并揭示其结构和功能。从生物样本中提取并纯化蛋白质后，通过酶解等方法将其切割成肽段，这些肽段又通过质谱去生成肽段序列，之后将质谱分析得到的肽段序列组装成完整的蛋白质序列。在确定了蛋白质序列之后可以基于算法预测蛋白质结构，进而研究其与其他分子的相互作用。
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哺乳动物细胞培养的注意事项
在细胞培养的过程中，细胞污染是最需要被关注的问题，根据污染源的不同，细胞污染主要分为物理污染、化学污染，和微生物污染。细胞培养需要严格控制温度与二氧化碳含量，哺乳动物细胞培养温度一般控制在37℃，但若出现温度不适宜的情况，如过冷或过热，都会导致细胞状态发生改变，甚至引起细胞死亡；在培养过程中应该尽量避免将细胞暴露在放射线以及辐射中，放射线和紫外线会破坏细胞的DNA结构
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4 步！把「WB」胶板做的又直又漂亮
先从胶板中将胶取出，根据具体实验需要确定是否取出浓缩胶部分，将胶在转膜缓冲液中浸泡 10min；裁剪与胶大小一致的 PVDF 膜和滤纸（统一：PVDF 膜 5.5X8.5 cm，滤纸 7X9 cm），PVDF 膜先用甲醇浸润 1min，再转入转膜缓冲液中浸泡 10min；转膜时，转膜用的夹子黑色面在下，然后依次放：转膜用海绵垫，湿润的三层薄滤纸，蛋白胶，PVDF 膜，湿润的三层薄滤纸，转膜用的海绵垫；
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教你5招轻松去除悬浮细胞中的死细胞
原理就是用结合了磁珠的抗体去标记细胞，让目的细胞带上磁珠，也可以正向选择死细胞，通过磁场結合了磁珠与没结合磁珠的细胞分离开来。MACS是细胞分选的重要手段，优点是细胞活性好，缺点就是能分选的細胞类型有限，且成本较高。可以用一种叫Con.A（刀豆球蛋白）来包被培养皿或培养瓶，悬浮細胞中的活细胞可短暂贴壁
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线粒体蛋白样本制备的具体操作步骤
试剂准备，所需试剂临用前预冷，且加入终浓度均为 1mM 的 PMSF 和原钒酸钠。收集细胞 4℃，500g 离心 5min，用0.25M 缓冲蔗糖溶液洗涤数次。然后在 0～4℃ 条件下，按 2x107 细胞加 2mL 的比例加入 0.25M 缓冲蔗糖溶液将细胞匀浆，蔗糖溶液应分数次添加。先将 2mL 的 0.34M 缓冲蔗糖溶液先加至离心管底部，然后沿管壁小心地加入 2mL 匀浆液使其覆盖于上层，700g 离心 10min 分别收集上清和沉淀。
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关于胎牛血清的7问7答
在 2~8°C 条件下存放，血清中的多种蛋白或脂蛋白会形成肉眼可见的沉淀，如血纤蛋白（fibrin），单体时处于溶解状态，在冻融过程中会发生聚集，形成肉眼可见的沉淀。但该现象一般不会影响血清的性能。可以 400 g 离心 5 分钟，取上清，然后过滤。根据需要选择合适的滤膜孔径，一般最常用的是 0.22 um PES 材质的滤膜。为避免滤膜阻塞
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软骨细胞原代分离培养
可用手术刀取材；尽量取新生的大白兔取材；这样细胞活性高，量大，取材方便；在消化时可以放置在摇床上，效率比放置在孵箱里高；消化时多观察，至组织块大致消失就可以终止消化了。接种后48H再换液，这样细胞才帖牢不掉。第三、四天多观察，细胞在会爆发：细胞形态膝关节软骨原代培养过程中，约24小时即可出现贴壁生长，细胞三角或多角形，生长缓慢，培养3-5天进入快速增殖期。
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PCR管、EP管和八联排管的区别
PCR管是生物实验过程中常用的耗材，例如BBSP的PCR管，主要作用是为PCR（聚合酶链式反应）实验提供容器，可以应用于突变、测序、甲基化、分子克隆、基因表达、基因分型、医学、法医学等领域。常见的PCR管由管体、盖体组成，管体和盖体连接在一起。最早的PCR仪没有热盖，PCR过程中管底的液体会蒸发到顶部，设计成凸盖（即圆形顶）便于蒸发的液体凝集后流下
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RNA 干扰（RNAi）实验——电穿孔和电融合技术
当细胞置于非常高的电场中，细胞膜就变得具有通透性，能让外界的分子扩散进细胞内，这一现象称为电穿孔。运用这一技术，许多物质，包括 DNA、RNA、蛋白质、药物、抗体和荧光探针都能载入细胞。作为一种基因转导方法，电穿孔已被广泛用于各种细胞类型，包括细菌、酵母、植物和动物细胞；而且，它还能作为注射方法（称为电注射），把各种外源物质引入活细胞
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如何解决蛋白电泳出现的弯曲条带
减少关于条带弯曲，这一步对确保从印迹获得最准确的结果至关重要。尽管在最大体积中加载最大浓度蛋白质是有诱惑力的，但有时候减少上样量，可以确保获得一个不错的条带而不是无法辨认的印迹。使用新的抗体，甚至是新的抗体批次，需要运用总蛋白质标准曲线进行测试。这个简单的步骤可以节省时间和样品，使分析更快捷
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ELISA实验双抗夹心法的原理和操作步骤
在酶标包被板上设标准品孔10孔，在第一、第二孔中分别加标准品100μl，然后在第一、第二孔中加标准品稀释液50μl，混匀；然后从第一孔、第二孔中各取100μl分别加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl，混匀；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl弃掉，再各取50μl分别加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50μl
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一篇文章搞懂磷酸化蛋白怎么跑！
1.像了解你的孩子一样了解你的细胞，养着他并爱着他，不要粗鲁对待。2.细胞培养所有的试剂不要说我就用最好的，别人眼中的最好未必会适合你的细胞，选用合适的最重要。3.细胞间不要一次性进入太多人，避免相互干扰。4.操作时间尽量短，操作步骤尽量少。不要没有做好合理的安排，操作过程杂乱无章、手足无措。5.身体各个部分不要接触不需要接触的地方。比如实验台，培养箱内部。
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科研小白必看|手把手教你做蛋白纯化！
蛋白纯化是一项关键的技术，它通过基因工程技术将编码蛋白的核酸序列导入宿主细胞，从而实现大规模表达目标蛋白。随后，通过一系列精密的分离和浓缩步骤，可以将目标蛋白有效地从复杂的生物混合物中分离出来，以便进行进一步的研究和应用。蛋白质的溶解度与盐浓度、pH值密切相关
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如何减少流式非特异染色问题？
在一定的压力下，鞘液带着细胞通过喷嘴中心进入到流式照射室，在流式照射室的分析点，激光照射到细胞发生散射和折射，发射出散射光（包括前向散射光和侧向散射光）；同时细胞所携带的荧光素被激光激发并发射出荧光。前向散射光（Forward scatter, FSC）和侧向散射光（side scatter, SSC）检测器把散射光转变成电信号
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干货分享 | 菌落免疫印迹法
膜上免疫印迹：将膜浸泡在 5% 的非脂奶粉或 3% 的 BSA 的 TBST 缓冲液中，以防止非特异性结合。然后用特异性抗体与目标蛋白质进行孵育，4 ℃ 孵育过夜或室温孵育 2 小时。孵育后，回收抗体，含有目标蛋白的膜用 TBST 洗涤 3 次，每次 8 分钟。检测：用辣根过氧化物酶或碱性磷酸酶等酶标记的二抗与特异性抗体结合
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冰冻切片免疫荧光（IF）实验标准操作规程
固定：冰冻切片室温晾干，置于冷丙酮固定10 min，于PBS（PH7.4）中在脱色摇床上晃动洗涤3次，每次5 min。2、原修复：组织切片置于盛满EDTA抗原修复缓冲液（PH9.0）的修复盒中于微波炉内进行抗原修复。中低火10-15 min，断电间隔10 min转至中低火10-15 min，此过程中应防止缓冲液过度蒸发，切勿干片。自然冷却后将玻片置于PBS
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做WB实验，你都碰到了哪些奇怪的条带
出现黑点或黑斑，原因：试剂污染，抗体结合到封闭剂。解决方法：使用新鲜配置的试剂；过滤封闭液；选用其他类型封闭液。条带中出现边缘规则的白圈，原因：转膜时膜和胶中间有气泡，或抗体在膜上未均匀分散。解决方法：制备转膜凝胶时用玻棒赶去气泡；使用摇床孵育抗体。条带聚集变粗、拖尾、出现抹帯，原因：分离胶浓度偏大；样品有未溶颗粒；中性或疏水性蛋白析出
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常见生物样本的适宜储存温度
生物样本的长期储存，通常使用尽可能低的温度来降低样本内的生化反应，以提高样本内各种成分的稳定性。生物大分子、细胞、组织和器官的常用储存温度为-80°C（超低温冰箱）、-140°C（液氮气相或深冷冰箱）及-196°C（液氮液相），温度越低样本的稳定保存时间越长。 不同温度对生物样本的影响和保护作用
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ELISA各种常规样本的处理方法
ELISA(enzyme-linked immunosorbent assay酶联免疫吸附测定法）是免疫学中的经典实验。ELISA的基础是抗原的固相化及抗体的酶标记。结合在固相载体表面的抗原仍保持其免疫学活性，酶标记的抗体既保留其免疫学活性，又保留酶的活性。在检测时，受检标本（测定其中的抗原）与固相载体表面的抗体反应。洗涤后加入酶标记的抗体
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Elisa实验几点小建议
洗液需要现配现用，配制洗液应用新鲜的和高质量的超纯水或双蒸水。洗板机洗板时，保证洗液注满各孔，洗板针畅通。手动洗板时，加洗液要快速，没有多道移液器可以使用洗瓶，浸泡后甩板倒液要迅速干脆，倒液后在吸水纸上拍板。需要用力拍板，使孔内没有可见液体挂壁，但也不能太重，不能让样品干太久。洗板时，每孔至少加300ul洗液
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免疫组化实验中，抗原在细胞中的定位类型
免疫组化实验是一种可以通过颜色来原位显示蛋白质的有无及定位（胞外、胞膜、胞浆、胞核）的技术。对于新手来说，如何准确判断蛋白定位是一大难点。阳性染色颗粒主要定位于细胞膜表面。常见的有淋巴细胞膜抗原(如LCA、CD20、CD4、CD8等)、间皮细胞抗原(如MCA、CR、CK5/6等)、细胞膜受体(insulinR、FAS、CD25等)、黏附分子(整合素、干扰素、钙黏蛋白等)
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如何正确选用内参抗体
使用β-Actin重新探测相同的膜以达到数据标准化的目的的传统做法应该受到质疑。那么为什么会出现上述现象呢？这种现象可归因于β-Actin的丰度，β-Actin丰度远远高于细胞中的大多数其他蛋白质。结果导致β-Actin经常超载，特别是在检测低丰度蛋白质时无法区分蛋白质上样量的差异。结语：内参可以监测整个实验体系是否正常
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WB蛋白上样缓冲液怎么用
一般的抗体只能识别抗原蛋白中的线性序列结构表位（一级结构），因此，为使抗体能够达到结合该表位而需要将蛋白样本进行变性，使之打开折叠的空间结构(除抗体说明书特别标注之外，一般情况下，均使用变性蛋白样品)。还原（变性）蛋白上样缓冲液含有可完全消除蛋白高级结构的必需试剂。缓冲液中含有的SDS可断裂蛋白分子内和分子间的氢键
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探索生命的密码——caspase-3的奥秘
caspase-3是半胱氨酸蛋白酶家族的重要成员，其结构具有独特的特征。它包含一个大亚基（约17KD）和一个小亚基（约12KD），这两个亚基共同构成了活性中心。从空间结构上看，caspase-3呈现出一个紧凑而有序的构象，其中活性位点的半胱氨酸残基对于其催化功能至关重要。这种精妙的结构设计使得caspase-3能够准确地识别并切割特定的底物蛋白
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细胞、组织与植物样本中的荧光来源与处理方法
组织处理过程的影响：戊二醛、多聚甲醛以及甲醛固定会造成不同程度的自发荧光背景。如，戊二醛固定会导致显著的自发荧光增强，这是由于戊二醛与蛋白质及肽反应生成的近红外荧光物质，分子中的乙二胺和仲胺是形成 Cy3 类似物的关键成分。除了生物样本，其他类型样本中也可能存在自发荧光，如：合成材料：某些合成材料在特定波长的激发下可能产生自发荧光
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低温离心机的使用方法和注意事项
在整个实验过程中，离心机使用频率非常高，常见的处理细胞、提蛋白、提RNA、分子克隆等等环节离心机都是必不可少的实验设备，同时，离心机的种类也有很多种，包括但不限于手掌离心机、常温离心机、低温离心机及微量离心机等。低温离心机主要用于生物样品的制备，其低温环境可以保证制品不被变性或失活，从而提高制备的准确性和效率
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细胞培养|细胞冻存技术原理
细胞冻存技术：细胞冻存是将细胞储存在低温环境中，减少细胞代谢，实现长期储存的一种技术。在大多数细胞系中，细胞会随着衰老和演化不断的积累改变，造成表型和基因型的“培养漂移”，在冻存过程中，适当的操作和合适的冻存条件可以减少细胞特性的改变或丢失，起到细胞保种的作用。因而，正确且成功的冻存对于细胞的长久应用起着非常重要的作用
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细胞培养时常见的三个小问题
血清中含有生长因子可促进细胞繁殖，含有附着因子可促进细胞贴壁，同时还有一种特殊的活性能抵抗胰蛋白酶的消化作用。血清内含有丰富的矿物质、酯类和激素。最常见的血清包括：小牛血清、胎牛血清、成年马血清等。其中胎牛血清对培养要求高的细胞系效果最好。血清来源于动物， 因此必定存在批次间的差异，且生产过程中由于工艺流程的不同，哪怕是同一类型的血清也会存在质量上的巨大差异。
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何时高压灭菌，何时过滤除菌
细胞培养的核心之一是无菌操作。那么，菌从何而来？从人、物品以及环境中来。使用一次性、已灭菌的实验工具能有效降低污染引入的风险，但总有一些工具、总有一些环节是需要反复使用的，而这就需要进行清洁和灭菌。常见的2种操作是高压灭菌和过滤除菌。主要讲一下这两者的区别和注意事项。
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琼脂糖凝胶电泳的超详细全流程实验指南
电泳即利用化合物的分子量或带电荷量在稳定电场中所受阻力或者电场力的不同，从而迁移效率不同，来达到分离化合物的目的。而琼脂糖凝胶电泳，简单来说就是以琼脂糖凝胶作为电泳介质来承载化合物进行电泳。琼脂糖是D-和L-半乳糖残基通过α(1→3)和β(1→4) 糖苷键交替构成的线状聚合物。琼脂糖链形成螺旋纤维，后者再聚合成半径20~30nm的超螺旋结构
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做细胞研究必备的几个实验技能
Trizol 是一种单相溶液，由苯酚和异硫氰酸胍等组成。通过加入Trizol，能破坏细胞和溶解细胞成分，利用氯仿的萃取得到上层水相(含RNA)、界面层和下层的红色有机相(含DNA和蛋白)。得到的水层用异丙醇沉淀并经过酒精的洗涤去除杂质，能分离大小不一的各种RNA。用途：RT-PCR、分子克隆、Northern-Blot、RNA体外转录与翻译等。
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细胞复苏的基本原则与注意事项！
平时研究用的细胞，需要冷冻保存。冷冻的过程称为冻存，和冻存对应的过程，称为复苏，通俗地说就是把冻上的细胞化开。细胞复苏是一简单的试验操作，但操作中有许多需要注意的事项，在实验操作中注意细小问题，才能使复苏后的细胞状态保持良好。此外，还需注意培养环境的无菌操作，定期检查培养基的成分和pH值，以及确保足够的营养供给和适宜的气体环境(如CO2浓度)。
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细胞2D与3D培养的区别
三维(3D)培养，是一种模拟体内三维生长环境的细胞培养方式。通过让细胞聚集成3D球体或者将细胞在成分结构类似于实体组织的三维结构载体上粘附、伸展和生长，从时间和空间上共同调控细胞的增殖和分化，使组织结构和功能得以较大程度保留。与2D培养相比，3D培养更真实地再现了细胞与细胞之间以及细胞与胞外基质之间的相互作用
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Western Blot实战经验汇总
Q:膜没有完全均匀湿透。A: 使用100% methanol浸透膜。Q: 靶蛋白分子量小于10 000。A: 选择小孔径的膜，缩短转移时间。Q: 靶蛋白等电点等于或接近转移缓冲液pH值。A: 可尝试使用其他缓冲液如CAPS缓冲液（pH 10.5)或使用低pH值缓冲液如乙酸缓冲液。Q: 甲醇浓度过高。A: 过高甲醇浓度会导致蛋白质与SDS分离，从而沉淀在凝胶中，同时会使凝胶收缩或变硬
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常见的PCR反应抑制物
热稳定DNA聚合酶失活；腐殖化合物是环境样本中最常见的抑制物，其可能是通过对Mg2+的螯合作用而抑制聚合酶活性。DNA可因为一些物理、化学或酶等因素作用而出现降解，如贮存的扩增产物在扩增后电泳时，有时出现的条带模糊，就是因为DNA的降解所致。DNA一级结构不稳定，会因为水解、非酶甲基化、氧化损伤和酶降解等出现降解
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生物实验室常用仪器设备配置清单
生物实验室的检测领域知识广泛且深奥。除了需要操作各种大小的玻璃仪器外，还需要处理大量高精密度的先进设备。1. 微型离心机、 冰箱、超净工作台、电热鼓风干燥箱。2. 恒温摇床、恒温水浴、植物培育箱、电子天平。3. 分子杂交仪、医用型洁净工作台、多功能电子天平。4. 分光光度计、紫外可见分光光度计
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变性梯度凝胶电泳DGGE介绍
DGGE将凝胶设置在双重变性条件下：温度50~60 ℃，变性剂0~100%。当一双链DNA片段通过一变性剂浓度呈梯度增加的凝胶时，此片段迁移至某一点变性剂浓度恰好相当于此段DNA的低熔点区的Tm值，此区便开始熔解，而高熔点区仍为双链。这种局部解链的DNA分子迁移率发生改变，达到分离的效果。Tm的改变依赖于DNA序列，即使
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常用微生物分型技术总结
生物学分型系指通过生物化学反应和某些生物学性状的不同对细菌进行的分型。传统生化分型主要使用API 20E 系统、VITEK 2 AES系统等生化鉴定系统，是根据致病菌的生理生化特征进行的一种分型方法，目前多数微生物学实验室均能用手工或自动化系统进行这项检测，生物分型一般很可靠，并能有效地检出多种异常菌种而确定流行病的爆发
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移液器的日常使用方法与维护
对于单道移液器，正确的安装方法是把移液器末端垂直插入吸头，在轻轻用力下压的同时，左右微微转动即可上紧，切记不可用力过猛，更不能采用反复撞击的方法，这样操作会导致吸头变形而影响精度，长期以这种方式装配吸头，会导致移液器的零部件因强烈撞击而松散，甚至会导致调节刻度的旋钮卡住。对于多道移液器，移液器的第一道对准第一个吸头
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RNA 的凝胶电泳实验原理和步骤
RNA 电泳可以在变性及非变性两种条件下进行。非变性电泳使用1.0%--1.4%的凝胶，不同的RNA 条带也能分开，但无法判断其分子量。只有在完全变性的条件下，RNA 的泳动率才与分子量的对数呈线性关系。因此要测定RNA 分子量时，一定要用变性凝胶。在需快速检测所提总RNA 样品完整性时，配制普通的1%琼脂糖凝胶即可
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线粒体膜电位检测详细过程
JC-1是一种广泛用于检测线粒体膜电位△Ψm的理想荧光探针。JC-1染料表现出电势依赖性的积聚在线粒体内。正常线粒体内，JC-1聚集在线粒体基质中形成聚合物，聚合物发出强烈的红色荧光（Ex=585 nm, Em=590 nm）；不健康的线粒体由于膜电位的下降或丧失，JC-1只能以单体的形式存在于胞浆中，产生绿色荧光
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原代肝细胞分离、培养及SOP
右手取静脉注射针平插入门静脉远端，左手用镊子夹住针头及血管，防止其脱落，右手轻轻的松开，左手保持不动，启动泵，开始导入预热至37度的无钙灌流液（G2），待充盈立起来（有的肝不明显），右手持手术剪剪断下腔静脉，放流，使血液和灌流液流出。可观察到肝叶垂下来，然后右手持镊子夹住下腔静脉，停止放流
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双分子荧光互补实验 BiFC实验原理及流程
BiFC是一种直观、快速地判断目标蛋白在活细胞中的相互作用和定位的技术。将荧光蛋白分成两个不具有荧光活性的分子片段（N-fragment、C-fragment），然后N-fragment和C-fragment分别融合两个目标蛋白A、B，如果A与B蛋白发生互作，则N-fragment和C-fragment在空间上靠近，就会形成完整的具有活性的荧光蛋白分子
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蛋白互作之双分子荧光互补技术（BiFC）问题解答
双分子荧光互补技术（BiFC）是一种常用的蛋白质相互作用检测方法，它通过将两个不会相互作用的荧光蛋白的两个片段标记到被测蛋白的两个部分上，形成一个双分子体系。在这个体系中，只有当被测蛋白相互作用时，才能使两个荧光蛋白的片段结合，从而产生荧光信号。在使用双分子荧光互补技术（BiFC）时，常会遇到一些常见问题
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蛋白-DNA互作：凝胶阻滞实验EMSA原理及实验步骤
凝胶阻滞（Electrophoretic mobility shift assay, EMSA）实验是体外分析DNA与蛋白质相互作用的一种特殊的凝胶电泳技术。其原理为蛋白质与核酸分子结合后将大大增加其相对分子质量，而凝胶电泳中核酸的迁移率与其相对分子质量成正比，因此没有结合蛋白质的核酸片段跑得快，而与蛋白质结合形成复合物的核酸则跑得慢
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蛋白互作：荧光素酶互补成像技术 LCI原理及实验
萤火虫荧光素酶片段互补成像技术（LCI）是近年来形成的研究蛋白互作的新技术，把2个目标蛋白分别连接于萤火虫荧光素酶的C端 （CLuc：398–550 aa)和N端（NLuc：2–416aa）。如果2个蛋白互作，N段和C端接近形成有活性的荧光素酶，荧光素酶分解萤光素底物并产生荧光。将LCI技术与烟草瞬时表达技术相结合来研究植物蛋白的相互作用
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蛋白互作之免疫共沉淀co-IP实验常见问题及解决方案
免疫共沉淀（co-Immunoprecipitation，co-IP）是以抗体和抗原之间的专一性作用为基础的用于研究蛋白质相互作用的经典方法，是确定两种蛋白质在完整细胞内生理性相互作用的有效方法。其原理是特异性抗体捕获样品中的靶蛋白，形成抗体-靶蛋白复合物，然后利用能够与抗体结合的支持物来固定和沉淀复合物，此时与靶蛋白相互作用的蛋白也会被沉淀下来
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免疫荧光（IF）染色实验步骤及原理
首先，取适量的抗原修复液置于烧杯中，确保修复液能够覆盖切片架，然后盖上盖子。待修复液煮沸后，将预处理的切片放入其中，盖上盖子，持续加热修复液约15分钟。待完成后，将样品移至通风厨房中自然冷却。常见的抗原修复液种类包括Tris-EDTA（pH 9.0）抗原修复液、EDTA（pH 8.0）抗原修复液、柠檬酸（pH 6.0）抗原修复液以及蛋白酶K抗原修复液等
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原来小小的裂解液中“破膜组分”还有这样的大大的功能
去污剂根据其对蛋白质结构的影响，可以分为变性去污剂和非变性去污剂。变性去污剂如SDS，能够破坏蛋白质的天然结构，使其变性，这在蛋白质电泳等需要蛋白质完全展开的实验中非常有用。而非变性去污剂如Triton X-100，能够保持蛋白质的天然构象，适用于需要保持蛋白质活性的实验。在选择去污剂时，需要根据实验目的
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细胞培养基可以放在紫外灯下照吗？
在添加生长因子和血清成分时，应尽量减少光线暴露，尤其是在窗口附近或日光灯下。使用预配好的培养基，这些培养基通常已经考虑了光敏感性，并采取了相应的保护措施。通过上述详细的操作步骤和注意事项，我们可以更好地理解紫外灯对细胞培养基的潜在影响，并采取相应的措施来保护培养基的完整性。这不仅有助于提高实验的成功率，也是确保实验结果可靠性的关键
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为什么在所有的基础实验中，WB实验这么「玄学」？
Western Blot（WB）实验广泛用于检测特定蛋白质的表达和定量分析。然而，由于其操作步骤的复杂性和结果的多变性，WB实验常常被科研人员戏称为「玄学」实验。WB实验之所以显得「玄学」，主要是因为其步骤繁多且对操作条件极为敏感。然而，通过细致的操作、合理的实验设计和高质量的试剂使用，可以将「玄学」转变为有迹可循的科学
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一步法预混胶超详细配制教程
一步法预混胶，顾名思义，是一种预先混合好的凝胶溶液，用户只需添加适量的水或缓冲液即可使用。这种预混胶广泛应用于SDS-PAGE电泳、DNA/RNA凝胶电泳等多种实验场景，因其简化的配制步骤和一致的凝胶质量而受到科研人员的青睐。选择一步法预混胶可以节省宝贵的实验室时间和资源。传统的凝胶配制需要精确称量和混合多种组分
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抗真菌新策略：抑制线粒体磷酸盐转运
线粒体磷酸盐载体 (PiC) 属于线粒体载体家族中的一员，位于线粒体内膜上，PiC 的主要作用是把胞浆中的磷酸 (Pi) 转运到线粒体基质中，促进 ADP 氧化磷酸化为 ATP，使线粒体氧化磷酸化顺利进行。当参与线粒体功能调节的分子受抑制或改变时，会导致细胞的凋亡或者坏死。由于人与真菌之间的复杂且密切的关系，有效的抗真菌药物的开发仍然是一个艰巨的挑战
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手把手教学｜细胞核蛋白的提取步骤及注意事项
使用胰酶将贴壁细胞消化下来，把这些细胞收集到1.5mL EP管中。4℃以300g的离心力离心5min。离心完成后，用PBS缓冲液对细胞进行洗涤(2次)。弃上清，加入体积为细胞沉淀5倍的预冷Buffer A（每20μL的细胞沉淀加入100μL的Buffer A），之后轻轻吹打，使细胞在Buffer A中重新悬浮起来。3.将上述细胞悬浮液在冰上放置10min
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一次诱导出六个蛋白的原核表达protocol
选取的表达菌株:Rosette是一种含有三个稀有密码子的表达菌株，因此更适合用于这一目的。1.将Rosette菌株置于冰浴中，孵育30分钟，然后进行热激处理，在42°C下保持45秒，接着放入摇床中，以200rpm的速度在37°C下培养1小时。2.取转化好的菌株涂抹到含有相应抗性的LB培养基上，在37°C下孵育12-18小时。3.从平板上选取8-10个生长良好的单克隆菌落
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AB-PAS染色步骤及结果分析
糖原染色是病理学中常规的染色方法之一，该法常用来显示糖原和其他多糖，该染色液不仅能够显示糖原，还能显示中性黏液性物质和某些酸性物质。阿利新蓝和PAS技术联合使用可鉴别同一组织切片中的中性黏蛋白和酸性黏蛋白。这种技术也常用作广泛检测黏蛋白的手段。阿利新蓝可将唾液黏蛋白、硫黏蛋白和蛋白多糖染成蓝色。PAS技术可将中性黏蛋白染成深红/红紫色，同时将既含中
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细胞凋亡检测之TUNEL染色荧光法
细胞在发生凋亡时，会激活一些DNA内切酶，这些内切酶会切断核小体间的基因组DNA。细胞凋亡时抽提DNA进行电泳检测，可以发现180-200bp的DNA ladder。基因组DN A断裂时，暴露的3'-OH可以在末端脱氧核苷酸转移酶(Terminal Deoxynucleotidyl TransferaseTT)的催化下加上绿色荧光探针荧光素(FITC)标记的dUTP(fluorescein-dUTP)，从而可以通过荧光显微镜或流式细胞仪进行检测
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不同组织的冰冻切片注意事项
组织被冷冻时，组织中的水变成冰，而在这种状态下，组织变坚硬。冰冻块的硬度可通过改变组织温度来改变。降温会使组织块更加坚硬，提高温度使组织变软。大多数非脂肪不固定组织的切片最好在-20到-25℃制作。冰冻切片的制作过程中，常有许多因素影响其质量，并进一步影响结果的观察和分析，甚至会影响诊断，造成无法挽救的后果，对此我们经过比较及总结得出如下经验。
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实验动物「异常死亡」原因分析
环境温度是实验动物饲养中需控制的最关键的环境参数。除灵长类，大多数实验动物汗腺不发达或者无汗腺，高温时散热困难，难以维持体温恒定。对于动物房里的小鼠来说，以夏天的室外温度，在没有降温措施的情况下，直接暴露在室外，很容易造成死亡。所以，在运输过程中造成的老鼠死亡非常常见，需要格外小心避免。
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ChIP技术经验分享
染色质免疫沉淀（ChIP）用于分析基因组中特定染色体区域中组蛋白乙酰化状态的实验方法，被用来研究细胞内DNA与蛋白质相互作用。是目前确定与特定蛋白结合的基因组区域或确定与特定基因组区域结合的蛋白质的最好方法。甲醛交联是 ChIP 实验非常关键的一个步骤
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缓冲盐的正确添加方式
在色谱分析过程中常常需要使用缓冲盐来调节流动相的pH 值，缓冲盐的不当使用对色谱柱可能造成柱压升高、柱效下降以及使化合物的保留时间发生变化等影响，缓冲盐使用不当对色谱柱的影响及解决办法。缓冲盐是指对pH有缓冲能力的盐，能够让pH维持在一个恒定的数值
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细胞培养常见问题解答
培养基保存在4℃条件下，培养基内的CO2会逐渐溢出，造成培养基越来越偏碱性，而培养基中酸碱指示剂（通常为酚红）的颜色也会随着碱性增加而偏紫。培养基偏碱性将会造成细胞生长停滞或死亡。可以在使用前旋松瓶盖（用于培养箱与培养基瓶中气体交换），在CO2培养箱中孵育培养基10-15分钟，来校正溶液PH值
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细胞免疫荧光实验步骤
接种密度要合适，一般以细胞在培养 24 - 48 小时后能达到 70 - 80% 汇合度为宜。例如，对于 HeLa 细胞，在 6 孔板中每孔接种约 1 - 2×10^5 个细胞。用含有适当比例血清（如 10% 胎牛血清）和抗生素（如 100 U/mL 青霉素和 100μg/mL 链霉素）的完全培养基，在合适的培养条件下
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外周血RNA提取实验步骤
使用含有抗凝剂（如 EDTA 或肝素）的采血管采集外周血。一般静脉穿刺采集 3 - 5 mL 血液。EDTA 抗凝剂可以更好地保存 RNA，因为肝素可能会抑制后续的一些酶反应。采集后轻轻颠倒采血管，使抗凝剂与血液充分混合，防止血液凝固。应尽快进行 RNA 提取，若不能及时提取，可将样本暂时保存在 4°C 冰箱中，但最好在数小时内处理
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蛋白质互作研究方法|一文搞定
很多真核生物的位点特异转录激活因子通常具有两个可分割开的结构域，即DNA特异结合域（DNA-binding domain, BD）与转录激活域（Transcriptional activationdomain, AD）。这两个结构域各具功能，互不影响，但一个完整的激活特定基因表达的激活因子必须同时含有这两个结构域
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干货分享 | 信号通路研究，原来如此简单
信号通路具体指的是一系列由酶催化的反应，它们负责将细胞外的信号分子（如激素、生长因子、细胞因子、神经递质以及其他小分子化合物，统称为配体，Ligand）传递至细胞内，并触发细胞内的效应。这些信号分子在细胞膜上与特定受体结合，激活细胞内的信号传递机制，从而引发细胞的特定生物学反应
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常见的三种蛋白定量法，孰优孰劣，怎么选择？
蛋白质作为生命活动的物质基础之一，也是生命活动的主要承担者，是科研工作中的重要研究对象。而在这些精细化研究工作中，测定蛋白浓度，定量实验，是探索蛋白生物学功能不可或缺的一个环节。依托不同的科学原理，目前已经发展出多种不同的蛋白测定方法，其中BCA法、Bradford法和UV法在科研实验中应用最为广泛
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免疫荧光（多重免疫荧光）实验操作步骤
免疫荧光单标标记即利用抗原抗体特异性结合原理，在一张切片上的一个抗原进行荧光标记，从而实现定位，定性，半定量的分析。免疫荧光双重标记即利用抗原抗体特异性结合原理，在同一张切片上两个抗原进行同时标记，从而实现定位，定性，半定量的分析。
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Phos-tag PAGE磷酸化实验怎么做?
Phos-tag PAGE磷酸化实验是一种用于研究磷酸化蛋白的实验方法，它利用了Phos-tag这种能与磷酸化部位结合的化合物，使得磷酸化的蛋白在凝胶中移动变慢，从而与非磷酸化的蛋白分离。Phos-tag的溶解与保存：按照推荐的方法溶解Phos-tag，并妥善保存，避免溶解过程中出现白色悬浮颗粒。
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细胞培养，防止污染，你有哪些技巧？
防止细胞培养污染需要从多个方面入手，包括严格的无菌操作、高质量的试剂与培养基、良好的细胞库管理、规范的操作流程、定期的环境监测以及应急处理与记录等。这些措施的实施将有助于确保细胞培养过程的顺利进行和实验结果的准确性。
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【微生物检验技术】细菌的非培养检测方法
动物实验是临床细菌学检验的重要组成部分，并且有时是其他实验所不能取代的。其主要用途有分离和鉴定病原微生物；测定细菌的毒力；制备免疫血清；建立致病动物模型；动物的血液是配制细菌培养基的必需材料；用于生物制品或一些药物的安全、毒性、疗效检验
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特殊蛋白WB实验技巧详解
Western blotting（免疫印迹分析）是一种常用的蛋白质检测技术，用于检测样品中特定蛋白质的存在和定量。WB作为一个最为基础的生命科学检测方法之一，经过长时间摸索与分析，目前已经有了一系列适配性较高的通用WB实验检测方案和流程。但是蛋白质作为一个特异性较强的检测指标
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细胞自噬：细胞、组织的更新与重构
自噬是存在于真核生物中，一种高度保守的蛋白质或细胞器降解的过程，自噬发生时，一些损坏的蛋白质或细胞器被双层膜结构的自噬小泡包裹，最终送到溶酶体中降解。降解产生的氨基酸等小分子物质可被细胞再利用，也能用于能量的产生。细胞自噬是细胞成分降解和回收利用的基础，细胞将内部损坏
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细胞内的自我保护机制：吞噬作用
吞噬作用是许多生物体内特定细胞（如巨噬细胞和中性粒细胞）的一种重要生理过程。在这一过程中，这些特殊的细胞通过细胞膜的形成将异物（例如细菌、病毒或其他细胞碎片）包裹到细胞内形成吞噬体。随后，吞噬体与溶酶体融合，这样就可以将这些异物降解、消化，有助于清除体内的异物
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巨噬细胞/DC细胞/NK细胞-培养操作详解
单核-巨噬细胞系统包括血液中的单核细胞和组织中固定或游走的巨噬细胞，具有吞噬功能。单核细胞来源于骨髓干细胞，在骨髓中经前单核细胞分化发育为单核细胞，然后由骨髓释放入血，经过血液循环经过各个组织，分化成组织中的巨噬细胞。
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集落刺激因子（CSF）：细胞增殖&分化的Conductor
集落刺激因子（Colony Stimulating Factor，CSF）是一类在生物体内起着重要作用的蛋白质。它们主要功能是刺激和调控造血祖细胞的增殖和分化，从而参与到血细胞的生成过程中。根据它们作用的细胞类型和产生的效果，集落刺激因子被进一步细分为多种类型，包括有SCF、G-CSF、M-CSF、GM-CSF、EPO、TPO 等。
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免疫探秘：巨噬细胞诱导分化的解决方案
巨噬细胞作为免疫系统的核心组成部分，发挥着重要的免疫防御和炎症调控功能。为了更深入地了解它们的生物学特性和功能，小鼠巨噬细胞培养成为不可或缺的研究手段。巨噬细胞的生长和分化依赖于决定谱系的细胞因子，例如巨噬细胞集落刺激因子（M-CSF）和粒细胞巨噬细胞集落刺激因子（GM-CSF）
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细胞因子在CAR-T培养中的协同魔法
嵌合抗原受体T细胞（Chimeric Antigen Receptor T-Cell, CAR-T）疗法是一种革命性的癌症治疗方法，通过工程改造患者自身的T细胞，使其能够识别并攻击癌细胞。尽管CAR-T疗法在治疗某些血液癌症中取得了显著的疗效，但其在实体瘤治疗中的应用仍面临许多挑战。细胞因子在CAR-T细胞的扩增、存活和功能调节中起着至关重要的作用。
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细胞共培养的方法和注意事项
细胞共培养（co-culture）是将两种或多种不同类型的细胞同时培养在同一系统中，使它们在共享的环境中进行相互作用。这种技术用于模拟体内的细胞微环境，研究不同细胞之间的相互作用及其对生物学过程（如信号传导、细胞生长、分化等）的影响。
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免疫组库的“BCR-seq”
免疫组库(Immune repertoire，IR)，是指在任何指定时间，某个个体的循环系统中所有功能多样性B细胞和T细胞的BCR和TCR的总和。T淋巴细胞和B淋巴细胞是负责适应性免疫应答的主要细胞，其抗原识别主要依赖于T细胞受体（TCR）和B细胞受体（BCR）。这两类细胞表面分子的共同特点是具有多样性，可以识别多种多样的抗原分子。
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细胞免疫荧光（IF）超全步骤
非特异性染色较多：1）固定液残留，这里需要缩短固定时间并且在封闭液中加甘氨酸，并且抗原修复也可以帮助解决非特异性染色；2）二抗残留，二抗需要用带有吐温20 的 PBS 溶解，只要荧光显微镜的强度还可以增大，那么就可以增加吐温洗脱掉非特异性染色。
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实验课堂-Western Blot 转膜失败的处理方法！
检查转膜设备：定期维护转膜仪，确保电场均匀，避免因设备问题导致转膜失败。在实验室操作中，还有一些小贴士值得注意：在转膜前，使用甲醇激活 PVDF 膜，以增加蛋白的结合能力；使用足够的转膜缓冲液，确保凝胶和膜完全浸没；转膜过程中，保持低温可以防止蛋白降解。
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组织蛋白提取全教程！
在整个组织蛋白提取过程中，严格按照实验步骤进行操作至关重要。精确控制试剂的用量、裂解时间、离心条件等参数，确保实验结果的准确性和可重复性。例如，在使用离心机时，需确保离心机平衡良好，避免因不平衡导致离心管破裂或样品损失；在进行蛋白质定量时，严格按照试剂盒说明书操作，准确制备标准曲线，以获得可靠的蛋白质浓度数据。
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如何正确进行Transwell 实验？
Transwell 孔板具有独特的上下两室设计，中间隔以选择性通透膜。上室通常用于接种细胞，下室则放置含有各种诱导因子（如趋化因子、生长因子等）的培养基。在适宜的培养条件下，上室中的细胞受到下室诱导因子的吸引或在自身内在机制的驱动下，尝试穿过通透膜向下方迁移。
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如何用CRISPR - Cas9 进行慢病毒转染？
选择合适的细胞系是实验成功的关键第一步。以常用的 HEK293 细胞为例，在实验前需确保其来源可靠、状态良好且无支原体污染。对细胞进行复苏、培养和传代，使其达到对数生长期，此时细胞活力旺盛，具有较高的转染效率。在培养过程中，严格控制培养环境的温度（37°C）
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一文搞懂细胞周期检查点
Chk1 和 Chk2 是细胞应对 DNA 损伤的重要蛋白。Chk 抑制剂能够使癌细胞在修复不完全的情况下继续分裂，从而增加癌细胞死亡。临床上 Chk1/2 抑制剂被用于联合 DNA 损伤剂（如顺铂或紫杉醇）治疗多种癌症。
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不同浓度的凝胶对目标蛋白条带分离的具体影响是什么？
在研究细胞内的信号转导蛋白，如分子量在 30 - 70 kDa 的蛋白激酶时，15% 的凝胶可以使这些小分子蛋白的迁移速度适中，能够有效地将它们与其他小分子蛋白或者杂质蛋白分离开来。因为小分子蛋白在小孔隙的凝胶中迁移时，会受到凝胶孔径的适当限制，使得它们的迁移速度产生差异，从而形成清晰的条带。
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ELISA实验干货分享
在ELISA实验中，首先将待检样本中的抗原与固相载体表面的抗体发生特异性反应，随后经过洗涤步骤，加入酶标记的抗体使其与抗原结合。接着加入酶催化底物，酶催化底物转化为有色产物，其量与待检物质的浓度成正比。通过测定有色产物的强度，可以对样本中待检物质的含量进行准确的定性或定量分析。
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细胞划痕实验入门：解析细胞迁移的基本操作
细胞划痕实验，又称为伤口愈合实验，是一种常用的体外实验方法，用于评估细胞迁移能力的指标。其基本原理是在培养皿中的单层细胞上机械划造一个空缺区域，随后观察细胞在培养液中的迁移情况。在实验过程中，划痕边缘的细胞会发挥迁移作用，逐渐填补划痕区域，从而使划痕部位逐渐闭合
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实验干货||蛋白电泳相关溶液配制
1.准备500 mL的玻璃烧杯、500 mL的蓝盖瓶、500 mL、100 mL和200 mL的量筒，并将它们取至配液室。2.按照操作规程，称取考马斯亮蓝染色液R250：0.5 g，在玻璃烧杯中配制。用200 mL量筒量取125 mL异丙醇，用100 mL量筒量取50 mL冰醋酸，加入烧杯中。同时用500 mL量筒取300 mL工艺用水并加入混合物中
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小白必看之质谱入门——质谱是怎样做到定量的？
同位素稀释是质谱分析中的一种特殊定量方法。这种方法利用同位素标记物质，通过加入已知比例的同位素内标来实现对信号的绝对强度测量转化为对信号相对比例的测量。正因为不同同位素之间在质谱中具有不同的质荷比m/z，同位素内标能够被准确地区分出来，从而提高实验的准确性。
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超清晰教程细胞划痕实验\伤口愈合实验
细胞划线用200pL 移液枪的枪头比着直尺，垂至于6孔板中底部的横线自上而下划过细胞层。注意用力要均匀，枪头不能倾斜。冲洗细胞弃培养基，用无菌PBS 轻柔的清洗细胞2次，洗去不贴壁的即刚刚划掉的细胞。加入新鲜的无血清的培养基，继续于37°C培养箱中培养。加药处理细胞正常处理、培养细胞
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Image J定量分析免疫组化，IHC Toolbox法！
在免疫组织化学（IHC）信号定量中的核心思想是应用图像处理技术从原始图像中准确扣除细胞核信号（通常显示为蓝紫色），留下DAB显色信号（一般为红棕色）。随后，转换为灰度图像以获取光密度值而非灰度值。在图像处理中，灰度值代表像素的明暗程度，数值越高表示像素越白，数值越低表示像素越黑。
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一篇文章搞懂磷酸化蛋白怎么跑！
Western Blot是一种关键的实验方法，用于检测蛋白质的磷酸化状态。与检测非磷酸化蛋白相比，其操作并无太大差异。然而，磷酸化蛋白通常只占细胞总蛋白的一小部分，且容易在实验处理过程中失去磷酸化修饰。导致Western Blot检测磷酸化蛋白失败的原因有很多，例如可能出现封闭问题、抗体选择问题
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科研小白必看|手把手教你做蛋白纯化！
蛋白纯化是一项关键的技术，它通过基因工程技术将编码蛋白的核酸序列导入宿主细胞，从而实现大规模表达目标蛋白。随后，通过一系列精密的分离和浓缩步骤，可以将目标蛋白有效地从复杂的生物混合物中分离出来，以便进行进一步的研究和应用。蛋白质的溶解度与盐浓度、pH值密切相关
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蛋白质免疫印迹实验原理及操作步骤详解
Western blot（也称为蛋白质免疫印迹）是一种常用于研究中分离和鉴定蛋白质的技术。它利用 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳 (SDS-PAGE) 来分离指定样品中包含的各种蛋白质，然后将分离的蛋白质转移到硝酸纤维素或 PVDF 膜上，接下来将膜与对感目标蛋白质的特异抗体一起孵育。
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RNA Dot blot 实验流程
1.将已知浓度的样本样品，用无酶离心管进行梯度稀释（并上操作）2.短暂离心，然后将RNA样品95℃加热3分钟，结束后迅速转到冰上冷却，防止重新形成二级结构。3.用1ml枪头粗端在NC膜上留下圆形印痕并用铅笔描圈，以引导加样，并将 NC膜裁剪成合适的尺寸，转移至干净的培养皿中。
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常见的融合蛋白表达标签——总结
在重组蛋白中，常常将目的蛋白N端或C端与其他特定蛋白、多肽或寡肽标签进行融合表达，形成既能保留天然蛋白的大部分结构，又能实现增溶，防降解，促进分泌，便于纯化的功能；本文简要介绍生物药研发生产过程中常见的融合蛋白标签；
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浅谈发酵后蛋白的分离纯化技术
珠磨法是指在等量的细胞悬液和涡旋混合器中加入玻璃珠或磁珠用于通过固体剪切的作用来使细胞裂解的方法。这种细胞裂解法的机械剪切力足够温和，可以保持细胞器的完整性，具有较高的细胞破碎率可大规模使用，适用于各种细胞破碎。缺点是：大分子内容物较易失活，并且浆液分离较为困难。
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如何提高细胞样本的蛋白提取浓度？
裂解液的选择对蛋白提取的效率和质量有着至关重要的影响。RIPA裂解液是一种常用的强力裂解液，适合用于提取细胞和组织中的蛋白质。它的主要成分包括Tris缓冲液、NaCl、去污剂（如Triton X-100、sodium deoxycholate和SDS）、焦磷酸钠、β-甘油磷酸、EDTA、Na3VO4和peptide inhibitors等。这些成分可以有效地裂解细胞，并抑制蛋白质的降解。
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血清或血浆的western blot该怎么做？
在应用WB法检测血清或血浆中蛋白时，需要了解该蛋白在血浆或血清中的丰度问题，以方便选择适当的上样质量。另外，在应用血清或血浆样品做WB时，低丰度蛋白检出率极差，白蛋白会干扰电泳的分辨率和转膜效率。所以在进行血清或血浆样本的WB实验前，将白蛋白去除可以有效的提高低丰度蛋白的检出率
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Western blot没有加loading buffer就煮沸的蛋白样品是不是就不能用了？
如果不小心将蛋白原液煮沸，可尝试以下方法进行修复：1.稀释：尝试将煮沸的蛋白原液稀释至较低的浓度。较低的浓度可以使蛋白质更易于溶解，并减少蛋白质聚集的可能性。2.重新准备样品：如有足够的材料，重新收集样品并准备新的蛋白样品。这可以确保蛋白质没有被过度变性和聚集
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DNA保存管，你选择对了吗？
在实验过程中，样品与容器之问的相互作用往往会对实验结果产生显著影响。有些离心管由于材质或表面处理不当，容易对样品中的生物分子、蛋白质、核酸等产生吸附作用，导致实验结果失真。具体来说，离心管低吸附技术通过表面处理或者选择性吸附剂的使用降低离心管内壁的亲水性
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离心机的参数，g和rpm你设置对了吗？
RCF 代表相对离心力，指的是在离心机中作用在样品上的力的大小，是测量离心机中施加到样品上的加速度的单位。RCF 以重力单位表示，RCF 更广为人知的名字是 g 力。它表示离心机旋转动作产生的力。RCF 可以使用 RPM 和离心机转子的尺寸来计算。要找到转子的最大 RCF，必须知道其最大速度和半径。了解离心过程中旋转中心到转子底部的距离同样重要。
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缓冲液解析，彻底搞懂 TBS、TBST、PBS、PBST！
对于大多数Western blot蛋白质指标来说，PBST和TBST是通用的选择。然而，在检测磷酸化蛋白时，使用PBST可能会带来一些困扰：一方面，磷酸盐可能会影响碱性磷酸酶结合的抗体，并增加磷酸特异性抗体的背景信号（但对HRP标记的抗体没有影响）；另一方面，磷酸化特异性抗体可能会与PBST中的磷酸盐结合
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微生物培养的污染因素及预防方法
培养箱内的风速和风向对于保持温度的均一性以及避免污染都非常重要。一般来说，适当的风速和风向可以帮助培养箱内的温度保持均一，有利于微生物的正常生长。然而，当风速过大时，可能会导致培养基干裂，从而影响培养结果的准确性。另外，药典要求培养皿倒置培养，这是因为经过多次验证发现
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酶生物试剂试验原理及注意事项
DNA重组技术的第一步是从不同来源的DNA上将待克隆的DNA片段特异性切下，同时在载体DNA分子（一般为质粒DNA）上打开相应的缺口，然后将两者连接成重组DNA分子。这一特异性的切割过程常由特定的限制性核酸内切酶来完成。目前在细菌中发现有600多种限制性核酸内切酶，根据其性质的不同可分为三大类
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【避坑】PCR实验的污染源差点中标！
PCR实验室又叫基因扩增实验室。PCR是聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction)的简称。是一种分子生物学技术，用于放大特定的DNA片段，可看作生物体外的特殊DNA复制。通过DNA基因追踪系统，能迅速掌握患者体内的病毒含量，其精确度高达纳米级别。在实际实验过程中有哪些问题需要注意的
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细胞HE染色实验指南
苏木精为碱性天然染料，可使细胞核着色。细胞核内染色质的成分主要是DNA，在DNA的双螺旋结构中，两条核苷酸链上的磷酸基向外，使DNA双螺旋的外侧带负电荷，呈酸性，很容易与带正电荷的苏木精碱性燃料以离子键或氢键结合而被染色。苏木精在碱性溶液中呈蓝色，所以细胞核被染成蓝色。
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纯水机的正确使用的注意事项！
对于纯化柱的使用期限来说，超过生产商推荐的使用期限后仍继续使用该纯化柱并不是一个良好的操作规范，即使机器在当下仍能产出质量合格的纯水。因为对于一些纯化技术来说，如离子交换树脂饱和后，大量的杂质往往会突然地或是无预兆地释放出来，可能对您正在进行的关键实验带来潜在影响。
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蛋白质纯化经验指南（含避坑清单）！
蛋白纯化要利用不同蛋白间内在的相似性与差异，利用各种蛋白间的相似性来除去非蛋白物质的污染，而利用各蛋白质的差异将目的蛋白从其他蛋白中纯化出来。每种蛋白间的大小、形状、电荷、疏水性、溶解度和生物学活性都会有差异，利用这些差异可将蛋白从混合物如大肠杆菌裂解物中提取出来得到重组蛋白。
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【干货】食品中农药残留的检测方法汇总！
高效液相色谱法是在液相色谱柱层析的基础上，引入气相色谱理论并加以改进而发展起来的色谱分析方法。高效液相色谱法在农药残留分析的应用越来越广泛，是因为高效液相色谱法能适合分析沸点高而不太容易汽化、热不稳定和强极性农药及其代谢产物；且可以与柱前提取、纯化及柱后荧光衍生化反应和质谱等联用
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5步掌握离子色谱知识锦囊
色谱分离过程中,样品中的离子与流动相中对应离子进行交换,在一个短的时间,样品离子会附着在固定相中的固定电荷上。由于各种样品待测离子和固定相树脂间的亲和力不同,吸附在固定相上的离子和流动相的离子发生竞争交换反应,各种离子按先后顺序被洗脱出来。
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8个指标衡量实验室是否合格！
一个实验室是不是合格、标准？从这8个方面着手比对，答案立见分晓。实验室工作的最终成果是检测报告，检测报告就是实验室的产品，同样有一个质量行程过程。为了确保检测数据的准确可靠，以确保检测报告的质量，就必须明确它的质量行程过程和过程的各个阶段可能影响检测报告质量的各项因素。
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RNA 转染实验效率低下的原因
利用生物信息学软件如 RNAfold 等对 RNA 序列进行二级结构预测。分析预测结果中是否存在可能影响转染的稳定二级结构，如茎环结构、发夹结构等。对于具有复杂二级结构的 RNA，可以尝试通过优化实验条件（如提高转染温度、使用特殊的转染试剂等）或对 RNA 进行适当的预处理（如热变性等）来降低其对转染效率的影响
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【险中招】HPLC流动相的十个错误操作
高效液相色谱法（HPLC）是分析化学中广泛使用的一种技术，用于分离、鉴定和量化混合物中的成分。高效液相色谱分离的成功与否在很大程度上取决于流动相的特性，流动相是流经固定相的液体溶剂。应根据分析物的化学性质和所用固定相的性质仔细选择流动相。
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【知识贴】搞清离心机单位换算！
在牛顿力学中，离心力是一种惯性力（也称为“虚拟力”或“伪力”），当在旋转的参照系中观察时，它看似作用于所有物体，它被指向远离平行于旋转轴并通过坐标系原点的轴。离心技术的原理是利用物体高速旋转时产生强大的离心力，使置于旋转体中的悬浮颗粒发生沉降或漂浮，从而使某些颗粒达到浓缩或与其他颗粒分离之目的。
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实验课堂-Western Blot内参一致性判断方法
在 Western Blot（WB）实验中，内参的一致性对于准确分析目标蛋白的表达水平至关重要。传统上，我们依赖蛋白定量方法如 BCA 法来确保上样量的一致性，但在实际操作中，蛋白定量常常面临挑战，内参不齐的情况时有发生。虽然肉眼观察法在判断内参齐不齐方面具有一定的可行性和优势，但也存在局限性
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实验分子：酶分子的抑制、失活及保存策略
酶是由活细胞产生的具有高度特异性和高效催化效能的蛋白质或 RNA。根据其组成成分，酶可分为单纯酶和结合酶。单纯酶仅由蛋白质构成，而结合酶则由酶蛋白和辅助因子组成。辅助因子又分为金属离子（常为辅基，起传递电子作用）和小分子有机化合物（参与传递氢原子、电子或某些化学基团，或起运载体作用）
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实验科普：一文带你读懂实验室用水！
在科研实验的领域中，水作为一种不可或缺且至关重要的试剂，其质量的优劣直接关系到实验结果的准确性和可靠性。因此，对于科研人员而言，深入且全面地了解实验室用水的相关知识，无疑是一项必备的素养和技能。通过测量水中两片电极间的电阻值来确定电阻率，其单位为 MΩ.cm
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WB实验该不该使用预制凝胶？
在生命科学研究领域，Western Blot（WB）技术是一种广泛应用于蛋白质检测和分析的重要方法。而凝胶制备作为 WB 实验的关键步骤之一，其质量和稳定性对实验结果有着至关重要的影响。近年来，商品化预制胶逐渐走入科研人员的视野，为实验操作带来了新的选择。
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实验课堂-如何使用NanoDrop测定蛋白质浓度？
准确测定蛋白质浓度是众多实验的关键步骤之一。NanoDrop 分光光度计作为一款广泛应用于实验室的仪器，大家熟知其在核酸浓度检测方面的出色表现，但它同样具备测定蛋白质浓度的强大功能。本文将详细解读如何使用 NanoDrop 测定蛋白浓度，包括其原理、操作流程以及相关注意事项，为科研工作者提供实用的技术指导。
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离心机没配平的风险谁懂？
对于固定角转子的配平，通常只需牢记「中心对称法」。这意味着当安排样品时，确保在每个孔中放置的样品在转子的对称位置。在进行12孔固定角转子的配平时，应当仔细检查每个孔，确保样品放置的位置对称且平衡。这样能够保证在离心过程中样品受到均匀的离心力，并最大限度地减少离心过程中可能出现的误差。
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实验解析｜蛋白浓缩超滤管的选择原则和注意事项
超滤管（也称为离心超滤管或超滤离心管）是一种利用离心力驱动，分离液体中不同分子或粒子的膜过滤设备。超滤管主要由盖子、过滤装置（核心为超滤膜）和离心管等部分组成。可用于浓缩含有抗原、抗体、酶、核酸（DNA/RNA 样品，单链或双链）、微生物、柱洗脱液和纯化样品的生物样品
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WB配胶：提前配胶与现配现用的区别
批量操作便利性：提前配胶能够实现批量配置，一次配置的凝胶可供多次使用。对于需要进行大量 WB 实验的实验室来说，这可以节省时间和精力。例如，在一些高通量的蛋白质组学研究中，每天可能需要对多个样本进行检测，如果每次都现配现用，会大大增加实验人员的工作量。
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细胞免疫荧光实验 Protocol 详解！
细胞免疫荧光实验是细胞生物学研究中常用的技术手段，它能够帮助科研人员直观地观察细胞内蛋白质的定位和表达情况细胞免疫荧光实验通过特异性抗体与细胞内相应抗原结合，再利用荧光标记的二抗进行检测，从而实现对细胞内蛋白的可视化。这一技术在细胞结构与功能研究、疾病机制探索等方面具有重要应用。
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荧光片拍摄：封片与不封片的区别在哪里?
实验者在进行细胞荧光实验时，使用共聚焦小皿直接进行操作，全程在皿内完成。在拍摄环节，考虑到网上和说明书提到荧光在短时间内观察可不封片（封片目的是延缓荧光淬灭），且担心封片后背景无法清洗，所以对封片和不封片进行了尝试。实验中染核使用单独的 DAPI
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实验课堂-WB实验凝胶问题解析
在 Western Blot（WB）实验中，凝胶的制备是至关重要的基础环节，其质量直接影响后续实验结果的准确性与可靠性。本文将深入探讨配胶过程中常见的问题，剖析其可能原因，并提供切实可行的解决方法，助力科研人员优化实验流程，提升实验成功率。
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WB实验方法与试剂该如何选择
在科学研究的征程中，实验方法和试剂的选择犹如航海中的罗盘，直接影响着研究的方向和结果的可靠性。本文将针对科研人员在实验过程中常见的关于实验方法和试剂选择的讨论进行深入剖析，包括 Nanodrop 测蛋白浓度、预制胶的使用以及自配胶的保存等方面，旨在为广大科研工作者提供全面而有价值的参考，助力大家在实验中做出更为明智的决策。
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实验课堂-细胞膜与细胞壁种类详解
磷脂作为组成生物膜的主要成分，具有独特的结构。它由磷酸相连的取代基团构成亲水头，以及由脂肪酸链构成的疏水尾。根据其化学结构，磷脂可分为甘油磷脂与鞘磷脂两大类。甘油磷脂由于取代基团的不同又可进一步细分如磷脂酰乙醇胺、磷脂酰丝氨酸、磷脂酰胆碱等。这些不同类型的磷脂在细胞膜中分布不均，可能与细胞膜的不同功能区域相关
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实验课堂-细胞实验中裂解液该如何选择？
在现代生物科学研究中，深入探究细胞内的分子机制、蛋白质功能以及基因表达调控等方面，常常需要对细胞进行裂解以获取细胞内的生物分子。细胞裂解是实验研究的关键起始步骤，其方法和试剂的选择直接影响后续实验结果的准确性和可靠性。
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单双端测序有何不同？
端测序（Single-End Sequencing，SE）和双端测序（Paired-End Sequencing，PE）是基因组测序中的两种常见测序方式，它们的主要区别在于读取DNA片段的方式，这对下游数据分析会产生不同的影响。本文将对对这两种测序方式进行介绍。
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质粒为什么要挑单克隆，冻存的菌液是否需要再次挑单克隆？
菌液存储时间越长，质粒突变的可能性越大，所以每隔几次扩增后可以考虑重新涂板挑选单克隆。对于高拷贝数质粒，丢失的可能性较低，因此可以考虑直接从储存菌液中扩增，但仍需定期筛选单克隆，以确保质粒没有发生突变。低拷贝数质粒相对不稳定，直接从储存菌液中扩增的风险较高，通常建议在这种情况下每次都重新涂板筛选单克隆。
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8个引物设计秘诀，让PCR实验成功率飙升
今天分享的是PCR引物设计的8大原则，直接上干货，设计引物的时候，我们都需要考虑哪些因素呢？PCR引物设计的目的是确保PCR反应能够有效、特异性地扩增目标DNA序列。所以引物的好坏，直接关乎实验的成功。
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5个 WB 细节，教你拿到漂亮图
整理了 5 个 WB 实验细节技巧，带你从细节手法出发，优化 WB 实验结果。5个 WB 细节，带你靠自己的双手，拿到漂亮图！样本切记煮沸勿偷懒煮沸的首要目的是使蛋白质完全变性，即破坏蛋白质的三级和四级结构，使其展开成线性形式。这样，蛋白质分子在电泳过程中的迁移速率将主要取决于它们的分子量，而不是它们的构型差异。
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分子量的差异对抗体的性能有何影响？
抗体是一种由浆细胞（效应 B 细胞）分泌的Y 形蛋白质，主要功能是识别并结合抗原，在免疫系统中发挥着关键作用。吸收和分布：一般来说，分子量越小的抗体片段（如Fab，分子量约为50 kDa），越容易穿透组织，进入目标部位。例如，单链抗体（scFv），其分子量仅为完整抗体分子量的约
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含血清冻存液和无血清冻存液的区别
细胞冻存是细胞保存的主要方法之一。利用冻存技术将细胞置于-196℃液氮中低温保存，可以使细胞暂时脱离生长状态而将其细胞特性保存起来，这样在需要的时候再复苏细胞用于实验。而且适度地保存一定量的细胞，可以防止因正在培养的细胞被污染或其他意外事件而使细胞丢种，起到了细胞保种的作用
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细胞培养二三事：你的培养基变色了？
细胞培养基是用于支持细胞在体外生长和维持的液体培养基，其主要功能是模拟体内环境条件，为细胞提供所需的营养成分、激素和无毒的生长环境。细胞培养基的基本成分包括水、碳源、氮源、维生素、氨基酸、脂肪酸、微量元素和磷酸盐等。这些成分共同作用，确保细胞能够获得生长所需的营养和适宜的生活条件。
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免疫蛋白实验的常见问题
是一种常用于研究中分离和鉴定蛋白质的技术。它利用 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳 (SDS-PAGE) 来分离指定样品中包含的各种蛋白质，然后将分离的蛋白质转移到硝酸纤维素或 PVDF 膜上，接下来将膜与对感目标蛋白质的特异抗体一起孵育。在洗膜过程中，未结合的抗体被洗掉，只留下与目标蛋白质结合的抗体，最后通过显影胶片或荧光扫描来检测结合的抗体。
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WB实验秘籍：如何一眼判断转膜成功？
Ponceau S染色是一种简单快捷的方法，可以用来检测蛋白质是否成功转移到膜上。染色后，膜上的蛋白质会呈现出粉红色的条带。这种方法的优点是操作简便，染色时间短，而且染色结果与蛋白质的量成正比，可以作为转膜效果的一个参考。除了Ponceau S染色，考马斯亮蓝染色也是一种常用的方法
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这么多蛋白裂解液，你选对了吗
蛋白裂解液，顾名思义，是用来裂解细胞、释放蛋白质的液体。它的配方虽然千变万化，但核心成分不外乎三类：去垢剂、缓冲体系和蛋白酶抑制剂。1.去垢剂的作用是破坏细胞膜，让蛋白质得以释放。它们就像是细胞的“破壁机”，让蛋白质从细胞的束缚中解放出来。2.缓冲体系则像是蛋白质的“保护伞”
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H22细胞的培养流程及注意事项
小鼠肝癌细胞H22又称Hepatoma-22或Hepatoma 22，其分离自Balb/c小鼠腹水，由大连医科学院建立。H22细胞为悬浮细胞，细胞形态呈淋巴母细胞样。H22细胞常用于小鼠肝癌组织造模，在评估抗肿瘤药物的疗效、探究肿瘤微环境对肝癌进展的影响、揭示肝癌发生发展中的分子机制等方面的研究中有着广泛应用。
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流式细胞术的多色荧光搭配原则及注意事项
实验结果却经常会受到细胞的自发荧光、非特异性染色、荧光通道串色、仪器的电子扰乱等多个因素的干扰而出现偏差。为了避免这些难以避免的因素对荧光染料强度的干扰，研究人员提出了染色指数（Stain Index）这一概念。这一概念只考虑了抗体克隆与质量、荧光团纯度和质量、目的细胞、激光线及其功率等因素
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流式细胞术实验常见问题分析
流式细胞技术（Flow Cytometry，简称FCM）是一种高效的方法，用于分析和收集细胞悬液中的单个细胞。FCM的优势在于其速度快、结果客观，并且具有重要的统计意义。它能够处理复杂的样本，同时收集多个参数，其可靠性和重复性都非常出色。
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扫描电镜之干燥方法的选择及注意事项
临界点干燥法通常需要利用临界点干燥仪，将经过有机试剂（通常是乙醇）替代的组织，置于仪器中，利用加压降温的方式，将CO2液化，逐渐替代组织中的乙醇后，于临界点干燥的方法。在某一温度下，CO2的气相和液相状态下的表面张力等于零，在此条件下使样品干燥，能够保此持样品的结构不产生变形。该温度即为CO2的临界点温度
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细胞培养之常见污染及防治
细胞污染是细胞培养中老生常谈的话题。常见的污染源包括细菌、真菌、支原体、黑胶虫等，受污染的细胞往往会导致其形态发生改变、生长速度缓慢，严重时甚至造成细胞死亡，费时又费力，严重影响实验进度。一般情况下，细胞污染不能被完全清除，所以我们需要严格把控实验操作流程，以尽可能避免或减少细胞污染给实验造成的不良后果
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实验解析｜pH、二氧化碳、氧气和温度对细胞生长有何影响？
大多数细胞系在pH 7.4时生长最好，尽管不同细胞系的最佳pH有差异，但基本上都在pH7.0-7.7之间，高于7.7，低于6.5，细胞就会出现生长抑制。为了方便实验者能及时关注到pH的变化，培养基会加入酚红这种pH指示剂，pH 7.4时，它呈红色，高于7.7后，变成紫红色，低于7.0时变成橘红色，6.5时就会变成黄色。一般来说，细胞在培养时
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实验解析｜细胞培养耗材的选择和使用经验分享
要看你培养细胞的目的。如果培养的细胞不需要特别多，但后续需要拿去做多次、重复的检测，要使用多孔板培养细胞，如果培养的细胞需求量较大，目的是为了练手、冻存细胞资源、或拿去做一些对细胞量要求特别多的实验，则建议用培养瓶和培养皿，新手的话优先选择培养瓶，更为安全。因为培养瓶的敞口比培养皿要小得多，污染的风险相对会更低
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电泳拖带不再烦恼：实用技巧大公开
琼脂糖凝胶电泳是生物医学实验室中的一项基本技术，用于分离和分析核酸、蛋白质等生物大分子。拖带现象在电泳图中表现为条带不清晰、弥散或尾部拉长。这种现象可能是由于样品中的分子大小不一、电荷差异或样品与凝胶的相互作用不均一造成的。拖带不仅影响条带的美观，更重要的是，它可能导致对样品纯度和浓度的误判，从而影响后续实验步骤
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Western blot 实验进阶版之磷酸化蛋白检测那点事儿
磷酸化蛋白的丰度通常较低，因此需要通过预实验来评估样品中磷酸化蛋白的丰度，并据此调整上样量。通常，我们需要在凝胶上加载更多的样品来确保磷酸化蛋白的条带可以被检测到。然而，过多的样品量也可能导致条带过载，影响结果的解读。因此，找到合适的平衡点是关键。此外，考虑到不同样品间可能存在的变异，使用相同的样品处理和加载条件对于确保结果的可比性至关重要
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RNA修饰点杂交实验
RNA修饰点杂交是一种用于定量检测和分析RNA样本中化学修饰水平的实验技术。比如m6A 点杂交（m6A Dot Blot），可以评估RNA样品中m6A修饰的总体水平，而不是其在特定mRNA上的位置或频率。m6A 点杂交实验的基本原理是将RNA样本点样到硝酸纤维素膜上，并使用特异性抗体检测m6A修饰。首先，RNA样本被均匀地点样到膜上并固定
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数字PCR：DNA/RNA的绝对定量
数字PCR的基本原理是通过将微量样品进行极限稀释和分割，使每个反应单元（如微滴或微孔）中平均只含有一个或不含目标核酸分子。随后，在所有反应单元中进行PCR扩增，并对扩增后的荧光信号进行统计和分析，从而计算出起始样品中目标核酸分子的绝对拷贝数。具体来说，数字PCR技术首先将含有核酸分子的反应体系分成成千上万个纳升级的微滴或微孔
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PCR-SBT技术在基因分型与鉴定中的应用
PCR-SBT技术的第一步是对待测DNA进行PCR扩增。PCR，即聚合酶链反应，是一种在体外快速扩增特定DNA片段的方法。在PCR过程中，需要设计特定的引物，它们能够与待扩增的DNA片段两端互补结合。然后，在DNA聚合酶的作用下，以dNTP为原料，按照碱基互补配对的原则，合成新的DNA链。通过多次循环的变性、退火和延伸步骤，待测DNA片段得以大量扩增
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tNGS 和 mNGS，两种测序技术有何区别？
tNGS是一种基于超多重PCR扩增（或靶向捕获）与高通量测序两种技术结合的新一代测序技术。它使用大量针对特定基因序列的引物/探针对待测样品中抽提出的核酸进行超多重PCR扩增/探针捕获，获得大量目标核酸片段，再对这些目标核酸片段进行高通量测序，然后对所得序列进行生物信息学分析，从而实现对待测样本中的核酸进行高灵敏以及高分辨率的识别
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WB常见问题汇总及解决方案！
凝胶电泳主要利用琼脂糖凝胶作为电泳支持物。琼脂糖凝胶具有亲水性且不带电荷的特性。当将含有 DNA 样品的溶液上样到琼脂糖凝胶的加样孔中，并在凝胶两端施加电场时，DNA 分子由于自身携带的负电荷，会在电场力的作用下向正极移动。在移动过程中，不同大小的 DNA 片段受到凝胶孔径的阻滞作用不同.较小的 DNA 片段能够更容易地穿过凝胶孔隙
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分子信标探针技术解析
分子信标探针的工作原理基于荧光共振能量转移（FRET）原理。在自由状态下，分子信标呈发夹结构，荧光基团与淬灭基团距离很近，通常小于10nm，此时荧光被淬灭。当分子信标探针与靶序列结合时，探针的发夹结构打开，荧光基团与淬灭基团分离，距离变远，荧光基团发出的荧光不能被淬灭基团吸收，于是可检测到荧光信号。根据Foerster理论
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多重链接依赖探针扩增（MLPA）技术简介
变性涉及退火DNA链的分离，使双链DNA变成单链。将特异性探针与待检测的DNA靶序列进行杂交。可以同时使用多达60个探头分析每个样本，从而针对不同的位点。这些探针具有引物序列，在扩增过程中与PCR -引物结合。所有不同的探针都有相同的引物结合序列，此外，探针还具有与目标位点互补的杂交序列，使探针能够与DNA结合。两种探针将在DNA链的相邻位点杂交
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引物探针的质量标准总结
纯度是衡量引物探针质量的首要指标。高纯度的引物探针意味着杂质含量低，从而能够确保实验结果的准确性和可靠性。常见的纯度检测方法包括比色法、毛细管电泳、高效液相色谱（HPLC）等。其中，HPLC因其高分辨率和准确性而备受推崇。根据纯度级别的不同，引物探针可以分为脱盐级、过柱级、PAGE级和HPLC级等。不同级别的纯度要求有所不同
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实用干货 | 单细胞悬液制备实验中各种消化酶类简介
高通量单细胞测序技术对样本的要求极高，需要将样本制备成高质量的单细胞悬液才能进行后续实验。但实体组织多种多样，组织中细胞和细胞外基质构成特点，决定了需要使用多种酶的组合来分别消化细胞外基质和细胞间连接。因此，不同组织需要使用不同的酶组合和消化时间，才能制备出高质量的细胞悬液。今天来介绍一下单细胞悬液制备中几种常见的组织消化酶
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实用干货 | 分离植物单个细胞的方法及优缺点对比
单细胞分离是从待分离的材料中分离出单个细胞的过程。获得单个细胞样品是进行单细胞测序的第一步。分离植物单个细胞常用的方法有酶解法、分离单细胞核、激光捕获显微切割技术、荧光激活细胞分选技术、稀释法、液滴微流控技术、BD Rhapsody微孔捕获技术等。常用于制备原生质体，可以快速得到大量的原生质体，常用的酶有纤维素酶R-10
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峰型不好？溶剂效应要背锅！
在液相系统分析过程中，有没有遇到过色谱峰前延现象？为什么有时候同一个样品减小进样量色谱峰就变的很好看？日常的分析工作中，我们通常将更多精力集中在流动相和仪器方法的选择上，忽视了样品进样溶剂的重要性。如果溶剂选择不当则会产生“溶剂效应”，使我们在定性和定量分析中产生误判，影响分析结果。因此，了解“溶剂效应”产生的原因及掌握避免
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实验方法分享【细胞冻存和复苏】
1.细胞处于对数生长期时准备冻存，在冻存前一天换液。2.将细胞培养基弃掉，用PBS清洗一次，然后加入0.25% 胰蛋白酶消化加入量是10cm dish加入1ml胰酶，其他孔径培养皿细胞按比例加入胰酶消化。消化的时候将细胞放入细胞培养箱。3.胰酶消化时间根据细胞类型不同，一般Hela 2min即可，其他类型的细胞消化时间需要尝试，第一次消化的时候
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转染的基本概念、实验protocol及一些常见问题
转染，指将某种物质转移到细胞内。在生物医学研究中，这个“物质”通常指的是DNA或RNA。通过转染，我们可以向细胞引入新的基因，或者沉默或敲低细胞内的某个基因，从而研究该基因对细胞生命活动的影响。
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实验科普-标准溶液的配置与使用教程
使用移液器准确吸取一定体积的标准溶液，缓慢地注入比色皿中，避免产生气泡，因为气泡会影响光的吸收和散射，导致测量结果出现偏差。将装有溶液的比色皿正确放置在分光光度计的样品池中，确保光路垂直且畅通，然后启动仪器进行测量。在测量过程中，要等待仪器读数稳定后再记录测定结果，同时要记录测量的时间、测量值以及测量时的环
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如何通过组织芯片技术提高病理染色效率
病理学是医学研究中不可或缺的一部分，它依赖于精确的组织染色技术来识别和分析疾病。然而，传统的染色方法通常涉及手工处理大量的单片组织样本，这不仅耗时耗力，而且容易因样本处理不一致而影响诊断的准确性。在这种背景下，组织芯片技术应运而生，它通过高度自动化和标准化的流程，显著提升了病理染色的效率和准确性
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原代心肌细胞提取全步骤
原代心肌细胞提取是心血管研究中的一项基础技术，它能够为研究心肌细胞的生物学功能提供重要的模型。相比永生化细胞株，原代心肌细胞更能保留天然心肌细胞的生理特性，如其独特的收缩功能和电生理特性，这使得它在研究心脏疾病（如心律失常、心力衰竭等）和药物筛选方面具有重要意义。与永生化细胞株不同，原代心肌细胞不能无限增殖
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贴壁细胞质粒转染实验步骤
质粒转染是分子生物学和细胞生物学中常用的技术，能够将外源基因引入到细胞内，从而进行基因表达调控、蛋白质功能研究以及疾病机制的探索。质粒DNA作为外源基因的载体，可以通过特定的转染试剂或方法引入细胞内，并在细胞内进行表达。相比病毒转染，质粒转染具有简便、灵活且安全的优点，广泛应用于基因功能研究、基因编辑、蛋白质生产等领域
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细胞焦亡研究没思路？超详细教程来了
标志物如外翻的磷脂酰丝氨酸（通过Annexin V检测）和细胞膜完整性的丧失（通过PI染色检测）是常用的检测焦亡的指标。最后，考虑到实验设计，选择适合的细胞线是关键，因为不同的细胞类型对焦亡诱导剂的敏感性可能不同。设置合适的对照组，如处理组与未处理组，是必要的，以确保结果的可靠性。此外，实验应至少重复三次
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实验干货 | CCK-8操作技巧全解析
CCK-8实验的准确性受多种因素的影响，包括试剂选择、操作技术、设备校准和数据解析等。通过精确的操作和细致的观察，加上对实验条件和结果的深入理解，可以显著提高实验的可靠性。持续的学习和方法改进是实验成功的重要保障。希望通过这些技巧和建议，研究人员能够获得更准确和可靠的实验数据，推动科学研究的不断进步
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巨噬细胞介绍以及M1/M2极化实验
巨噬细胞根据其激活状态可分为两种主要类型：M1型和M2型。M1型巨噬细胞主要具有促炎作用，它们通过产生大量的促炎细胞因子（如TNF-α和IL-6）以及增强微生物杀伤能力来应对病原体入侵。相反，M2型巨噬细胞则主要参与抗炎反应和组织修复，通过分泌IL-10和TGF-β等抗炎因子来调节免疫反应。这种极化现象不仅反映了巨噬细胞在适
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常用的蛋白纯化技术有哪些
蛋白纯化是一个将目标蛋白从其他细胞成分中分离出来的过程。这个过程的目的是去除所有非目标蛋白和杂质，以获得高纯度的目标蛋白。纯化后的蛋白可以用于进一步的结构分析、功能研究或作为药物开发的基础。
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PCR成功的关键：模板DNA量的黄金法则
模板DNA，作为PCR反应的起点，其质量和数量直接影响着扩增的效率和结果的可靠性。在PCR反应中，模板DNA提供了聚合酶所需的原始序列，是扩增反应的基础。模板DNA的初始浓度过高或过低，都可能导致扩增效率下降，甚至实验失败。
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PCR成功的关键：模板DNA量的黄金法则
模板DNA，作为PCR反应的起点，其质量和数量直接影响着扩增的效率和结果的可靠性。在PCR反应中，模板DNA提供了聚合酶所需的原始序列，是扩增反应的基础。模板DNA的初始浓度过高或过低，都可能导致扩增效率下降，甚至实验失败。
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你一定要知道的5个微生物菌种保藏秘诀
短期保藏法，原理是将菌种在液体或琼脂培养基中进行周期性的移植和培养，保持菌种的活力和纯度。短期保藏法，原理是将菌种在液体培养基中培养后，加入液体石蜡，形成一层油膜，隔绝空气和水分，保持菌种活力和纯度。中期保藏方法，原理是将菌种在液体培养基中培养后，加入含有沙土的玻璃管中，使菌种附着在沙土颗粒上，然后冷冻保存，保持菌种活力和纯度。
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转染试剂操作注意事项
外源基因进入细胞主要有物理介导、化学介导、生物介导。目前市面上比较常见的就是化学介导中的阳离子聚合物转染法和脂质体转染法。抗生素是影响转染的培养基添加物。这些抗生素一般对于真核细胞无毒，但阳离子脂质体试剂增加了细胞的通透性，使抗生素可以进入细胞。这降低了细胞的活性，导致转染效率降低
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人脂肪间充质干细胞的分离培养
脂肪干细胞（ADSCs）是一类来源于脂肪组织的间充质干细胞，具有自我更新与多种分化潜能，通过分离培养可以在体外稳定增殖，在特定的诱导条件下，可以被分化诱导为脂肪细胞、成骨细胞、软骨细胞、神经细胞等。 根据分布位置可以将人体脂肪分为内脏脂肪和皮下脂肪两种形式，通常情况下，皮下脂肪约占人体总脂肪量的85％
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细胞老化是什么？如何处理？
老化是生命发展的必然，任何细胞从诞生之时起，老化过程就开始了。老化的细胞结构蛋白、酶蛋白和受体蛋白合成减少，摄取营养和修复染色体损伤的能力均下降，表现为细胞和胞核变形，线粒体、高尔基体扭曲或呈囊泡状，胞质色素沉着，细胞体积缩小，由此导致器官重量减轻，间质增生硬化，功能代谢降低，储备功能不足
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ELISA常见问题及解决方案
LISA是酶免疫测定技术中应用最广的实验技术，基本原理是将已知的抗原或者抗体吸附在固相载体反应板表面，而酶标记的抗原抗体反应在固相表面上进行，再将液相中的游离成分洗除。ELISA一般广泛应用于生物医学、食品安全等领域，但实验过程经常会出现各种各样的小问题，需要极大的耐心和技术，今天给大家介绍一些实验中常见的ELISA实验问题及解决方案
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3min搞定细胞冻存实验大揭秘
准备好冻存管、离心管、移液管和移液器等必要耗材，将它们摆放整齐放置在超净台中，并打开紫外线灯照射30分钟。随后打开通风机让实验室通风3分钟。接着使用75%酒精擦拭操作台和双手以确保无菌。准备好冰盒，调节离心机至需要的转速。将细胞完全培养基、DMSO和胰酶等物品放入37摄氏度水浴箱中预热。
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关于细胞传代实验教程步骤
1.严格遵守无菌操作规程，确保实验环境的洁净无菌。2.在消化过程中要注意细胞形态的变化，消化的时间会受到消化液的种类、配制时间、加入培养瓶中的量等多种因素的影响。一旦观察到胞质回缩、连接松散或成片浮起的迹象，应立即终止消化过程。3.使用器械时应正确摆放并保证足够的操作空间，这样不仅有利于操作，也能减少污染的可能性。
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纯化的蛋白如何保存？
蛋白质的保存，首先要遵循一个核心原则：确保蛋白质的活性和完整性。蛋白质的结构主要由氢键、盐键和范德华力维持，这些脆弱的相互作用在遇到极端pH、高温、剧烈的机械作用或强烈的辐射时很容易被破坏，导致蛋白质活性丧失。因此，一旦纯化完成，应立即将蛋白质冷冻保存，以防止其降解。在实际操作中，这意味着需要避免长时间的室温放置
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TRAP染色技巧与应用
破骨细胞是骨吸收过程中的主要执行者，它们通过分泌酸性磷酸酶等酶类，溶解骨基质，促进骨质吸收。在骨质疏松症、Paget病等骨代谢疾病中，破骨细胞的异常活性是病理变化的关键因素。TRAP酶是一种酸性磷酸酶，它在酸性环境下活跃，且不被酒石酸抑制。这种特性使得TRAP成为破骨细胞的特异性标志酶。在TRAP染色中，TRAP酶催化底物水解
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一文解决包涵体蛋白纯化
首先，我们得搞清楚什么是包涵体蛋白。简单来说，包涵体蛋白就是在细胞内不溶性聚集体中找到的蛋白质。在大肠杆菌这类原核生物中，由于缺乏正确的折叠和翻译后修饰机制，重组蛋白很容易就“抱团”形成了包涵体。虽然听起来像是个大麻烦，但包涵体蛋白也有它的优点。它们可以高表达，易于分离，对蛋白酶的抵抗力强，甚至可以容忍一些毒性蛋白质的表达
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科研干货|证明基因对细胞增殖的影响的6种方法
1.平板克隆形成实验可以用于检测细胞克隆的形成情况。2.MTT实验是一种常用的实验方法，用于检测细胞的存活和生长情况。3.动物组织检测可以通过检测增殖相关蛋白Ki-67的表达水平来评估细胞增殖率。4.裸鼠（移植瘤）实验是一种常见的体内实验方法，用于检测细胞在体内的增殖能力。5.通过检测细胞周期的变化情况，可以间接反映细胞的增殖状态。
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实验教学 | 质粒转化操作步骤与要点
收到了干粉质粒，或者问别人要了液体的质粒，如何才能让质粒扩增下去，让质粒子子孙孙无穷尽？那就是让细菌（感受态）吃掉质粒，让细菌生产更多质粒。今天来讲一下不涂平板的懒人质粒转化的步骤和注意事项。
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科研干货|详细讲解转化、转导、转染、感染的区别
转化是分子克隆技术中一个重要的步骤，其定义为将质粒DNA或基因工程重组子直接导入细菌细胞的过程。这一过程在生物医学研究中具有关键意义，通过转化可以使目的DNA片段在细菌细胞中进行复制和表达，为后续实验和研究奠定基础。
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科研干货|详细讲解转化、转导质粒提取总失败？
质粒在基因工程中已经成为一种常用且简单的载体。除了在科研领域被广泛应用外，质粒还在多类生物医药产品的研发和生产过程中发挥着重要作用，例如重组蛋白药物、疫苗、基因治疗药物以及CAR-T细胞疗法等。 在质粒提取过程中，有时会遇到一些失败的情况。针对这些常见问题，我总结并整理了一些质粒提取过程中可能会出现的问题，并进行了详细的分析
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碱裂解法提取质粒原理和步骤解析
质粒DNA的复性:接着，我们需要将质粒DNA复性，这可以通过加入酸性缓冲液（如醋酸钾）来将pH值调回中性。由于质粒DNA具有独特的共价闭环结构，它可以迅速而准确地进行复性，形成可溶的复合物。相比之下，染色体DNA由于其分子较大，复性速度较慢，易形成网状结构，有利于后续的分离操作。
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流式细胞分选仪喷嘴和O圈的使用和维护
喷嘴在流式细胞分选仪中负责精确形成和控制细胞液滴，其良好的状态是实现高效、准确的细胞分类和分选的前提。目前市场上多款流式细胞分选仪包括BD FACSAria™系列和FACSMelody™仪器，BC Cytoflex SRT和Cytek Aurora CS都是使用带手柄的平滑式喷嘴结构，并将实现密封的O型圈固定附着于喷嘴上简化日常操作和维护
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细胞周期分析流程和细节
通过使用荧光染料染色DNA并测量其强度，可以确定样本的细胞周期分布。染料与DNA的化学计量比染色，允许区分G0/G1期、S期和G2/M期的细胞，以及识别非整倍体细胞群体。各种染色流程可以适应不同类型的样本，但一般分析的原理和原则保持不变。
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完整的最优细胞分选样品制备细节
样品必须装在防漏管中，并在防漏容器和密封冷却中运输。 细胞通常以大约10百万/mL的浓度分选，具体取决于细胞类型。如果样品中的细胞少于500万，请在300-500uL中重悬。 准备额外的样品缓冲液（5-15mL）、FBS、收集缓冲液和收集管作为备份。使用适当的收集管（例如无菌、无RNAse）。如有必要，为长时间分选准备额外的冰或干冰
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视频讲解 DNA提取实验大全｜看看哪种更适合你！
DNA提取实验是生物学研究中的关键步骤，它涉及从细胞中分离出遗传物质。DNA提取实验的基本原理是利用DNA与蛋白质、脂质等其他细胞成分在化学性质上的差异，通过物理和化学方法将DNA从细胞中分离出来。这些方法通常包括细胞裂解、去除杂质、DNA沉淀和洗涤等步骤。快来看看视频讲解 DNA提取实验大全吧
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我看谁还分不清全血、血清、血浆（附带视频讲解哦）
一张图告诉你不同血液样本的区别。全血、血清、血浆是血液的不同组成部分，它们在颜色、成分、比重以及临床用途上均存在显著差异。全血是指血液的全部成分，包括血细胞（红细胞、白细胞、血小板）和血浆。它是一种复杂的结缔组织，在心血管系统中循环，发挥着运输氧气、营养物质、激素，以及免疫防御、维持酸碱平衡等多种生理功能。
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14种组学的概念和区别
组学（Omics）是指研究生物体中分子组分和其相互作用及作用网络的一门学科。基因组学是对生物体的整个基因组进行研究的学科。它包括对 DNA 序列的测定、基因的定位、基因结构和功能的分析，以及基因之间相互关系的研究等诸多方面。例如，人类基因组计划（HGP）就是一个典型的基因组学项目，其目标是测定人类基因组的全部 DNA 序列，从而了解人类基因的组成、结构和功能
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一张图认清8种RNA-收藏吧以后找不着了
mRNA 是从 DNA 到蛋白质合成过程中的信息传递者。在转录过程中，它以 DNA 为模板，按照碱基互补配对原则合成。例如，在真核细胞的细胞核中，RNA 聚合酶 Ⅱ 读取基因的 DNA 序列，合成出 mRNA 前体，然后经过加工（加帽、加尾、剪接等）后，mRNA 进入细胞质。在这里，它携带的遗传信息以密码子的形式被核糖体读取，每个密码子对应一种特定的氨基酸，从而指导蛋白质的合成
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【实践】CRISPR/Cas9基因编辑的单细胞分选
CRISPR/Cas9基因编辑结合单细胞分选技术，为基因功能研究、疾病模型建立、药物开发等领域提供了一种精确、高效的研究手段。结合单细胞分选能够筛选出成功编辑的细胞，分析基因剂量效应，揭示细胞异质性，并提高基因编辑的精确性和研究结果的可靠性。细胞分选会产生可能对操作员和分选实验室其他人构成风险的气溶胶，需要进行生物安全上的预防措施。
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线粒体调节炎症的机制：多维度的复杂调控网络
被激活的MAVS蛋白如同一个信号枢纽，开始招募一系列下游的关键信号分子，其中肿瘤坏死因子受体相关因子（TRAF）家族成员备受瞩目。这一招募过程就像多米诺骨牌的起始推动，会进一步激活转录因子干扰素调节因子（IRF） - 3和核因子 - κB（NF - κB）。IRF - 3被激活后，会诱导Ⅰ型干扰素（IFN - α/β）的表达，这种干扰素是抗病毒的重要武器
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同源重组法构建载体步骤原理解析！
同源重组法是一种基于DNA分子间的同源序列的原理而进行的定向重组方法。在该方法中，重组酶起到催化的作用，使得载体与插入片段能够精确重组。首先，通过设计带有同源臂的引物，扩增出具有同源序列的插入片段。随后，将这些插入片段与线性化的载体进行重组，最终形成重组质粒。在整个过程中，同源重组法借助同源序列的特性，实现了高效的
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PCR实验室清洁和消毒哪种消毒剂最有效？
对于大多数PCR实验室的日常消毒需求，75%的乙醇溶液由于其商品化的便利性和公认的最佳消毒效果，可能更为适合。如需要大量使用或成本考虑时，70%的乙醇溶液通过简单配制即可满足需求，也是一个不错的选择。需要注意的是，乙醇消毒剂易燃易爆，使用时应远离火源和热源，并存放在阴凉通风处。使用过程中应避免直接接触皮肤和眼睛，如不慎接触应立即用大量清水冲
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蛋白提取成功秘诀：选择合适的蛋白裂解液
去垢剂的选择：蛋白裂解液的核心成分之一就是去垢剂，它们的作用就像是细胞的“开瓶器”，帮助我们打开细胞的保护层，释放出蛋白质。1.离子型去垢剂：比如SDS和CTAB，它们就像强力清洁剂，能迅速破坏细胞膜，但同时也可能让蛋白质变性。所以，如果你的蛋白质比较“娇气”，可能就要慎用这类去垢剂了。2.非离子型去垢剂
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QPCR 内标扩增异常原因解析
实时荧光定量 PCR（QPCR）是一种常用的分子生物学技术，用于检测特定核酸序列的含量。内标在 QPCR 中起着重要的作用，它可以帮助校正样本间的差异，提高实验的准确性和重复性。然而，在实际操作中，有时会出现内标异常的情况，这可能会影响实验结果的可靠性。
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如何执行qPCR的标准MIQE？
qPCR的标准MIQE（Minimum Information for Publication of Quantitative Real-Time PCR Experiments）是一个关于实时荧光定量PCR（qPCR）实验发表所需最小信息量的国际化标准。该标准旨在提高qPCR实验结果的可靠性、准确性和可重复性，确保科学文献的完整性。首先，需要深入了解MIQE标准的9个组成部分和85个参数。这些部分包括实验设计
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qPCR探针淬灭基团，你选对了吗
探针淬灭基团是一种能够吸收或转移荧光信号的分子，通常与荧光报告基团配对使用。当荧光报告基团激发并发出荧光时，淬灭基团能够吸收或转移这些荧光能量，从而减少背景荧光，提高检测的信噪比。以下总结了常见的探针淬灭基团种类。MGB本身不是传统意义上的淬灭基团，但TaqMan MGB探针中包含了MGB结合物和非荧光淬灭基团
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PCR-SBT技术在基因分型与鉴定中的应用
PCR-SBT技术（Polymerase Chain Reaction - Sequence-Based Typing）是一种结合了聚合酶链反应（PCR）和序列分型（SBT）的方法，用于基因分型和鉴定。这种技术在分子生物学、遗传学、法医学以及微生物学等领域具有广泛的应用。PCR-SBT技术可用于生态系统中生物多样性的研究。通过对不同物种的基因组进行分型
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培养皿：微生物学与细胞生物学的基石工具
培养皿的主要组成部分包括一个透明的容器以及与其相配的盖子。通常使用石蜡膜(parafilm)来密封培养皿，防止内部环境与外界交流。底碟是较大的部分，用于盛放培养基，并提供一个稳定的基座。底碟通常是平坦的，边缘略带凸起，以防培养基溢出。在底碟上会进行标记，如日期、样品名称、使用的培养基类型或其他相关信息
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培养皿：微生物学与细胞生物学的基石工具
培养皿的主要组成部分包括一个透明的容器以及与其相配的盖子。通常使用石蜡膜(parafilm)来密封培养皿，防止内部环境与外界交流。底碟是较大的部分，用于盛放培养基，并提供一个稳定的基座。底碟通常是平坦的，边缘略带凸起，以防培养基溢出。在底碟上会进行标记，如日期、样品名称、使用的培养基类型或其他相关信息
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Westen Blot实验的内参基因选择的经验分享
类比与RT-qPCR实验，Westen blot实验是从蛋白水平检测基因的表达情况，而在检测过程中内参基因的表达是相对恒定的，因此我们在探究目的基因受实验处理影响表达时需要挑选适合的目的基因作为内参，再进一步与实验对照组比较目的基因的相对表达量。目前在实验中比较常用的内参基因主要为GAPDH（36KDa）、β-actin
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石蜡切片的免疫荧光染色步骤手把手教学
石蜡切片的免疫荧光（Immunofluorescence on Paraffin Sections，简称IFPS）是将免疫学与荧光显微镜技术相结合，用于检测和定位组织切片中的特定蛋白质或抗原。该技术广泛应用于医学研究和诊断，尤其在肿瘤学、病理学和细胞生物学等领域具有重要价值。
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科研干货｜免疫荧光双重染色解析！
染色:在进行染色实验时，首先需要将两种一抗稀释成适当的工作液浓度。然后，在4°C条件下过夜孵育或将一抗滴加到玻片上，在湿盒中室温孵育30分钟。对于间接法，一抗去除后还需要混合二抗工作液，在室温下避光孵育1小时（直接法则省略此步骤）。这一过程将有助于揭示样本中的多种生物标志物或结构，为实验结果的解读提供更多线索
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【细胞技术】海马神经元细胞分离培养实验
1.包被：培养前一天将培养板或培养瓶或皿用0.01%多聚赖氨酸包被过夜。第二天早上来吸除包被液在无菌超净台中自然晾干后放置于培养箱中备用。2.配制神经元专用培养基（DMEM/F12培养基中添加1%谷氨酰胺，2% B27，1%双抗）3.取脑：选取新生24h之内的SD大鼠数只,雌雄不限,75%酒精全身消毒,断头处死,无菌条件下分层剪开头皮
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技巧实操：搞定免疫组化（IHC），或许就差这向招！
一提到免疫组化（IHC)实验，繁琐的操作步骤总是叫人头疼。实际IHC 实验并不算难，但由于操作步骤较多，因此造成影响实验结果的因素较多，可谓是稍有疏忽就全盘皆输，可以用九九八十一难来形容了。但也不是没有办法解决，现在就将免疫组化操作中常见问题和解决方法汇总给大家，希望能帮助到你。
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关于血清的使用，这四个疑惑你应该清楚！
实验显示，经过正确处理的热灭活血清，对大多数的细胞而言是不需要的。经此处理过的血清对细胞的生长只有微小的促进，或完全没有任何作用，甚至通常因为高温处理影响了血清的质量，而造成细胞生长速率的降低。而经过热处理的血清，沉淀物的形成会显著的增多，这些沉淀物在倒置显微镜下观察像是“小黑点”，常常会让研究者误以为是血清遭受污染
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细胞培养出现问题，请看这里
1.按培养液中NaHCO3浓度增加或减少培养箱内CO2浓度，2.0g/L到3.7g/L浓度NaHCO3对应CO2浓度为5%到10%。2.松开瓶盖1/4圈。3.改用不依赖CO2培养液。加HEPES缓冲液至10到25mM终浓度。4.在CO2培养环境中改用基于Earle′s盐配制的培养液，在大气培养环境中培养改用Hanks盐配制的培养液。5.丢弃培养物，或用抗生素除菌
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HE染色不良的常见问题
原因:由于烤(烘)片温度太低,玻片在脱蜡前没有充分烤(烘)干；切片在二甲苯停留时间不足,或二甲苯使用过久,造成脱蜡不尽。对策:如果玻片是由于没有烤(烘) ,先用无水乙醇处理去除玻片上的水分,然后重新用二甲苯脱去石蜡。如果烤(烘)干不足的现象比较严重,可能导致切片脱落,则无法补救。如果白色斑点是由于切片在二甲苯停留时间不足造成
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【实操技巧】Masson三色染色法
1.切片脱蜡应尽量干净。2.组织固定起着非常重要的作用，使用不同的固定液可延长或缩短染色时间。3. 酸性乙醇分化时间应该依据切片薄厚，组织的类别和新旧而定。4. 弱酸溶液可使色彩更清晰鲜艳，如使用量大可自行配置 0.1-0.3%乙酸溶液予以替代。5.磷钼酸分化时要在镜下控制，分化到胶原纤维呈淡红色、纤维呈红色即可
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组织石蜡包埋超详细实验步骤
石蜡包埋是一项关键技术，用于组织样本的长期保存和制备，通过创建稳定的组织块，便于后续组织病理学和免疫组织化学分析。此方法因其能精细保存组织结构和支持多次切片而成为病理学实验室的常用选择。石蜡包埋提供了出色的样本稳定性，有助于更长时间地保持组织标本的完整性和信息性。
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实验技巧 | 7种较常见的流式疑难问题解析
检查靶蛋白是否是位于细胞内，或者膜蛋白的抗体表位是否位于细胞内。关于细胞内染色，确保充分透化。为防止细胞表面蛋白质发生内化，所有操作步骤必须在冰上或 4℃ 下用预冷的交联试剂完成，以阻止所有细胞反应。在实验试剂中添加叠氮化钠可阻止表面抗原的调变和内化，但会导致荧光强度损失。对于粘附细胞系的染色
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一文看懂抗原、抗体、受体、配体、补体、细胞因子！
抗原是一种能够引起免疫系统产生应答的物质，通常是外来的微生物、细胞或化学物质。当抗原进入人体后，免疫系统会产生特定的抗体来与之结合并消灭它。抗体是免疫系统产生的一种蛋白质分子，具有特异性，可以识别并结合特定的抗原。受体则是位于细胞表面的蛋白质结构，用于识别外界信号分子，如激素或神经递质，进行信号传导
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要做好CCK-8实验，这三个重要环节需注意
首先，在进行细胞铺板时，需要用血球计数板进行细胞计数，得到细胞数量后按照所需铺板的细胞数量进行调整。一般96孔板铺板数量为1*10^6/孔。制备细胞悬液时需要反复吹打，使细胞悬液充分混匀，降低出现细胞团块的几率。一般96孔板，每孔加入100微升细胞悬液，从孔的9点钟方向打入，加入半张板子时，需要再次将细胞吹匀
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微生物检验中培养基的质量控制
培养基的作用是为微生物提供生长和繁殖所需的营养物质和环境条件。培养基的质量直接关系到检验结果的准确性和可靠性，因此对于微生物检验而言，培养基的质量控制尤为重要。
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平板为何需要倒置？ 平板倒置有什么优势？
在微生物学实验中，平板倒置培养是一项关键的操作步骤，其主要目的是确保实验结果的准确性和可靠性。培养皿在培养过程中，尤其是在高湿度环境下，盖子内侧容易形成冷凝水。如果培养皿正放，这些水滴可能会滴落到培养基上，导致菌落扩散或污染，从而影响实验结果。通过倒置培养，可以有效避免这一问题，确保实验的准确性
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显微镜下如何判断细胞密度
在细胞生物学和生物医学研究中，准确判断细胞密度是一个至关重要的步骤。细胞密度不仅影响实验结果的准确性，还直接关系到细胞培养的健康和实验的可重复性。细胞密度的测定方法多种多样，主要包括显微镜计数法、光密度法和细胞生长曲线法等。
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用蓝白斑筛选法，一眼分辨克隆有没有成功
蓝白斑筛选基于β-半乳糖苷酶（β-galactosidase）的活性。质粒载体通常包含一个lacZ基因，该基因编码β-半乳糖苷酶的α片段。当质粒转化到含有lacZΔM15突变的宿主细菌中时，宿主细菌的β-半乳糖苷酶的ω片段与质粒的α片段互补，形成具有酶活性的β-半乳糖苷酶。在含有X-gal（5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-半乳糖苷）和IPTG
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WB实验之内参选择攻略
在进行WB实验时，选择合适的内参是非常重要的。内参是用来校正样本上样量、上样过程中存在的实验误差，保证实验结果的准确性的。样本种属来源：根据实验样本的来源选择合适的内参。例如，哺乳动物的组织或细胞样本通常选择β-actin、β-tubulin、GAPDH、Lamin B等内参。植物来源实验样本则可以选择Plant actin、Rubisco等内参
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细胞上清液中蛋白的浓缩方法
胞上清液浓缩是实验中常见的步骤，用于增加样品中蛋白质或其他分子的浓度。1.超滤浓缩：通过选择合适分子量截留的超滤膜，可以有效地浓缩细胞上清液中的溶质。这种方法操作简单，但需要注意对膜的选择和操作条件的控制。2.离心浓缩：利用超速离心将细胞上清液中的溶质沉淀，然后去除上清液或进一步浓缩。这种方法适用于多种样品
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避免免疫荧光串色的小妙招
在免疫荧光实验中，细胞固定是至关重要的第一步，目的是保持细胞的形态和内部结构。常用的固定剂包括多聚甲醛（PFA）和甲醇。PFA主要通过交联蛋白质来保持细胞结构，而甲醇则通过沉淀蛋白质固定。选择合适的固定剂与实验目的和检测的靶蛋白密切相关。渗透化处理的目的是让抗体能够穿透细胞膜，进入细胞内部与靶蛋白结合
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小分子蛋白如何跑WB?
在日常实验过程中，小分子蛋白是非常常见的，常见的凋亡蛋白如Bcl2、Caspase-3、Bax，自噬相关蛋白如LC3B等均为小分子蛋白，接下来将从以下几个方面分享小分子蛋白跑Wb时的注意事项：1. 转膜时，若蛋白分子量过小，可适当提高甲醇比例（30%左右）改善吸附能力。2. 跑小分子蛋白时marker尽量不跑到一张膜上
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基因过表达实验流程——从病毒制备到细胞感染
转染是细胞生物学研究的重要技术，是指将外源性的DNA、RNA等导入目的细胞的过程，主要用于调控基因表达，从而研究基因功能。以下以研究肾缺血再灌注损伤模型中慢病毒包装过表达肾小管上皮细胞（HK-2细胞）线粒体分裂基因drp1为例介绍转染相关实验步骤。
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细胞培养过程中不可忽视的问题
在细胞培养过程中，内毒素是一个不容忽视的问题。内毒素主要来源于革兰氏阴性细菌的细胞壁，如大肠杆菌、绿脓杆菌等。在细胞培养过程中，如果使用了含有内毒素的试剂或介质，可能会对细胞生长和分化产生负面影响，甚至导致实验失败。内毒素的特点是在其产生的量相对较少时，对宿主细胞没有直接的毒性作用，而是通过诱导炎症反应间接产生各种生物学效应
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TUNEL法检测细胞凋亡原理和经验
细胞凋亡中, 染色体DNA双链断裂或单链断裂而产生大量的粘性3'-OH末端，可在脱氧核糖核苷酸末端转移酶（TdT）的作用下，将脱氧核糖核苷酸和荧光素、过氧化物酶、碱性磷酸酶或生物素形成的衍生物标记到DNA的3'-末端，从而可进行凋亡细胞的检测，这类方法称为脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法。
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ELISA成功与否在此一举
ELISA（酶联免疫吸附试验）是一种常用的生物化学分析技术，可用于判断受检标本中是否含有待检测抗原或抗体，是免疫反应的定性和定量检测方法，也是许多科研人员的日常实验之一。这么重要的实验，每个步骤可都不能疏忽，其中最最最关键的一步，也是整个实验的最后一步，便是我们今天要介绍的——酶标仪的分析。
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线粒体，一个优秀的科研研究切入点
线粒体在细胞凋亡中起着核心作用。当细胞受到外界刺激或内部损伤时，线粒体会释放细胞色素C和其他凋亡相关蛋白，这些蛋白会触发细胞凋亡程序。例如，在心肌缺血再灌注损伤中，线粒体释放的细胞色素C会激活半胱氨酸蛋白酶家族(caspases)，从而导致心肌细胞凋亡。
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干货分享｜脾细胞的分离、冻存和复苏
脾细胞是ELISpot和FluoroSpot测定中使用最多的细胞，至少对小鼠和大鼠样本而言是如此。脾细胞可以很容易地从脾脏中分离出来，而不需要Ficoll分离。细胞可以在分离后直接使用，也可以冷冻保存，并在以后批量使用。
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干货分享 | 无缝克隆常见问题解答
脾细胞是ELISpot和FluoroSpot测定中使用最多的细胞，至少对小鼠和大鼠样本而言是如此。脾细胞可以很容易地从脾脏中分离出来，而不需要Ficoll分离。细胞可以在分离后直接使用，也可以冷冻保存，并在以后批量使用。
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干货分享 | 免疫荧光染色，零失误封片技巧
免疫荧光染色是实验室常用的技术之一，但在操作过程中，有许多需要注意的细节，任何一个环节的失误都可能导致实验失败。本文将为您介绍免疫荧光染色的注意事项，并附上零失误封片技巧。
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双荧光素酶实验的应用，你都知道哪些？
双荧光素酶实验的核心在于利用荧光素酶（Luciferase）催化荧光素产生发光现象，通过测量发光强度来监测目标基因的表达水平。该系统包含两种不同的荧光素酶：火萤酶（Luciferase）和海藻酸酯酶（Renilla）。这两种荧光素酶都需要ATP作为底物，但它们分别与不同的底物反应而产生不同颜色的荧光。在实验中，首先将感兴趣
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细胞复苏的基本原则与注意事项
平时研究用的细胞，需要冷冻保存。冷冻的过程称为冻存，和冻存对应的过程，称为复苏，通俗地说就是把冻上的细胞化开。细胞复苏是一简单的试验操作，但操作中有许多需要注意的事项，在实验操作中注意细小问题，才能使复苏后的细胞状态保持良好。
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细胞表型检测实验有哪些？1分钟了解清楚!
细胞表型乃是涵盖基因及蛋白表达的多个细胞进程的聚合体，此类进程致使细胞具有特定的形态与功能。细胞表型的检测，所检测的乃是如下一系列表型：周期、增殖、凋亡、迁移、侵袭、克隆形成、自噬、EMT（上皮间充质转化）、血管生成。于细胞内部，将某一目的基因进行敲除、敲降、过表达，构建稳转株之后，与对照细胞一同，展开细胞表型的检测
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揭秘质粒构建和蛋白质表达的常见陷阱及解决方案
在分子生物学研究中，质粒构建和蛋白质表达是两项基础而关键的技术。然而，在实际操作过程中，可能会遇到各种问题。本文将探讨这些常见问题及其解决办法，以帮助水深火热中的小伙伴提高实验效率和成功率。可以有效提高质粒构建和蛋白质表达的成功率，并获得高质量的实验结果。在实际操作中，应根据具体情况灵活调整实验方案
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LISA检测--10类样品的处理方法
Elisa是一种快速、灵敏、准确可靠的定性定量分析方法。样本的处理对于Elisa 实验的成功起着关键的作用。处理样本的过程就是收集目标蛋白的过程，由于蛋白容易变性，降解，故该过程应尽量温和。样本处理之后的储存也非常重要，尤其注意不要反复冻融。样本处理之后可分装密封保存，最佳保存条件：2-8℃保存应小于5天，-20℃不应超过6个月
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实验干货 | 集落形成实验（平板克隆形成）
集落形成实验，又称平板克隆形成实验，是一种在细胞生物学研究中不可或缺的基础技术。通过该实验，研究人员可以评估单个细胞的生长能力和克隆形成效率，从而洞察细胞的增殖和存活特性。
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TSA多重免疫荧光染色介绍
免疫荧光染色技术是一种强有力的工具，用于检测细胞或组织样品中特定蛋白质或抗原的分布和表达。该技术通过使用荧光标记的抗体，与目标抗原结合，从而在荧光显微镜下观察到特定的荧光信号。这种技术在生物医学研究中至关重要，广泛应用于疾病研究、组织学分析、以及分子病理学等领域。然而，传统的免疫荧光染色在灵敏度和信号强度上存在一定局限
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科研干货 | Rh123（Rhodamine 123）染色
Rh123 概述Rhodamine 123（简称 Rh123）是一种广泛应用于细胞生物学研究中的荧光染料，能够选择性地积累在活细胞的线粒体内，因而被广泛用于研究线粒体功能和细胞活力。Rh123 的化学性质非常独特，它是一种亲脂性阳离子染料，能够以其脂溶性轻松穿透细胞膜，并通过线粒体膜电位积累于线粒体内。光学上，Rh123 在激发波长为488 nm时被激活
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科研干货 | 不同抑菌剂的原理及应用
抑菌剂作为抗击病原体的关键工具，在生物医学领域以及日常生活中发挥着重要作用。无论是治疗感染性疾病、保护医疗器械的无菌性，还是延长食品的保鲜期，抑菌剂都在维护公共卫生和医疗安全方面占据着不可替代的地位。随着细菌耐药性的增加和人们对健康需求的不断提升，抑菌剂的使用范围变得越来越广泛，从传统的抗生素到现代的金属离子抑菌剂
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蛋白提取后不马上跑胶可以吗？存储技巧与实验安排详解
蛋白质储存后的可行性取决于实验的时间安排和实验室的资源状况。科学合理地分配时间，并结合蛋白质的稳定性做出决定，是WB实验中的重要策略。对于科研人员来说，在设计实验流程时，尽量预留足够的时间用于每一个步骤，减少蛋白质储存对实验结果的潜在影响。总的来说，蛋白质提取后是否需要立即跑胶，取决于实验时间和蛋白质的特性
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细胞增殖、迁移与ROS检测的实验方法速览
细胞功能实验是现代生物医学研究的重要工具之一，能够帮助科学家从分子和细胞层面揭示细胞的行为特性。在疾病机制研究中，通过观察细胞增殖、凋亡、迁移等功能的变化，可以深入了解疾病的发展进程和细胞异常的原因。同时，细胞功能实验还在药物开发中扮演关键角色。通过对细胞功能的评估，可以快速筛选和验证潜在的药物分子
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siRNA转染实验中的常见问题与解决方案
siRNA（小干扰RNA）是一种通过RNA干扰（RNAi）机制来靶向并降解特定mRNA的双链RNA分子。其主要作用原理是将与目标基因的mRNA序列互补的siRNA引入细胞中，形成RNA诱导的沉默复合体（RISC），该复合体能够识别并切割目标mRNA，进而导致基因沉默。这种机制在基因功能研究中具有重要应用，因为它可以有效、快速地敲低特定基因的表达
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实验干货 | 弃上清蛋白提取法及常见问题
蛋白质是细胞结构和功能的核心执行者，在生物学研究中，蛋白提取是研究其功能、结构及相互作用的基础步骤。无论是用于Western Blot、酶活性检测，还是质谱分析，提取到高质量、完整的蛋白质都是确保实验结果准确性的前提。在蛋白提取过程中，弃上清吸取法 是一种非常常见且高效的方法。这种方法通过离心后丢弃上清液，保留含有蛋白的沉淀或上清部分
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RNA浓度测量的三大方法及提升准确度的实用技巧
RNA浓度测量是分子生物学研究中至关重要的一步。RNA分子在很多关键的生物学过程中发挥作用，比如基因表达调控、蛋白质合成等。因此，RNA的提取和后续实验（如qPCR、RNA-Seq等）都高度依赖于RNA的质量和浓度。在这些实验中，RNA浓度测量直接决定了后续反应的准确性和灵敏度。如果RNA的浓度不准确，后续反应可能会产生错误的结果
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磷酸化蛋白WB实操与实用技巧分享
Western Blot (WB) 是研究蛋白质表达和修饰的重要技术，尤其在蛋白质磷酸化的检测中具有独特优势。磷酸化是一种关键的翻译后修饰，在信号传导、细胞周期调控、增殖与凋亡等生物过程发挥核心作用，因此研究磷酸化蛋白对于理解细胞功能至关重要。由于磷酸化通常是短暂且动态变化的，准确检测磷酸化蛋白的状态尤为重要。Western Blot 能够通过特异性
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宿主细胞蛋白质残留量检测
宿主细胞蛋白质(HCP)残留是指生物制品/原液中含有的宿主细胞的蛋白质成分。通常采用夹心ELISA法测定制品中HCP的残留量，把HCP特异性抗体结合到固相载体上，将供试品与标记抗HCP抗体按不同的步骤与固相载体上的抗体进行免疫反应后，加人反应底物，底物被催化产生的信号值强度与 HCP 含量呈现一定的量效关系，形成标准曲线，根据供试品信号值进行HCP的定量检测
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分子生物实验常用的几种酶的作用原理
限制酶主要存在于微生物(细菌、霉菌等)中。一种限制酶只能识别一种特定的核苷酸序列，并且能在特定的切点上切割DNA分子。是特异性地切断DNA链中磷酸二酯键的核酸酶(“分子手术刀”)。发现于原核生物体内，现已分离出100多种，几乎所有的原核生物都含有这种酶。是重组DNA技术和基因诊断中重要的一类工具酶。例如，从大肠杆菌中发现的一种限制酶只能识别GAATTC序列
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分子生物实验常用的几种酶的作用原理
核酸是一种高分子化合物，核苷酸是构成核酸的基本单位。核酸水解后得到许多核苷酸，核苷酸是组成核酸的基本单位，即组成核酸分子的单体。一个核苷酸分子由一分子含氮碱基、一分子五碳糖和一分子磷酸组成的。根据五碳糖的不同可以将核苷酸分为脱氧核糖核苷酸(DNA)和核糖核苷酸(RNA)。核酸降解是DNA/RNA分子中的碱基和戊糖间的氮糖苷键
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RNA和WB蛋白的关系是怎样的？
qRT-PCR（定量逆转录聚合酶链反应）和Western blot（蛋白质印迹法）是两种常用的生物分子检测技术，它们分别用于检测mRNA和蛋白质的表达水平。虽然蛋白质是由mRNA翻译而来，但mRNA的表达水平总是与蛋白质的表达水平一致吗？做实验任何一个结果如果你验证了几遍都是一样，那么请不要怀疑自己，也许不是你做错了，试图去解释这种现象
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8种常见核酸提取方法
基因作为生物遗传信息的载体，通过基因检测，大众能够发现身体内潜在的疾病风险，及早采取有效的预防或者干扰措施。基因是遗传的基本单元，是产生一条多肽链或功能RNA所必需的DNA片段。可以简单理解为好长一段DNA链中比较特殊某段。而做好基因研究的第一步就是获取核酸，核酸提取通常是开启生物学研究的第一步，而且提取的核酸质量高低也是
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细胞培养皿的规格分类及使用注意事项总结
细胞培养皿 是一种常用的玻璃仪器，主要用于微生物或细胞培养的一种器皿，由一个平面圆盘状的底和一个盖组成，一般用玻璃或塑料制成。细胞培养皿操作步骤避光、干燥阴凉处封闭贮存,严禁与有毒、有害物品混放、混运。本品为非危险产品可按一般化学品运输,轻搬动轻放,防止日晒、雨淋!受热、受潮、受光后易丧失活力,保存期短,因此贮存和运输条件比较苛刻
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实验样本保存的6条吐血经验
科研项目成功的关键是什么?合理的实验设计?严谨的实验操作?等这些都是必不可少的因素之一。但是，还有一项目是容易被忽视-样本，所有的实验的数据都来源实验样本，如果想要得到一个好的实验结果，就必须严格把控实验样本的采集和预处理，保存。样本使用时，需要采取必要的融化和复苏。储存的温度越低，复苏和融化所需的时间越长。当从冷冻状态中解冻时
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WB实验频频失败？可能是你的抗体保存方法不对！
科研项目成功的关键是什么?合理的实验设计?严谨的实验操作?等这些都是必不可少的因素之一。但是，还有一项目是容易被忽视-样本，所有的实验的数据都来源实验样本，如果想要得到一个好的实验结果，就必须严格把控实验样本的采集和预处理，保存。样本使用时，需要采取必要的融化和复苏。储存的温度越低，复苏和融化所需的时间越长。当从冷冻状态中解冻时
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WB实战经验：转膜技巧的关键你知道是什么吗？
在实验室工作中，转膜是一个非常重要的步骤。那么，转膜技巧的关键你知道是什么吗？首先，选择合适的膜是关键之一。不同的膜具有不同的特点，需要根据实验的具体需求进行选择。转移分子量小于20kDa的蛋白时建议使用小孔径的膜 (如0.22μm)，正常情况下使用0.45μm孔径的膜即可。其次，正确的缓冲液配制也至关重要。它会影响到蛋白的转移效果
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4种PCR产物纯化方法对比
硅胶层析柱法：大多数离心柱中吸附DNA的是一层硅胶膜，实际上就是一层玻璃纤维，其表面有大量修饰的硅羟基（Si-OH），硅羟基在溶液中解离后带负电，然后与带正电盐离子、带负电DNA形成电桥，从而吸附住DNA，使得DNA双链变单链，不会被生物大分子溶剂洗脱，但能经水溶性缓冲液水化后，被定量回收，从而实现纯化分离。
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细胞培养生物污染的种类及预防方法
无论新人还是老手，在细胞培养过程中都可能遇到细胞污染的情况。那对于人源细胞或鼠源细胞的污染，最重要的是预防，因为细胞一旦污染，想救是非常困难的，即便救活，细胞状态也会变差，进而影响实验结果，所以先来讲讲如何预防。生物安全柜是细胞处理的主要场所，而培养箱是细胞生长的主要场所，所以细胞污染通常就发生在这两个地方
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细胞培养小知识-何时用瓶皿，何时用孔板培养？
培养细胞时，何时使用培养瓶，何时使用孔板培养，取决于实验目的和需要。一般情况下，原代细胞培养和常规传代培养使用培养瓶，可获得大量实验用细胞；常见的细胞培养瓶分为一次性的塑料和玻璃。在谈及玻璃这种材料时，我们不得不承认其低廉的成本、出色的透光性以及可重复使用的优势。然而，玻璃的清洗过程相当复杂，且不易保存
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一文解锁流式细胞分选的所有秘密
流式细胞术(Flow Cytometry,FCM)是利用流式细胞仪进行的一种单细胞定量分析技术。该技术的核心功能是将多种细胞组成的混合物分类计数，并将感兴趣的细胞分选出来。含细胞的液流在流式细胞仪中被震荡成单个液滴，根据细胞的荧光特性对液滴充电。带电的液滴在高电压偏转板的作用下按荧光特性偏转，被分别收集到不同的容器中，未带电的液滴则进入废液容器。
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流式细胞术如何检测细胞周期和凋亡
细胞周期反映了细胞增殖速度。在这个过程中，细胞的DNA复制并加倍，在分裂结束时平均分配到两个子细胞中去。在细胞周期的不同时相，包括G1/G0期(2C DNA)、S期(介于2C~4C之间)和G2/M(4C DNA)，DNA含量存在差异，用DNA染料(PI是最经典的)进行染色，染料的荧光强度与DNA含量成正比，从荧光强度的变化，可以判断细胞所处的细胞周期时相
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机械分散法与酶消化法分离鸡胚成纤维细胞
原代细胞是直接取自活组织（例如活组织检查材料）的细胞，并建立用于体外生长。原代细胞分离是指将组织分散制成细胞悬液后从中获取目的细胞的过程，获得高纯度、高活性的原代细胞则是很多细胞实验成功的关键要素之一，原代细胞分离的方法有很多种：悬浮离心法、直接组织块法、酶消化法、非酶消化法、机械分散法等
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一文读懂DNA提取及电泳鉴定
DNA提取的目的是从细胞或组织中分离并纯化DNA。通常包括细胞裂解、去除蛋白质和其他杂质、以及DNA的沉淀和纯化。.将组织或细胞悬液加入裂解缓冲液，涡旋混匀。裂解缓冲液中含有变性剂（如胍异硫氰酸盐），可以有效地裂解细胞和组织，破坏细胞膜和细胞核膜，同时使核酸与2.将裂解液转移到DNA Spin Column中，离心收集流穿液
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基因沉默实验：siRNA转染效率验证
siRNA转染后一定时间内，需采用基本方法验证其转染效率，常见验证方式包括Western blot、RT-PCR、流式细胞术及ELISA等，对于含有荧光的质粒，也可采用荧光显微镜直接观察的方式来大致确定转染效率。一般来说，由于转染后的细胞常用于功能学实验，因此应该选用可以确定其转染效率的方法，本文主要分享在mRNA水平或蛋白水平上验证基因沉默的效果
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基因沉默实验：siRNA设计和转染
小干扰RNA（Small interfering RNA；siRNA）是一段长度在20-25个核苷酸之间的RNA双链，其生物应用较多，目前主要用于干扰RNA，达到调节基因表达（敲减）的目的，其本质是siRNA和相应的mRNA特异性结合、降解，继而实现阻滞mRNA继续翻译的目的。
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石蜡切片免疫组化实验流程
免疫组织化学(Immunohistochemistry, IHC)技术是利用抗原抗体特异性结合原理建立的技术，利用带显色剂的抗体原位特异性的标记组织中的抗原，并利用组织化学的显色技术，对相应抗原进行定性、定量和定位的技术，广泛的应用于基础研究和临床病理诊断。免疫组织化学技术所需组织切片可以采用石蜡切片、冰冻切片及细胞涂片
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实验解析｜基因操作中如何选用载体
在基因操作中，载体的选择至关重要，因为它直接影响到基因的表达效率、稳定性、目标细胞的转染或转化效率以及实验结果的可靠性。载体通常是用来携带目标基因并在宿主细胞中进行表达的DNA分子。基因操作中应该如何选用载体呢？
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CRISPR-Cas9系统：慢病毒转染
CRISPR慢病毒转染法是一种高效引入CRISPR基因编辑系统到目标细胞中的技术，旨在实现对基因的有针对性编辑或调控。在进行实验时，可将培养皿中的细胞密度设置为4–5 x 10^6 cells/10 cm，若细胞分裂速率过快，可酌情减少铺板细胞数量，建议在细胞的汇合度达到50–80%时开始进行实验。
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划痕实验（细胞迁移）的实验流程及经验分享
细胞迁移(Cell migration)：因其类似体外伤口愈合过程，又名伤口愈合实验(Wound healing assay)，是指细胞在接收到迁移信号或感受到某些物质的梯度后而产生的移动。可用于可以观察药物、基因等外源因素对细胞迁移、修复和相互作用的影响。在融合的单层细胞上人为制造一个空白区域，称为“划痕/伤口”，划痕边缘的细胞会逐渐进入空白区域使“划痕/伤口”愈合
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原代细胞分离的实验步骤
指直接从活体组织或器官中分离并在体外培养的细胞，保留了与原组织相似的生物学特性和功能。这些细胞在培养中具有有限的增殖能力，但由于其高度的生理相关性，被广泛用于研究细胞生理、疾病机制以及药物筛选等领域。将细胞从组织或器官中提取并进行体外培养的过程。具体步骤包括在无菌条件下获取目标组织，利用酶如胰蛋白酶或胶原酶进行消化
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酵母双杂交(Y2H)实验操作指南
酵母双杂交系统(Yeast two hybrid，Y2H) 常用于分析两种蛋白质的相互作用。将两种蛋白质分别克隆到酵母表达质粒的转录激活因子的DNA结合结构域（DNA-BD）和转录激活域（AD）上，构建成融合表达载体，从而分析两种蛋白质的相互作用。pGBKT7是酵母双杂交bait表达载体，旨在表达GAL4 DNA结合结构域（DNA-BD,1-147 aa）与bait蛋白质的融合蛋白质
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Trizol法和柱式法RNA提取的实验流程和注意事项
Trizol是一种酸性试剂，能从细胞和组织中快速分离RNA，其主要成分为异硫氰酸胍（GITC）和苯酚。裂解细胞后，GITC能使蛋白质和RNase变性，有利于保护RNA的完整性；加入氯仿离心后，样品分为水相和有机相，RNA存在于上层水相中，而DNA和蛋白质则存在于中间层及下层有机相中，从而达到分离的目的。简单来讲就是裂解细胞使RNA得以释放
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细胞消化和传代经验分享
1.试剂准备：培养细胞所需的培养基、胰酶、胎牛血清（简称FBS）、双抗（简称P/S）、PBS缓冲液等从4℃的冰箱中取出，于室温条件下放置至恢复室温。2.耗材准备：50ml离心管、15ml离心管等及移液枪。3.实验条件准备：打开超净台紫外灯照射30min之后通风3-5min即可开始实验。
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细胞稳定转染的操作步骤及经验分享
在进行转染前一天，首先对293T细胞进行胰酶消化处理，并将其培养于10厘米培养皿中，以确保细胞能够充分贴壁且密度达70%-80%。随后，将细胞置于37摄氏度、含有5% CO2的培养箱中孵育8至24小时，待细胞完全贴壁后即可开始进行转染操作。
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如何做好cck-8实验
目前常用的细胞毒性测定方法有MTT法和CCK-8法，相较于MTT法，cck-8法具有无毒性、效率高等优点而被广为使用。CCK-8全称Cell Counting Kit-8，是一种基于WST-8的应用于细胞增殖和细胞毒性的快速、高灵敏度检测试剂盒。其工作原理为在电子耦合试剂存在的情况下，WST-8这一物质可以被线粒体脱氢酶还原成橙黄色的甲臜产物
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细胞计数的实验步骤&常见问题分析
细胞计数在细胞实验中是非常常见的，大多数实验室目前使用细胞计数板进行细胞计数。所用细胞密度达到一定要求后进行细胞计数铺板，提前准备好细胞计数板、盖玻片、计数器。弃掉原有培养基，加入1ml温浴的PBS缓冲液清洗。弃掉PBS缓冲液，加入胰酶消化细胞，消化时间根据细胞类型及日常经验决定。消化相应时间后，加入二倍体积的培养基终止消化
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扫描电子显微镜之植物组织的叔丁醇干燥法
利用扫描电子显微镜观测植物组织表面形貌时，需要先对植物组织进行干燥处理，去除其内部水分。常用的干燥方法有自然干燥法、烘箱干燥法、乙醇干燥法、叔丁醇干燥法和临界点干燥法。其中对于大多数组织而言，叔丁醇干燥法和临界点干燥法在保存组织形态的真实完整性方面较其他方法存在明显优势。但因临界点干燥法需要特殊的临界点干燥仪才能进行
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扫描电子显微镜之植物组织的叔丁醇干燥法
利用扫描电子显微镜观测植物组织表面形貌时，需要先对植物组织进行干燥处理，去除其内部水分。常用的干燥方法有自然干燥法、烘箱干燥法、乙醇干燥法、叔丁醇干燥法和临界点干燥法。其中对于大多数组织而言，叔丁醇干燥法和临界点干燥法在保存组织形态的真实完整性方面较其他方法存在明显优势。但因临界点干燥法需要特殊的临界点干燥仪才能进行
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免疫荧光染色实验的注意事项
石蜡切片的质量直接关系到免疫荧光的染色效果。因此，石蜡切片最好交由技术熟练的人员操作，新手可能会存在即便将切片机调整至3 μm但实际厚度远大于3 μm的情况，从而导致切片太厚，细胞层叠，影响观察。亦有可能因技术不熟练而破坏组织结构，影响实验效果；在进行抗原修复时，要尽量使抗原修复液没过载玻片，以防加热过程中过度挥发导致干片
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给小鼠接种肿瘤细胞如何高效成瘤
这是最常见的接种方法之一，操作简单且肿瘤易于测量。在小鼠的侧腹或背部皮下注射肿瘤细胞悬液，注射时要注意避免注入血管。方法：先固定小鼠，右手持注射器，使针头与小鼠皮肤呈约45度角刺入皮下，当针头进入皮下后，会感到阻力减小，此时轻轻推动注射器活塞，将肿瘤细胞悬液缓慢注入皮下，一般注射量为0.1-0.2mL左右，具体根据实验要求调整
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EDTA在分子生物学中的应用
抑制DNA酶的活性：DNA酶是一种能够降解DNA的酶，在细胞破碎后，如果没有有效的抑制剂，DNA酶可能会降解DNA，导致实验结果不准确。通过添加EDTA，可以有效地抑制DNA酶的活性，保护DNA不被降解，从而确保实验结果的准确性。金属依赖的酶促反应：由于金属离子是许多酶促反应所必需的，EDTA的存在会停止这些酶的活性。因此
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实验用水如何选择？究竟是选去离子水、双蒸水还是超纯水
超纯水（Ultrapure water），又称UP水，是指电阻率达到18 MΩ*cm（25℃）的水。这种水中除了水分子外，几乎去除了所有其他杂质，包括细菌、病毒、有机物以及人体所需的矿物质微量元素。换句话说，超纯水是几乎去除了氧和氢以外所有原子的水。普通水中可能存在的杂质包括微生物（如细菌和藻类）、微粒子（如铁锈、胶体、悬浮物和固体颗粒
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RT-qPCR检测的一步法与两步法及其优缺点
荧光定量PCR其本质是通过荧光探针或荧光DNA结合染料和实时荧光定量PCR仪器对PCR扩增产物进行检测和定量，仪器在PCR热循环的过程中测量荧光。RT-qPCR(定量逆转录 PCR)主要是指以 RNA 作为起始材料进行定量 PCR 实验的方法。需要首先从样本中提取总 RNA 或信使 RNA(mRNA)、再通过逆转录获取 cDNA 模板，最后进行实时荧光定量 PCR 实验
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大揭秘：双荧光素酶实验的应用你都知道哪些？
双荧光素酶实验的核心在于利用荧光素酶（Luciferase）催化荧光素产生发光现象，通过测量发光强度来监测目标基因的表达水平。该系统包含两种不同的荧光素酶：火萤酶（Luciferase）和海藻酸酯酶（Renilla）。这两种荧光素酶都需要ATP作为底物，但它们分别与不同的底物反应而产生不同颜色的荧光。在实验中，首先将感兴趣的DNA片段插入到一个启动子区域上
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干货分享：细胞ROS是什么？如何检测？
目前，用于检测细胞内ROS最广泛采用的方法是DCFH-DA荧光探针法。DCFH-DA（二氯荧光黄双乙酸盐）是一种可指示的探针，其本身不具有荧光，但可以自由穿过细胞膜。一旦进入细胞，它会被细胞内的酯酶水解成DCFH。由于DCFH无法穿过细胞膜，因此荧光探针会在细胞内积聚。细胞内的ROS能够氧化无荧光的DCFH，生成有荧光的DCF
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如何判断qPCR数据是否可用
对于qPCR 数据的质量评估，首先要关注的是 Ct 值。Ct 值是衡量实验中目的基因表达水平的重要指标。通常情况下，我们依据以下标准来评估 Ct 值的结果：①优秀:内参基因的 Ct 值在 14-18 之间，目的基因的 Ct 值也应在 14-18 之间。②良好:内参基因的 Ct 值在 12-20 之间，而目的基因的 Ct 值应在 14-32 之间。③勉强可用:内参基因的
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科研必备｜流式细胞仪测细胞凋亡 FITC/PI
对于qPCR 数据的质量评估，首先要关注的是 Ct 值。Ct 值是衡量实验中目的基因表达水平的重要指标。通常情况下，我们依据以下标准来评估 Ct 值的结果：①优秀:内参基因的 Ct 值在 14-18 之间，目的基因的 Ct 值也应在 14-18 之间。②良好:内参基因的 Ct 值在 12-20 之间，而目的基因的 Ct 值应在 14-32 之间。③勉强可用:内参基因的
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证明一个基因影响细胞凋亡的9种方法!
使用DNA Ladder技术来检测细胞凋亡，它通过观察DNA片段的特殊模式来进行分析（需要注意的是，此方法无法明确区分凋亡和坏死）。利用流式细胞术检测细胞周期中Sub-G1阶段的百分比，从而反映细胞凋亡情况。使用免疫荧光染色技术检测Annexin V和PI的表达，其中Annexin V+/PI-细胞被认为是凋亡细胞借助流式细胞术检测Annexin V和PI的表达水平来评估细胞凋亡
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293T类贴壁不牢细胞该如何操作？
293T细胞系名称中的“T”来自于将 SV40 大 T 抗原整合到 HEK293 基因组中——这意味着它们能够从携带 SV40 复制起点的质粒载体中产生大量蛋白质，形成高转衍生株。该细胞因比较容易转染，被广泛应用于病毒包装，也是常用的表达研究外源基因的细胞株。当收到复苏的常温运输细胞293T时，在显微镜下找不到细胞，可见大部分细胞脱落
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细胞状态欠佳与解决方法
确保冻存保种前细胞鉴定正确、健康、无微生物污染，并且处于对数生长期后期(80-90% 汇合)。缓慢冷冻，⑴按照常规方法悬浮细胞或贴壁细胞收集于离心管中;⑵用1000rpm-1500rpm，5min离心，弃上清液。⑶加入适量的冻存液，混合均匀，制成细胞悬液。(推荐细胞冻存浓度为1 x 10^6 cells /ml) ⑷分装于已标示的冻存管中。⑸将冻存管细胞放入程序降温盒
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血清到底要不要做热灭活？哪些细胞需要做热灭活？
如果用于培养大多数的肿瘤细胞，血清一般是不需要灭活的，这样可以有效保存血清中的生长因子。但是如果用于培养一些表面具有补体受体的细胞，如内皮细胞，血清是需要灭活，一般是56℃，30min。那么我要做滋养细胞培养，胎牛血清要做热灭活吗？进口的血清一般都已灭活，国产的不一定，我们的经验还是灭活一下再用会比较安全。国外大多数实验室将血清的
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血清到底要不要做热灭活？哪些细胞需要做热灭活？
如果用于培养大多数的肿瘤细胞，血清一般是不需要灭活的，这样可以有效保存血清中的生长因子。但是如果用于培养一些表面具有补体受体的细胞，如内皮细胞，血清是需要灭活，一般是56℃，30min。那么我要做滋养细胞培养，胎牛血清要做热灭活吗？进口的血清一般都已灭活，国产的不一定，我们的经验还是灭活一下再用会比较安全。国外大多数实验室将血清的
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如何判断细胞的状态?
在细胞培养工作中，正确判断细胞状态不仅直接影响到后续实验结果的准确性，也关乎到细胞培养工作的顺利进行。1.细胞形态的观察是判断细胞状态最直观的方法之一。活细胞通常具有透亮的外观和完整的细胞膜，而死细胞则呈现暗淡无光且细胞膜可能出现碎裂的情况。2.通过显微镜下的观察，可以清晰地看到细胞的形态和结构，从而初步判断细胞的生死状态
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ELISpot酶联免疫吸附斑点实验
ELISpot结合了细胞培养技与ELISA技术，能够在单细胞水平检测细胞因子的分泌情况。其技术原理就是用抗体捕获细胞分泌的细胞因子，并通过酶促反应，将该细胞显示出来。该技术灵敏度高，在一百万个阴性细胞中只要有一个分泌细胞因子的阳性细胞即可被检测出来。这是目前为止，最为灵敏的检测技术，灵敏度比传统的的ELISA方法高2-3个数量级。目前在疫苗领域
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小鼠Treg细胞诱导方案
使用抗小鼠CD4、CD25的抗体进行细胞表面标记物的染色。固定破膜后，使用抗小鼠FoxP3的抗体进行核内染色。使用流式细胞仪鉴定Treg细胞（CD4+ CD25+ FoxP3+）比例。若有必要，进行功能性检测，如抑制性实验，以确认Treg细胞功能。
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Th17细胞诱导分化实验流程
离心后，分层会形成3层：上层为血浆和PBS、下层为红细胞和颗粒细胞，中层为淋巴细胞分离液。PBMC为下层顶端和中层底端的白色薄膜层。小心收集PBMC层，并转移至新的离心管中。用PBS洗涤PBMC 2次，每次以300 g离心10分钟。按照生产商提供的说明书使用CD4+ Naive T细胞分选试剂（Biotinylated Antibody Cocktail）标记PBMC
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Protocol-基于PEI的HEK293转染方案
聚乙烯亚胺（Polyethyleneimine，PEI）是一种合成聚合物，在pH中性溶液中具有极高的正电荷密度。带正电的PEI与带负电的DNA紧密结合，赋予DNA净阳离子电荷，使其能够进入细胞。PEI具有较强的细胞转染能力，并且经济廉价，常用于转染HEK293和CHO细胞的非病毒载体，其应用包括重组蛋白、抗体和病毒的生产。本方案主要介绍
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ISHAGE CD34+干祖细胞绝对计数
ISHAGE CD34+干祖细胞绝对计数是一种在造血干细胞移植、基因转染和造血祖细胞（HPC）扩增等临床及实验室应用中至关重要的检测方法。定义：ISHAGE CD34+干祖细胞绝对计数是指采用ISHAGE（International Society of Hematotherapy and Graft Engineering，国际血液治疗和移植工程学会）方案，通过流式细胞术对CD34+细胞进行绝对计数的检测方法
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ArC™ 胺活性染料补偿微球
ArC™胺活性染料补偿微球，即ArC™胺反应性补偿微珠试剂盒，是一种基于微珠的补偿工具，经专门优化，适合与LIVE/DEAD™可固定死细胞染色试剂盒配合使用。即用型对照品：与需要样品制备以使用细胞材料生成补偿对照品的其他方法不同，ArC™胺活性染料补偿微球从滴瓶取出即可使用，无需加热处理细胞作为对照，从而节约珍贵样品
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流式细胞分选仪喷嘴和O圈的使用和维护
流式细胞分选仪的喷嘴和O圈是其关键部件，对仪器的性能和稳定性至关重要。流式细胞分选仪的喷嘴和O圈的使用和维护是确保仪器性能和稳定性的重要环节。通过正确的使用和定期的维护，可以延长仪器的使用寿命，提高实验结果的准确性和可靠性。
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白细胞减少的血液制品中残留白细胞的计数
残留白细胞的计数在血液制品的生产和质量控制中具有重要意义。通过计数残留白细胞的数量，可以评估血液制品中白细胞的去除效率，从而确保血液制品的安全性和有效性。此外，该计数方法还可以用于监测输血后患者的免疫反应和并发症情况，为临床输血提供重要的参考信息。白细胞减少的血液制品中残留白细胞的计数是一个复杂而重要的过程
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如何保持微球稳定性？
质量检测：在微球生产和使用过程中，应进行严格的质量控制。包括检测微球的粒径、形状、表面电荷等性能参数，确保其符合使用要求。稳定性监测：定期对微球的稳定性进行监测。包括观察微球的分散状态、颜色变化等，以及检测其性能参数是否发生变化。如发现异常情况，应及时采取措施进行处理。保持微球的稳定性需要从选择合适的保存液
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细胞连接和细胞外基质
细胞连接是指在细胞质膜的特化区域，通过膜蛋白、细胞骨架蛋白或者胞外基质形成的细胞与细胞之间、细胞与胞外基质之间的连接结构。它是多细胞有机体中相邻细胞之间通过细胞膜相互联系、协同作用的重要组织方式。细胞连接在结构上常包括质膜下、质膜及质膜外细胞间几个部分，对于维持组织的完整性非常重要，有的还具有细胞通讯作用
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巨噬细胞在组织修复、再生和纤维化中的作用
巨噬细胞在纤维化过程中具有双重作用。一方面，在纤维化进展过程中，损伤性炎症触发巨噬细胞向受损部位募集，释放细胞因子和趋化因子，驱动相关细胞活化产生细胞外基质（ECM），导致纤维化。另一方面，在纤维化消退后，巨噬细胞分泌基质金属蛋白酶（MMPs），有助于降解纤维化ECM，以及阻断炎症反应、促进组织再生
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B细胞和T细胞受体识别抗原
B细胞和T细胞是免疫系统中的两种关键细胞，它们通过各自的受体识别抗原，从而引发免疫反应。B细胞和T细胞通过各自的受体识别抗原，从而引发免疫反应。B细胞主要通过BCR识别并结合抗原，产生特异性抗体来中和抗原活性；而T细胞则通过TCR识别由MHC分子呈递的抗原肽复合体，并引发细胞免疫应答。两种细胞在免疫反应中相互协作，共同维护机体的免疫稳态
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D-1和PD-L1还分不清楚？
在肿瘤免疫治疗领域，PD-L1成为了一个重要的治疗靶点。通过开发针对PD-L1的单克隆抗体药物，可以竞争性地与人体内的PD-L1结合，从而阻止PD-1和PD-L1的结合，解除它们结合所介导的免疫功能抑制。这可以使人体内的CD8+T细胞被重新激活，并在肿瘤的微环境中大量聚集，启动抗肿瘤免疫反应。目前，已经有多种针对PD-L1的单克隆抗体药物被批准用于治疗多种类型的肿瘤，如肺癌、黑色素瘤等
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DNA提取实验大全|看看哪种更适合你！
在基因组DNA提取过程中，细胞裂解是一个至关重要的步骤，主要采用物理机械法和化学法两种方法。这些方法可以相互结合运用，以确保细胞得到彻底破碎，使核酸复合物充分暴露，有利于后续的核酸提取和纯化步骤。目前市面上的裂解液通常都含有去垢剂，如SDS、TritonX-100、NP-40、Tween 20等，以及盐溶液，例如Tris、EDTA、NaCl等
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什么时候需要构建稳定细胞株呢？
稳定转染，即进入细胞的质粒整合入细胞基因组中，并能随细胞分裂稳定传递下去。这是相对瞬时转染而言的。瞬时转染的表达，外源基因导入整合基因组的几率非常低，绝大部分以游离形式存在，导致最后拷贝数被稀释，无法达到持续表达外源基因的目的。一般用转染试剂进行质粒转染，多为瞬时转染
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体液免疫和细胞免疫有什么区别和联系呢
体液免疫主要通过抗体分子与抗原结合的方式来实现免疫效应。抗体能够中和抗原的毒性，或促进吞噬细胞对抗原的吞噬消化。细胞免疫则主要通过T细胞直接裂解靶细胞的方式来实现免疫效应。此外，T细胞还可以通过释放淋巴因子来增强免疫效应，这些淋巴因子能够激活其他免疫细胞，如巨噬细胞、自然杀伤细胞等，共同杀伤靶细胞
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免疫学基础：体液免疫
体液免疫通常是特异性免疫的一种表现形式。特异性免疫也称为获得性免疫或适应性免疫，它针对特定的病原体产生特定的免疫应答。体液免疫通过浆细胞产生的抗体来杀死靶细胞或中和病原体，从而达到保护机体的目的。因此，体液免疫是特异性免疫的重要组成部分。综上所述，体液免疫是免疫学中的一个重要概念，它涉及多种免疫细胞和细胞因子的相互作用
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CD4+效应T细胞的分化和功能
D4+效应T细胞在人体的免疫反应系统中至关重要，1.辅助免疫作用：CD4+T细胞可以辅助CD8+T细胞参与细胞免疫杀伤，清除肿瘤细胞或被病毒感染的细胞；同时也可以辅助B细胞参与体液免疫，促进抗体的产生。2.细胞毒性作用：CD4+T细胞可以分泌白介素-2（IL-2）、白介素-10（IL-10）等细胞因子，这些细胞因子能够激活CD8+T细胞，间接杀伤被病毒或细菌感染的细胞
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DC细胞在免疫系统中主要担任什么角色
DC细胞如同免疫系统的哨兵，时刻监视着体内的异常信号。它们能够高效地摄取、加工处理病原体（如病毒、细菌）或其他外来抗原，将其分解成小片段，并以MHC-抗原肽复合物的形式展示在细胞表面。这一过程使得DC细胞成为连接先天性免疫和适应性免疫的关键桥梁，因为它们能够将抗原信息传递给T细胞和B细胞，从而启动适应性免疫反应
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白细胞循环和向组织的迁移
白细胞向组织的迁移是机体免疫反应的重要组成部分。通过这一过程，白细胞能够迅速到达受损部位，吞噬并清除病原体、细胞碎片等有害物质，从而维护机体的健康状态。同时，白细胞的迁移还能够促进炎症反应的消退和组织修复的进行。综上所述，白细胞的循环和向组织的迁移是机体免疫反应中不可或缺的环节。它们通过复杂的分子机
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什么是趋化因子,它们是如何作用的
趋化因子的主要作用是诱导细胞定向迁移。被趋化因子吸引的细胞会沿着趋化因子浓度增加的信号向趋化因子源处迁徙。这一过程涉及到趋化因子与靶细胞表面的趋化因子受体（G蛋白偶连的跨膜受体）的相互作用。当趋化因子与受体结合后，会触发一系列细胞内信号转导，最终导致靶基因的转录，涉及细胞侵袭、运动、与细胞外基质的相互作用和生存
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免疫系统的细胞和组织
免疫系统是由多种细胞和组织构成的复杂网络，它们共同协作以维护机体的健康状态。 皮肤免疫系统：皮肤是机体最大的器官之一，也是抵御外来病原体入侵的重要屏障。皮肤免疫系统包括表皮层、真皮层以及皮肤附属器（如毛发、汗腺和皮脂腺）中的免疫细胞和组织。这些免疫细胞和组织能够识别和清除病原体，同时维持皮肤的稳态
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IDO/TDO抑制剂
IDO（吲哚胺2,3-双加氧酶）和TDO（色氨酸2,3-双加氧酶）是人体内能够催化相同生化反应的酶，但具有不同的组织分布和底物选择性。它们在色氨酸代谢中起着关键作用，并参与了肿瘤免疫逃逸的机制。因此，IDO/TDO抑制剂在肿瘤免疫治疗中具有潜在的应用价值。综上所述，IDO/TDO抑制剂作为肿瘤免疫治疗的新靶点和新策略
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抗原呈递与T细胞活化
抗原呈递是T细胞活化的前提和基础。没有抗原呈递细胞将抗原处理并展示到细胞表面，T细胞就无法识别抗原并被激活。同时，T细胞的活化也依赖于抗原呈递细胞提供的共刺激信号。因此，抗原呈递与T细胞活化是相互依存、不可分割的两个过程。综上所述，抗原呈递与T细胞活化是适应性免疫应答中的关键步骤。它们共同构成了免疫系统对抗外来病原体和异常细胞的重要防线
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小鼠骨髓细胞染色体标本制作实验
秋水仙素的注射时间要准确，太长或太短都会影响染色体中期的数目和形态。在低渗过程中，时间和吹打力度都很重要。低渗过渡会导致染色体膨胀、染色后肥胖；低渗时间不够则染色后染色体颜色深、看不出条带。滴片时要有一定的高度和速度，使细胞膜破裂后染色体易于散开并铺展在载玻片上。染色时间要根据室温、染液浓度和实验要求进行调整
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SDS-PAGE蛋白电泳实验
SDS-PAGE电泳的原理基于SDS（十二烷基硫酸钠）和还原试剂将蛋白质分子解聚后，亚基的大小不同，在恒定pH（碱性）缓冲系统中对其进行分离。SDS是一种阴离子去污剂，能将分子内和分子间的氢键断裂，使蛋白质分子去折叠，破坏其二级和三级结构。同时，强还原剂（如β-巯基乙醇、二硫苏糖醇DTT）能使半胱氨酸残基之间的二硫键断裂。在样品和凝胶中加入SDS和强还原剂后，经过高温处理
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磷酸化蛋白WB没结果？
为了确定观察到的磷酸化水平改变是否是由于磷酸化程度的改变，还是仅仅因为蛋白质本身表达量的改变，除了常用的内参（如Actin、GAPDH等）外，还需要添加一个总蛋白作为参照。这有助于分析磷酸化水平的变化。综上所述，磷酸化蛋白WB实验没有结果可能由多种因素导致。为了获得可靠的实验结果，需要在实验前进行充分的准备和调研
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免疫组化小课堂：如何精准掌握DAB显色终止时机？
在免疫组化实验中，背景染色是常见问题之一。过重的背景会影响图像清晰度和目标蛋白的显色效果。为了降低背景染色，建议适当减少DAB浓度或缩短显色时间。此外，在显色前进行充分的封闭处理，例如用正常血清或封闭缓冲液封闭非特异性结合位点，可有效减少背景干扰。封闭时间和试剂的选择应根据抗体和样本类型调整，以获得最佳效果
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实验干货 | 掌握7大亚细胞器的染色标志物
这些标志物主要用于观察高尔基体的动态变化及其在细胞分泌途径中的功能。高尔基体在细胞内负责蛋白质的加工和分泌，对研究细胞分泌通路有重要意义。GM130和Giantin等标志蛋白适用于固定细胞的高尔基体结构染色，而Golgi-Tracker则适合活细胞。细胞骨架标志物用于观察细胞内部的支撑结构和动态变化。Phalloidin、α-Tubulin和Vimentin分别标记微丝
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干货|简直强的可怕磷酸化蛋白WB的成功经验总结！
首先，针对洗脱过程中的一些关键步骤，如膜必须完全浸泡在洗脱液中并进行良好的密封，然后在水中进行充分浸泡，以确保膜受热均匀。这一步骤至关重要，因为若膜受热不均会导致压出的总蛋白和内标不均一，在结果分析时将无法进行准确比较，从而影响实验结果的准确性。需要注意的是洗脱液的作用是去除已结合的抗体，但同时也会去除部分蛋白
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实验干货|冰冻切片vs石蜡切片！
冰冻切片是一种生物组织切片的方法，它利用低温将组织迅速冷冻到一定硬度，然后进行切片。相比于传统的石蜡切片，冰冻切片的制作过程更迅速简便，因此被广泛应用于手术中的快速病理诊断。此外，冰冻切片技术也是组织化学和酶组织化学中最常用的切片方法之一。通过冰冻切片，可以在较短的时间内获得高质量的生物组织切片
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蛋白-蛋白互作”的10种常用技术
蛋白质-蛋白质互作（PPI，Protein-Protein Interaction）是生物学研究中的关键领域，对于理解细胞功能、疾病机制和药物开发具有重要意义。1.原理：将大量蛋白质固定在芯片表面，然后与待测样品进行反应，通过检测反应结果来判断蛋白质之间的相互作用。2.应用：高通量地筛选蛋白质相互作用，适用于大规模PPI研究。这些技术各有优缺点
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胶质母细胞瘤与巨噬细胞的代谢互作
乳酸脱氢酶LDHA调控的代谢重编程：乳酸脱氢酶LDHA在胶质母细胞瘤细胞中调控代谢重编程，促进有氧糖酵解，产生高水平的乳酸。LDHA还调控巨噬细胞浸润肿瘤微环境，通过细胞外信号调节激酶（ERK）途径激活YAP/STAT3转录共激活剂，上调CCL2和CCL7等因子，吸引巨噬细胞进入肿瘤微环境。肿瘤细胞和TAM之间的这种相互关系形成了一个正反馈回路，加剧了肿瘤的进展
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小分子药物-蛋白互作”的7种常用技术
小分子药物与蛋白互作（即小分子药物与蛋白质相互作用）是药物研发和生物医学研究中的重要领域。为了深入研究这种相互作用，科学家们开发了多种技术。利用小分子药物与蛋白质结合后，其光谱特性（如紫外-可见光谱、荧光光谱、圆二色性等）会发生变化的特点，来研究它们之间的相互作用。例如，通过紫外-可见光谱可以观察到药物小分子与蛋白质相互
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CCK8再镜下趋势是对的，为什么测出来的OD值却不对？？
细胞接种数量与密度：当细胞接种数量过多时，细胞可能会重叠生长，导致测得的OD值偏高。细胞密度过高还可能影响药物的均匀分布，从而影响实验结果。细胞接种密度过大时，基于细胞膜上糖蛋白的识别作用以及细胞间的相互作用，细胞会出现“接触抑制”，可能使得不同处理组之间的差异变得不明显，导致组间OD值差异小
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反相色谱柱和凝胶过滤色谱柱有什么区别
反相色谱柱和凝胶过滤色谱柱在色谱分离技术中各有其独特的应用和原理，凝胶过滤色谱柱：又称凝胶排阻色谱或分子筛色谱，基于分子的大小和形状差异进行分离。小分子可以进入凝胶的孔隙内部，而大分子则被排斥在凝胶颗粒外，因此大分子会较快地流动，小分子则因在凝胶内滞留较长时间而流动较慢。综上所述，反相色谱柱和凝胶过滤色谱柱在分离原理
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NK免疫细胞回输对炎症感染有用？
NK细胞，即自然杀伤细胞，是机体免疫系统中的重要组成部分。它们在人外周血中占据淋巴细胞的5%~10%，是固有免疫系统不可或缺的一环。NK细胞以其独特的杀伤活性和广泛的免疫调节功能，在抵抗病原体入侵、清除衰老及病变细胞、预防和治疗肿瘤等方面发挥着重要作用。它们不受MHC（主要组织相容性复合体）限制
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HPLC检测蛋白纯度的原理和方法
HPLC检测蛋白纯度的原理主要基于不同蛋白质与色谱柱中固体吸附剂的相互作用差异。当蛋白样品被注入装有固体吸附剂的色谱柱时，各蛋白质组分与吸附材料的相互作用程度不同，导致它们在色谱柱中的保留时间和流出速度存在差异。这种差异使得蛋白质得以分离。分离后的蛋白质再经过检测系统，如紫外检测器或荧光检测器
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检测胎牛血清中蛋白质含量的方法
分光光度法是一种基于物质对光的选择性吸收而建立的分析方法。在检测胎牛血清中的蛋白质含量时，可以利用蛋白质与特定染料（如Bradford试剂）结合后产生颜色变化的特性，通过测量反应产物在特定波长下的吸光度来计算蛋白质的含量。分光光度法具有操作简便、灵敏度高、重复性好等优点，是实验室中常用的蛋白质定量方法之一
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低氧环境下细胞适应性机制研究
细胞在低氧环境下的适应性机制是一个复杂而精细的过程，涉及能量代谢的重塑、HIF的激活、血管生成的诱导以及抗氧化应激能力的增强等多个方面。这些机制共同作用于细胞，使其能够在低氧环境中生存并维持一定的功能。未来的研究将进一步探讨这些机制的详细作用机制及其在临床应用中的潜力，为相关疾病的预防、诊断和治疗提供新的思路
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胎牛血清有沉淀以后还能继续使用吗？
胎牛血清（Fetal Bovine Serum，FBS）在细胞培养中扮演着重要的角色，为其提供必要的营养成分和生长因子。然而，当胎牛血清出现沉淀时，其使用可能会受到一些影响。胎牛血清有沉淀后能否继续使用取决于沉淀的性质和量以及血清的整体质量。在判断和处理过程中，应综合考虑多个因素并采取相应的措施来确保细胞培养的安全性和有效性
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胎牛血清在神经细胞体外培养中的重要性和特殊性
胎牛血清在神经细胞体外培养中扮演着至关重要的角色，胎牛血清在神经细胞体外培养中具有重要的作用，但其使用也具有一定的特殊性。为了确保实验的稳定性和可靠性，需要合理选择胎牛血清的浓度、批次、处理方法等，并关注其潜在的风险和影响因素。胎牛血清富含生长因子、蛋白质、细胞外基质成分等，这些都是神经细胞生长、分化和功能维持所必需的
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DNA复制方向之谜：为何是5'到3'？
从生物进化与适应的角度来看，DNA复制方向的选择是为了节省能量并有利于错配核苷酸的校正。如果DNA复制是在3'→5'的方向上进行，那么就需要额外的能量供应以及别的酶参与反应，才能使聚合反应得以继续。这样既费时又耗能，从生物进化的角度来看是不利的。因此，通过进化，DNA复制选择了在5'→3'方向添加新核苷酸的方式，以解决这一问题
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干货分享 ▏Get这些常规细胞实验！
细胞周期不同时期的DNA含量不同。正常细胞在G/G1期具有二倍体细胞的DNA含量(2N)，而在G2/M期则具有四倍体细胞的DNA含量(4N)。S期的DNA含量介于二倍体和四倍体之间。碘化丙锭（PI）可以与细胞内的DNA和RNA结合，通过RNA酶将RNA消化后，检测到与DNA结合的PI荧光强度可以直接反映细胞内DNA含量的多少。因此，采用流式细胞术PI染色法检测细胞内DNA含量时
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Taq DNA聚合酶有哪些种类？
高保真Taq DNA聚合酶：这种酶具有较低的错配率，适合对PCR保真性要求较高的实验，如基因筛选、测序、突变检测等。高保真Taq酶的保真原理在于其具有3'到5'核酸外切酶的活性，能够校正错配的核苷酸。市面上主要有两类高保真酶产品：一类是混合型的高保真酶，将带有Proofreading活性的酶与普通Taq酶（用于提高扩增效率）混合起来；另一类是单一型的高保真酶
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蛋白煮沸变性时爆管，咋办？
在蛋白煮沸变性过程中，爆管是一个常见的问题，它可能由多种因素引起，包括高温、压力以及离心管的质量等。通过选择合适的离心管、调整煮沸条件、改进操作技巧以及注意其他相关事项，可以有效降低蛋白煮沸变性时爆管的风险。选用高质量离心管：购买质量好的离心管，以减少因材质或制造缺陷导致的爆管风险
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移液器的结构和使用方法
放液时，将吸头紧贴容器内壁，把控制按钮压到第二停点，将全部液体排出。放液时如果量很小则应吸头尖端可靠容器内壁。吸有液体的移液枪不应平放，吸头内的液体很容易污染枪内部而可能导致枪的弹簧生锈。移液枪吸头在样品中的入液角度应当尽量接近90度，与垂直方向偏离不超过20度。角度太大可能导致吸头中吸入太多的液体，造成吸液不准确
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TRIZOL法提取细胞中的总RNA
放液时，将吸头紧贴容器内壁，把控制按钮压到第二停点，将全部液体排出。放液时如果量很小则应吸头尖端可靠容器内壁。吸有液体的移液枪不应平放，吸头内的液体很容易污染枪内部而可能导致枪的弹簧生锈。移液枪吸头在样品中的入液角度应当尽量接近90度，与垂直方向偏离不超过20度。角度太大可能导致吸头中吸入太多的液体，造成吸液不准确
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Lipofectamine™ 2000瞬时转染的实验流程
Lipo2000试剂的使用范围较广，它不仅可以用于质粒DNA转染、siRNA表达载体、双链核糖核酸dsRNA转染, 以及RNA等核酸转染，还可以用于文库筛选的高通量转染。因转染效率依赖于细胞培养密度，而Lipo2000脂质体转染试剂具有细胞毒性，使用时需确保高细胞密度进行，建议根据细胞生长速度提前种板并使用不含抗生素的培养基培养
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BCA法检测蛋白浓度
BCA法因其操作简便、灵敏度高、抗干扰能力强等优点而被广泛应用于生物化学、分子生物学、医学等领域中的蛋白质定量测定。它不仅可以用于纯化蛋白质的定量，还可以用于细胞裂解液、血清等复杂样品中的总蛋白质浓度测定。此外，BCA法还可以与其他技术相结合，如电泳、质谱等，用于蛋白质的进一步分析和鉴定
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悬浮细胞的瞬时转染操作
质粒不同，所转染的细胞不同及定量的准确性等因素会导致在一些情况下转染效率低，蛋白表达量低，基于这种情况需要对质粒转染试剂的配比、DNA的浓度、质粒与转染试剂的聚合时间进行优化。DNA纯度：使用去内毒素的质粒大提试剂盒，细菌产生的内毒素对细胞状态有很大的影响。用于转染的质粒DNA必须无蛋白质，无RNA和其他化学物质的污染
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外泌体分离的实验方法和注意事项
分离外泌体的过程可能用到15/50ml离心管的离心机，这个比较大型的离心机对于管子的配平十分重要，严格一些的可能还需要对要离心的管子进行称重配平。另外，离心机也会设置最高转速的限制，因此离心过程需要格外注意。也可以进行2ml或5ml的离心管进行分装，使用小型的离心机进行高速离心，但这种情况会导致收集浓度降低
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慢病毒制备和导入细胞的操作步骤及注意事项
通过病毒介导将核酸导入哺乳动物细胞是一种常用的实验技术，被广泛用于基因传递、基因表达和功能研究等领域。一旦病毒进入细胞内部，它会释放出核酸负链，该负链会被细胞核内的转录和翻译机制利用。目标核酸的表达产物（例如蛋白质）会在细胞内合成，并根据实验需要发挥其功能。根据实验目的，可以对细胞和表达产物进行进一步的分析
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锁核苷酸LNA：一种提高dsDNA稳定性的方法
LNA是一种特殊的双环状核苷酸衍生物，其结构中含有一个或多个2’-O, 4’-C-亚甲基-β-D-呋喃核糖核酸单体。通过核糖中的2’氧原子和4’碳原子之间的亚甲基桥键，LNA的糖环被锁定成为一个双环的分子模式。这种结构能够很好地限制糖环的灵活性，降低核糖结构的柔韧性，并增加磷酸盐骨架局部结构的稳定性
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实验小鼠的选择及灌胃操作
小鼠的生长发育和人相比要迅速很多，4-6周小鼠身体各个器官已逐渐成熟；6-8周可到达性成熟；3-6月小鼠步入成年期。一般情况下选择6-8周小鼠作为实验对象，此时小鼠身体各个器官发育成熟，生命健康指数良好，并且在之后的2-3个月的实验周期中，小鼠各个方面都处于很健康的状态。订购时小鼠要选比实验要求小1-2周的，因为一般小鼠进入实验室后
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人血浆IgG分离、纯化实验
硫酸铵沉淀法可用于从大量粗制剂中浓缩和部分纯化蛋白质。用此方法可以将主要的免疫球从样品中分离，是免疫球蛋白分离的常用方法。高浓度的盐离子在蛋白质溶液中可与蛋白质竞争水分子，从而破坏蛋白质表面的水化膜，降低其溶解度，使之从溶液中沉淀出来。各种蛋白质的溶解度不同，因而可利用不同浓度的盐溶液来沉淀不同的蛋白质。这种方法称之为盐析
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GC-1 spg细胞的培养流程及注意事项
培养细胞所用的培养基及血清等试剂最好沿用之前的，切忌频繁更换；弃去旧的培养液时最好不要直接倒掉，以免瓶口有残留造成污染；用胰酶消化细胞时，可轻轻晃动培养瓶，并在显微镜下观察，细胞间隙变大，轻晃培养瓶细胞可自然流下时即可终止消化，切忌剧烈拍打培养瓶；对于难消化的细胞可以分两次进行消化，以防胰酶消化时间过长对细胞造成损伤
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Caco2细胞培养经验分享
Caco2细胞是常见的结肠腺癌细胞，正常情况下，Caco2细胞在培养的过程中贴壁生长，其形态多为多边形或梭形，增殖速度较快，其镜下形态如下图所示，密度已大于90%，可以进行传代。提前将水浴锅温度调至37℃，从液氮罐中拿出细胞，迅速放在37℃水浴锅中轻轻晃动，使细胞快速融化，融化后用移液器轻轻混匀，将其转移到15ml离心管内
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CHO-K1仓鼠卵巢细胞株的培养方法
在摄氏37度的水浴中轻轻搅动，为防止受到污染，不要把O形环和盖子放在外面。解冻应迅速（约2分钟）。解冻后把冻存管尽快从水中拿出来，用75% 乙醇浸泡或喷洒消毒乙醇。从现在开始所有的操作都应该进行在严格的无菌条件下进行。将细胞悬液转移到含有9 ml完全培养基的离心管中，10000 rpm离心5分钟。弃上清，用完全培养基重悬细胞，转移至T25细胞培养瓶中
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手把手教学——CHO细胞培养经验分享
CHO细胞（Chinese hamster ovary cell，CHO）一个转化细胞系，1957年从中国仓鼠卵巢细胞得到。CHO细胞目前是现代制药企业进行研发、生产生物治疗药物 (单抗、酶、激酶和激素等) 中最常用的非人类哺乳动物细胞系。准备好离心管中放入3ml完全培养基，并确保水浴锅打开并达到37℃，从-80℃冰箱取出目标冻存管，放入密封袋并在水浴锅中迅速摇晃解冻
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手把手教学｜一文弄懂细胞迁移和侵袭实验
细胞迁移实验是研究细胞在体外条件下移动能力的一种实验方法，广泛应用于细胞生物学、肿瘤学和免疫学等领域。细胞迁移实验基于细胞对环境变化的反应能力，这些变化可以是物理的（如空间间隙）或化学的（如梯度差）。实验目的是模拟并观察细胞如何在这些条件变化下移动，从而了解细胞迁移的机制和影响因素
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手把手教学｜细胞毒性检测法（Calcein-AM/PI双染法）
细胞毒性检测法（Calcein-AM/PI双染法）是一种常用的细胞活力和毒性评估方法。其原理基于细胞膜的完整性和代谢活性两个关键指标。在实验中，通过使用两种荧光染料Calcein-AM和PI（Propidium Iodide），可以快速准确地评估细胞的状态。Calcein-AM是一种脂溶性的非荧光染料，可以穿过完整的细胞膜进入细胞内部。在细胞内
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【动物实验必看】小鼠胰岛分离纯化
通过胶原酶消化法分离小鼠胰腺中的胰岛。胶原酶的作用是分解胰腺的结缔组织，从而释放胰岛细胞。利用口吸管在体视显微镜下挑取形态完整的胰岛。该方法操作简单、重复性好，每只小鼠可获得50～100枚胰岛，细胞成活率达到95%以上。根据实验需要选用放血方式，血液对胶原酶消化影响很大，故放血后观察胰腺仍为白色没有回血发红为佳
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超净工作台与生物安全柜有哪些区别
超净工作台的主要目的是为实验样品提供一个无菌的工作环境。它通过HEPA过滤系统产生单向的层流气流，防止空气中的颗粒物和微生物污染实验样品。因此，它广泛应用于无菌操作，如细胞培养、制药行业的样品制备，以及电子行业中的精密仪器装配。然而，超净工作台通常不提供对操作人员和环境的保护，仅保护样品免受污染
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PCR实验室核酸污染怎么消除？
实验室消除PCR污染是一个复杂而细致的过程，需要严格遵守操作规范，采取一系列有效的措施来防止和消除污染。对于空气消毒，可以使用75%酒精空中喷雾，并开启紫外消毒装置延长照射时间（如4小时以上）。若污染比较严重（如大量溢撒时）可用过氧化氢加热熏蒸实验室，剂量为2g/m3，熏蒸过夜；或20g/L过氧乙酸消毒液用气溶胶喷雾器喷雾
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一文掌握细胞增殖的七种方法
生长因子是调节细胞增殖、迁移和分化的蛋白质或肽。常用的生长因子包括表皮生长因子（EGF）、成纤维细胞生长因子（FGF）和胰岛素样生长因子（IGF）。这些生长因子通过与细胞表面受体结合，激活细胞内信号转导路径，促进细胞进入增殖周期。在培养基中添加适量的生长因子可以显著提高特定细胞类型的增殖率
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影响细胞生长的因素汇总，超全！
氧和二氧化碳是细胞生存必需的条件之一。氧参加细胞的三羧酸循环，产生能量以供给细胞生长、增殖和合成各种所需成分。采用开放式培养时(碟皿或培养瓶松盖培养或培养板培养)，一般要把细胞置于95%空气加5%二氧化碳的混合气体环境中。CO2既是细胞的代谢产物，又是细胞生长所必需的成分，并与维持培养液的pH有关
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【收藏】常用微生物分型技术总结
生物学分型系指通过生物化学反应和某些生物学性状的不同对细菌进行的分型。传统生化分型主要使用API 20E 系统、VITEK 2 AES系统等生化鉴定系统，是根据致病菌的生理生化特征进行的一种分型方法，目前多数微生物学实验室均能用手工或自动化系统进行这项检测，生物分型一般很可靠，并能有效地检出多种异常菌种而确定流行病的爆发
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手把手教学｜如何用流式细胞仪分选T细胞
流式细胞术（Flow Cytometry, FCM）是一种单细胞定量分析技术，该技术通过测定库尔特电阻、荧光、光散射和光吸收等参数，可以定量分析细胞的结构特征（如DNA含量、蛋白、细胞膜、胞浆或胞核抗原表达量）和功能特征（如细胞内酶活性、钙流变化等）等多种重要参数，进行细胞特征分析与分选。它的核心功能是将混合物中的不同细胞分离并计数
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流式细胞术实验设计要点
在流式细胞术实验设计中，样品的准备和对照的设置是至关重要的。这包括确保细胞的存活率和形态良好，以及设置包括生物学对照、空白对照、同型对照、补偿对照和FMO对照在内的多种对照类型。这些对照有助于减少假阳性或假阴性的结果。流式细胞术实验设计可以更加全面和系统，从而提高实验的成功率和结果的可靠性
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PCR引物设计，史上最全的关键点！
引物设计完成以后，应对其进行BLAST检测。如果与其它基因不具有互补性，就可以进行下一步的实验了。值得一提的是，各种模板的引物设计难度不一。有的模板本身条件比较困难，例如GC 含量偏高或偏低，导致找不到各种指标都十分合适的引物；用作克隆目的的PCR，因为产物序列相对固定，引物设计的选择自由度较低。在这种情况只能退而求其次，尽量去满足条件
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多参数流式细胞仪的光学滤光片组
光学滤光片组是荧光检测系统中最重要的组件之一，用于区分不同波长的荧光信号。自20世纪80年代中期以来，流式细胞术和图像细胞术的显著增长很大程度上源于高质量光学滤光片组的并行发展，以及用于标记日益增多的重要单克隆抗体和DNA探针的多色荧光标签，以及用于多参数分析的强大软件。
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科研干货 | 一文搞懂NK细胞研究指标怎么选
NK细胞（Natural Killer Cell，自然杀伤细胞）是机体重要的免疫细胞，具有无需抗原预先致敏就能破坏靶细胞和无MHC限制性的特点，在免疫应答的早期即可发挥作用。选择合适的NK细胞研究指标对于评估NK细胞的活性和功能具有重要意义。NK细胞研究指标的选择需要根据具体的实验目的和研究对象来确定。选择合适的指标有助于更准确地评估NK细胞的活性和功能
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轻松搞定磷酸化蛋白的WB检测
根据Markers比对压出的条带分子量是否正确。使用strip液将原先结合上的磷酸化抗体及二抗洗去，然后用同一张膜检测总蛋白水平，以确定磷酸化组分的相对比例是否有变化。如有必要，可采用其他方法进行验证，如质谱分析等。通过精心准备实验材料、优化实验步骤和注意实验条件控制等措施，可以轻松搞定磷酸化蛋白的WB检测
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荧光实验中的自发荧光困扰？这些技巧帮你搞定！
光实验中的自发荧光确实是一个令人头疼的问题，它可能来源于生物组织中的某些天然成分，这些成分在受到特定波长的光激发后会发出荧光，从而干扰目的荧光信号的检测。通过选择适当的荧光蛋白和标记方法、优化活体成像观察和组织切片观察的条件以及注意其他实验细节等措施，可以有效地减少或去除荧光实验中的自发荧光干扰
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几种常见的蛋白质的修饰
蛋白质的修饰是细胞生物学中一个重要的研究领域，涉及多种类型的化学修饰，这些修饰能够影响蛋白质的结构、功能和稳定性。蛋白质的修饰类型多种多样，每种修饰都在细胞生物学中发挥重要作用。这些修饰能够调节蛋白质的功能、活性和稳定性，从而参与多种细胞过程和疾病的发生发展
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Western Blot详解(原理、试剂、步骤及问题解答)
Western Blot，即蛋白质印迹法（免疫印迹试验），是一种通过特异性抗体对凝胶电泳处理过的细胞或生物组织样品进行着色，进而分析着色的位置与深度，从而获得特定蛋白质在所分析的细胞或组织中表达情况信息的实验技术。Western Blot是一种重要的蛋白质检测技术，在生物医学研究中具有广泛的应用价值。通过深入理解其原理
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细胞培养基础操作之细胞复苏
细胞复苏是细胞培养过程中的重要环节之一，其目的是使细胞从冷冻状态中迅速恢复生长活性，以保证细胞在实验室条件下能够正常生长和繁殖。细胞复苏的成功与否直接关系到后续实验的顺利进行和实验结果的准确性。因此，掌握细胞复苏的基本操作技术对于细胞培养实验人员来说至关重要。细胞复苏后出现污染：可能是由于实验
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溶酶体膜电位实验操作干货
溶酶体是细胞中的关键器官，负责分解细胞内外的生物大分子，包括废弃的细胞器、蛋白质以及入侵的病原体。溶酶体的功能不仅维持细胞内部环境的稳定，还参与调控细胞死亡和多种信号通路。溶酶体膜电位（lyosomal membrane potential, LMP）是维持溶酶体功能的关键电化学梯度，对溶酶体的酶活性和底物运输至关重要。在疾病状态下
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PCR引物设计的12条黄金法则
PCR（聚合酶链式反应）引物设计是分子生物学实验中的关键环节，其质量直接影响到PCR反应的特异性和效率。以下是PCR引物设计的12条黄金法则，这些法则基于广泛的实验经验和科学原理，旨在帮助研究人员设计出高效、特异的PCR引物。不同的实验条件可能会影响PCR反应的特异性和效率。因此，在设计引物时还需根据实验条件进行适当调整以确保PCR反应的成功进行
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自发荧光浅谈：组织样本的自发荧光来源与去除
组织样本的自发荧光来源复杂多样，但通过选择合适的固定液、固定前处理、使用自发荧光清除试剂、光漂白、选择合适的荧光基团以及其他方法，可以有效地降低自发荧光对实验结果的影响。组织切片长时间暴露于高强度UV辐射下，组织中的成分发生不可逆的光氧化作用，从而降低自发荧光。但该方法耗时太长，且大多数免疫组化实验室均缺乏光漂白方法所需的仪器设备
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多重细胞因子检测试剂盒（磁微粒发光法）
多重细胞因子检测试剂盒（磁微粒发光法）利用纳米级磁性粒子（磁珠）作为载体，通过特定的化学反应将细胞因子与磁珠偶联。在检测过程中，待测样本中的细胞因子与磁珠上的抗体发生特异性结合，形成免疫复合物。随后，通过加入化学发光试剂，使免疫复合物发出荧光信号。信号的强度与样本中细胞因子的含量成正比，从而实现对细胞因子的定量检测
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对线粒体健康至关重要的七大营养素
对线粒体健康至关重要的七大营养素，建议在日常饮食中适量增加这些营养素的摄入。虽然纤维不直接参与线粒体的能量代谢，但它对维持肠道健康具有重要作用，而肠道健康与线粒体功能密切相关。因此，富含纤维的食物（如全谷物、糙米、豆类和蔬菜）也应纳入日常饮食中。蛋白质是线粒体结构和功能的基础，对于线粒体的修复和更新至关重要
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实验干货 | 入门级细胞实验简介
细胞实验是生物医学研究中的基础工具，也是科学家探索生命现象、疾病机理及药物反应的重要手段。无论是癌症研究、免疫疗法还是药物筛选，细胞实验都在其中扮演着不可替代的角色。掌握基本的细胞实验技术，不仅能够帮助科研人员深入理解细胞的生物学行为，还能为后续的更复杂实验奠定坚实基础。细胞实验是生物医学研究中的核心技术之一。掌握如MTT/CCK-8检测
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BST不宜高压灭菌：防止吐温20起昙现象的有效方法
TBST（Tris-Buffered Saline with Tween 20）是一种常用的生物化学缓冲液，在Western blot等实验中用于洗涤膜上的非特异性结合物质。TBST中含有Tween 20，这是一种非离子型表面活性剂，具有增溶和乳化的作用。然而，Tween 20在高压灭菌过程中可能会出现起昙现象，这是由于Tween 20中的疏水基团与水分子之间的氢键缔合在高温下被破坏，导致相分离
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抗氧化剂：提高试剂的抗氧化能力
抗氧化剂，是指能够防止或减缓氧化过程的一类化合物。在生物医学研究中，抗氧化剂的应用尤为广泛，尤其是在研究涉及活性氧（ROS）和自由基的实验中，它们扮演着至关重要的角色。在很多实验体系中，氧化反应是不可避免的。无论是在细胞培养、蛋白质提取，还是药物开发中，氧化应激都会导致试剂降解、样品失活，进而影响实验结果的可靠性。氧化反应一旦发生
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提高试剂稳定性的方法
试剂稳定性是指试剂在特定条件下保持其化学结构、物理性质和功能的能力。在生物医学实验中，试剂的稳定性至关重要，因为它直接影响实验结果的可靠性和可重复性。如果试剂在实验过程中失效或降解，可能导致实验数据偏差、假阳性或假阴性结果，甚至让整个实验完全失效。试剂在使用前后的处理方式也直接影响其稳定性
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镍柱纯化实验原理及操作步骤
Ni-NTA是镍柱纯化常用的一种填料，镍柱纯化常指亲和层析，该方法利用组氨酸（His）残基上的咪唑基团与Ni2+之间能形成配位键的特性，实现对含有His-Tag（组氨酸标签）的目的蛋白的特异性吸附。His-Tag是重组蛋白纯化中最常见的标签之一，其通过融合表达与目的蛋白相连，从而赋予目的蛋白与镍柱结合的能力。在层析过程中
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LR White树脂常温半薄切片操作流程
树脂半薄切片是一种以树脂作为支撑载体，经过取材固定、清洗、脱水、渗透、包埋、切片染色获得的组织切片，与石蜡切片相比，其厚度更薄（300nm-1um之间）、分辨率更高、染色不用脱树脂等特点。LR White树脂是一种多羟基丙烯酸树脂，具有较高的亲水性，易于渗透和切片，对于染液的亲和性良好，广泛用于组织结构研究
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Dot blot法鉴定分泌型蛋白表达
Dot blot是一种半定量的蛋白质或核酸检测方法，其原理是将待测物直接滴于固相载体上，然后通过特异性抗体或探针与待测物结合，最终通过可视化方法来检测目标分子的存在与否。在整个操作过程中，手不能直接接触PVDF膜，以免蛋白污染或造成蛋白降解。脱脂奶粉封闭一定要充分，否则容易造成膜与蛋白的非特异性结合，膜上会出现杂点或假阳性，干扰试验结果
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组织免疫荧光实验的无气泡秘籍
组织免疫荧光（Immunofluorescence, IF）是生物医学研究中常用的技术，旨在通过荧光标记检测组织或细胞中的特定蛋白表达。该实验依赖于荧光标记的抗体与目标抗原的特异性结合，随后通过荧光显微镜观察染色结果。封片是免疫荧光实验中的一个关键步骤，因为它直接影响荧光信号的保留与显微镜下图像的清晰度
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马松染色的实验步骤和注意事项
马松（Masson）染色是一种用于可视化组织中纤维和炎性因子的染色方法。该技术充分利用了不同组织成分对阴离子染料渗透性的差异。此法多用于观察病变组织中纤维结缔组织的增生和分布，纤维性肿瘤与肌源性肿瘤的鉴别，在肌肉疾病和心血管疾病的诊断中具有重要意义。Masson染色，又称为马松染色，是结缔组织染色领域中经典且权威的一种技术方法
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手把手教学｜彗星电泳实验的操作步骤及经验分享
彗星电泳实验，又称为单细胞凝胶电泳试验（Single Cell Gel Electrophoresis，SCGE），是一种用于检测DNA损伤的实验技术，可在单个细胞水平上进行。这种方法能够有效评估DNA损伤的程度，包括由受试物直接引起的DNA链断裂、碱性不稳定性位点导致的DNA链断裂，以及DNA切割修复过程中引起的瞬时DNA链断裂，是一种常用的DNA损伤评估方法
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小鼠皮肤组织蛋白提取
小鼠皮肤组织与人类皮肤类似，分为表皮、真皮和皮下组织三层。表皮主要由角质形成细胞构成，起保护作用；真皮含有血管、神经、毛囊和腺体，提供营养支持和感觉功能；皮下组织主要由脂肪细胞组成，起缓冲和保温作用。小鼠皮肤组织常用于研究皮肤病、生物学过程和药物测试，因其结构和功能与人类皮肤有许多相似之处
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脂糖凝胶的纯化与回收技巧
凝胶回收是一种用于PCR产物纯化的方法，通过使用溶胶液将琼脂糖凝胶完全溶化。同时结合了一种创新型的离子交换柱，在特定条件下，DNA能够在离心过程中迅速结合到纯化柱上，然后在适当的条件下将DNA充分洗脱出来，实现了对DNA的快速纯化过程。这种方法可以高效地提取纯净的DNA样本，为后续实验提供了可靠的基础
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细胞污染（污染分类+尝试拯救方法）
细胞污染：细胞培养正常情况下建议每日低倍镜高倍镜下观察，便于及早发现及早处理污染 细胞确定是否污染？一、细菌污染：培养基短时间内变黄，变浑浊，培养基表面出现漂浮物；细胞生长停滞，逐渐脱落死亡；显微镜下可见高速颤动，作布朗运动的细小颗粒。二、霉菌污染：培养基一般不浑浊，肉眼可见菌落；显微镜下可见菌丝分布于细胞间
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qPCR干粉引物溶解稀释和保存！
1.打开引物前记得先离心：做qPCR实验时，在打开引物前，请务必记得先进行离心操作！推荐使用3000-4000rpm的离心速度，离心时间为30-60秒。这样可以避免引物干粉在开盖时飘散。2.引物一般配制成10-100μM：引物通常需要配制成10-100μM的浓度。许多公司在引物标签上明确标明了需要加入的溶液量，以便直接达到100μM的浓度
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4种石蜡切片解决方法
在处理蜡块时务必确保采用一致的处理方式，以确保切片的厚度基本一致。任何不一致可能会影响后续染色深度。切片时，应该以较慢和均匀的速度摇转柄。尽管有时快速猛转可能有作用，但不应将其作为常规操作手法。石蜡具有不同的熔点和温度范围，因此其特性也各不相同。在特定温度下，一种蜡块可能合适，而另一种则可能不适用
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一篇搞懂细胞复苏、换液、传代、冻存步骤
在实验室操作中，首先从液氮罐中取出存储在其中的冻存细胞。接着，将这些冻存细胞置于37°C的水浴锅中进行解冻处理。随后，将1ml培养基吸取至冻存管中，并均匀地将其吹入细胞悬液中。将处理后的细胞转移至一个15ml的离心管中，再向离心管中加入3ml培养基。进行离心过程（1000rpm/5min），并准备好细胞培养瓶，务必标注好日期、时间、姓名以及细胞的名称
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科研干货|到底要多少细胞才够跑qPCR！
胞培养是生物医学领域中一项基础而重要的技术，涉及不同类型的培养容器。每种容器都具有其独特的用途和特点，因此选择合适的培养容器对于细胞培养的成功至关重要。6cm培养皿:一一般添加3-4ml培养基，可容纳约3.2 x 10^6个细胞。这种培养皿通常用于贴壁细胞的培养，成本低廉，但需要小心添加培养基以避免溢出造成污染
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血管生成-成管实验TubeFormation
当进行显微镜观察时，为了获得更好的对焦效果和形成完整的管道结构，我们需要确保载玻片表面是平整的。在进行载玻片预冷的步骤时（注意在冰盒上进行操作），以ibidi公司的μ slide血管生成载玻片为例：首先在孔内加入10μL基质胶，并避免产生气泡，观察载玻片表面是否存在凹凸或透镜效应。接着将处理好的载玻片放入湿盒中
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Protocol｜seahorse海马实验流程
细胞板：我们将在96孔板中使用40%的孔，将中间四个角不加入，作为空白对照组。首先，我们将从六孔板中消化细胞，并进行离心以去除上清液。然后，我们将向每个孔中加入2ml的培养基，并悬浮40ul的细胞与60ul的培养基（四个角除外）。最后，将细胞板放置在培养箱中过夜，贴壁生长即可。探针板：首先在每个孔中加入200ul去离子水
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组织免疫荧光，免疫组化，和HE染色
苏木素和伊红是常用的细胞染色荧光剂，用于显微镜下观察细胞结构。为了获得清晰的染色效果，我们可以进行一些微调和优化。一方面，可以增加苏木素染色时间，以加深细胞核的蓝色；另一方面，延长伊红的染色时间，以增强细胞质的红色。此外，可以缩短洗涤过程中的时间，以避免颜色的混合。同时，在酒精透明化的步骤中，也可以适当缩短乙醇浸泡的时间
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超简单磁珠法DNA提取方法
DNA提取是生物医学领域不可或缺的重要实验步骤之一。磁珠法提取DNA试剂盒采用独特的磁珠和缓冲液系统，这些磁珠具有特殊的包被，在特定条件下对目标核酸具有显著的亲和力。当条件发生变化时，磁珠会释放吸附的核酸，实现快速分离和纯化高质量核酸的目的。这种高效的磁珠法技术使得从样品中提取纯净DNA变得更加简便和可靠
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质粒小提实验步骤与注意事项
吸附柱中注入500ul的平衡液BL，以12,000rpm离心1分钟，然后废弃上清液。洗脱DNA 将吸附柱放置在干净的离心管中，向吸附膜的中间部位悬空滴加100-300ul洗脱缓冲液TB，室温静置2分钟，以12,000rpm离心1分钟，将质粒溶液收集至离心管中。为了提高质粒的回收率，可以将所得溶液重新加入离心吸附柱中，重复离心
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原代心肌细胞提取全步骤+实用Tips
原代心肌细胞提取是心血管研究中的一项基础技术，它能够为研究心肌细胞的生物学功能提供重要的模型。相比永生化细胞株，原代心肌细胞更能保留天然心肌细胞的生理特性，如其独特的收缩功能和电生理特性，这使得它在研究心脏疾病（如心律失常、心力衰竭等）和药物筛选方面具有重要意义。与永生化细胞株不同，原代心肌细胞不能无限增殖
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WB实验延迟跑胶的正确姿势：如何保证蛋白稳定性
Western Blot（WB）实验是一种常用的技术，用于检测和定量分析样品中的特定蛋白质。实验流程通常包括蛋白提取、电泳、转膜和检测。其中，蛋白提取是整个实验的基础，决定了最终结果的准确性和可重复性。蛋白质的完整性、活性和浓度都会对后续步骤产生深远影响。蛋白提取后，理想情况下应该立即进行电泳，以防止蛋白质降解或失活
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pvdf膜可以用无水乙醇激活吗
PVDF膜可以使用无水乙醇进行激活，以增加其亲水性和清洁膜表面。然而，由于效果可能不如其他激活剂显著以及存在安全性问题，因此在选择激活剂时需要根据具体应用场景和条件进行综合考虑。在实验中，可以根据实验要求和实验条件选择合适的激活剂，并进行适当的优化和调整，以获得最佳的激活效果。需要注意的是，以上分析仅供参考
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石蜡切片HE染色实验
苏木精-伊红染色法 ( Hematoxylin-Eosin staining )，简称HE染色法 ，切片技术里常用的染色法之一 。苏木精染液为碱性 ，主要使细胞核内的染色质与胞质内的核糖体着紫蓝色；伊红为酸性染料，主要使细胞质和细胞外基质中的成分着红色。取新鲜的组织样品，加入4 %多聚甲醛组织固定液的EP管中。取样材料应该小而薄，约黄豆粒大小
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免疫组化染色实验步骤
保持形态：终止和抑制外源性和内源性酶活性，防止 组织细胞的死后变化，防止自溶和腐败，保持组织细胞的固有形态。保存抗原：使细胞内的蛋白质、脂肪、糖和酶等各种抗原成份转变成不溶性物质，以保持它原有的结构和定位与生活时相仿。硬化作用：固定剂兼有硬化作用、使组织硬化、增加组织硬度、便于制片。便于观察：使组织中的各种物质
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CO-IP实验操作及注意事项
全程操作中戴手套，避免用手直接接触样品或试剂。确保使用高质量的抗体和试剂，以减少非特异性结合。选择适当的洗涤缓冲液和洗脱缓冲液，以维持蛋白的天然状态。在进行SDS-PAGE和WB检测时，注意样品的上样量和检测条件，以获得清晰的条带和最佳的信号。通过遵循上述操作步骤和注意事项，可以确
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Lipofectamine ™ RNAiMAX转染
Lipofectamine™ RNAiMAX转染是一种常用的实验技术，主要用于将siRNA和miRNA递送至细胞中以进行基因沉默实验。Lipofectamine™ RNAiMAX转染试剂以其高效、低毒、广泛兼容性和简单快速的特点，在基因沉默实验中发挥着重要作用。通过遵循正确的操作步骤和注意事项，可以确保实验的顺利进行并获得可靠的结果
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要不要加双抗？血清必须灭活才能用？细胞因子又是什么？
清中含有生长因子可促进细胞繁殖，含有附着因子可促进细胞贴壁，同时还有一种特殊的活性能抵抗胰蛋白酶的消化作用。血清内含有丰富的矿物质、酯类和激素。最常见的血清包括：小牛血清、胎牛血清、成年马血清等。其中胎牛血清对培养要求高的细胞系效果最好。血清来源于动物， 因此必定存在批次间的差异，且生产过程中由于工艺流程的不同
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手把手教学｜克隆形成实验的原理及实验步骤
克隆形成实验是研究细胞存活率并探讨单个细胞增殖潜能的有效方法之一。即在体外培养环境下，通过使单个细胞经过连续分裂繁殖至少6代，形成的细胞集群被称为克隆或集落。每个克隆的尺寸通常在0.3-1.0mm之间，含有50个以上的细胞。通过计算克隆形成率，能够对单个细胞的增殖潜力进行量化分析。本实验的成功关键在于细胞悬液的制备和适度的接种密度
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手把手教学｜质粒转化操作步骤及经验分享
转化是指将质粒DNA导入细菌的过程，通过热激、冰浴、摇菌、挑菌等过程达到质粒克隆、质粒鉴定等目的。质粒转化前需准备的试剂包括：感受态细胞、质粒、无抗生素的LB液体培养基、氨苄抗性LB固体培养基平板。耗材及实验设备包括：摇菌管、Ep管、超净台、涂菌棒、酒精灯、水浴锅等。提前将感受态细胞放置在冰盒上解冻
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免纯化微量热泳动 (MST) 和细胞热迁移 (CETSA) 在分子互作中的应用
免纯化微量热泳动（Microscale Thermophoresis, MST）和细胞热迁移（Cell Thermal Shift Assay, CETSA）是两种在分子互作研究中广泛应用的生物物理技术，它们各自具有独特的优势和应用场景。免纯化微量热泳动（MST）和细胞热迁移（CETSA）在分子互作研究中具有广泛的应用前景和重要的实用价值
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分析型超速离心（AUC）实验服务
分析型超速离心（AUC）实验服务是一种高级的生物物理分析技术，广泛应用于生物大分子如蛋白质、核酸等的性质表征及相互作用研究中。AUC 技术在生物制药、生物技术、材料科学等领域具有广泛应用，可用于蛋白质、核酸、病毒、纳米颗粒等大分子的性质表征及相互作用研究。例如，在生物制药领域，AUC 可用于蛋白质药物的质量控制
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免疫沉淀和MSE之间的区别是什么
免疫沉淀是一种利用抗体特异性反应纯化富集目的蛋白的方法。它基于抗原抗体特异性结合的原理，通过抗体与细胞裂解液或表达上清中相应的蛋白结合，再与蛋白A/G或二抗偶联的珠子孵育，最终通过离心得到珠子-蛋白A/G或二抗-抗体-目的蛋白复合物。这种方法广泛应用于生物学、生物化学和医学研究中，用于分离、检测和纯化特定蛋白质
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在活细胞内研究化合物与靶蛋白相互作用
在活细胞内研究化合物与靶蛋白相互作用，是一个复杂但关键的过程，它对于理解药物的作用机制、优化药物设计以及评估药物效果至关重要。在活细胞内研究化合物与靶蛋白相互作用是一个综合性的过程，需要根据具体的研究目的和样品特点选择合适的方法。上述介绍的NanoBRET™ Target Engagement Assays、SPR和FRET等方法
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十种常用线粒体功能检测方法
线粒体是细胞内重要的细胞器，以其独特的双膜结构而著称，常被称为细胞的“动力引擎”。它们不仅在能量代谢中发挥关键作用，还参与多种生理过程，维持细胞的正常功能和代谢平衡。线粒体自噬是一种选择性清除受损或多余线粒体的过程，对维持线粒体的质量和数量起着重要作用。可以通过观察线粒体自噬相关蛋白的表达或使用荧光标记的自噬体来检测线粒体自噬现象
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六种重组蛋白表达系统
重组蛋白表达系统是指利用基因工程技术将外源基因导入到合适的宿主细胞中，并通过宿主细胞的转录和翻译机制生产出具有特定生物学活性的蛋白质的系统。大肠杆菌（E. coli）：最常用的原核表达宿主，具有遗传背景清楚、生产时间短、易于放大生产等优点。大肠杆菌表达系统基于T7 RNA聚合酶及其强启动子之间的特异性和转录的高效性，如pET系统
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流式应用之细胞多因子检测（CBA）的原理及步骤
CBA技术利用包被有特异性捕获抗体的微球，这些微球具有不同的荧光强度，可以区分并同时检测多种细胞因子。当待测样品中含有相应的细胞因子时，微球上的捕获抗体会与细胞因子结合，随后加入荧光标记的检测抗体，形成“三明治夹心”复合物。通过流式细胞仪检测复合物的荧光强度，可以定量分析样品中的细胞因子含量。CBA的基本原理近似于ELISA的检测方法
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CBA检测技术可以检测哪些细胞因子
CBA（Cytometric Bead Array）检测技术是一种基于流式细胞术的多重蛋白定量检测方法，它能够同时检测样品中的多种细胞因子。CBA技术利用包被有特异性捕获抗体的微球，这些微球具有不同的荧光强度，可以区分并同时检测多种细胞因子。CBA检测技术的优势在于其能够同时检测多种细胞因子，提高了检测效率并减少了样本消耗
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流式细胞样品染色方法的类型
流式细胞样品染色方法主要分为几种不同的类型，每种类型都有其特定的应用场景和操作步骤。流式细胞样品染色方法多样，根据实验目的和检测对象的不同选择合适的染色方法至关重要。同时，在实验过程中应注意操作规范，确保结果的准确性和可靠性。除了上述常见的染色方法外，还有一些特殊的染色方法，如碘化丙啶（PI）染色法，用于检测细胞周期中的DNA含量
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表面抗体染色和胞内抗体染色有什么区别
表面抗体染色和胞内抗体染色在流式细胞分析中都是重要的染色方法，但它们之间存在显著的区别。表面抗体染色和胞内抗体染色在流式细胞分析中各有其独特的应用场景和操作步骤。选择哪种染色方法取决于实验的具体需求和目的。表面抗体染色：主要用于检测细胞膜表面的抗原或受体。这些抗原或受体通常位于细胞的外层，直接与外部环境接触
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流式细胞分选实验没有分选到细胞的原因解析
流式细胞分选实验没有分选到细胞的原因可能涉及多个方面，流式细胞分选实验没有分选到细胞的原因可能涉及样本准备、仪器连接与设置、仪器性能与稳定性、分选条件与参数设置、抗体与荧光染料以及实验环境等多个方面。在实验中应仔细排查这些可能的原因，并采取相应的措施进行解决。如未往试管中加样本、错加试剂等低级错误也可能导致分选失败
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多重PCR探针荧光基团选择的4项基本原则
多重PCR（多重荧光定量PCR）探针荧光基团的选择涉及多个方面，以确保实验的准确性和可靠性。多重PCR探针荧光基团的选择需要综合考虑荧光基团之间的干扰、仪器的适配性、荧光强度以及淬灭基团的搭配等因素。通过合理选择荧光基团和淬灭基团，可以确保多重PCR实验的准确性和可靠性。选择合适的淬灭基团以匹配荧光基团
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提高PCR扩增效率的7个秘诀
在PCR（聚合酶链式反应）过程中，提高扩增效率是确保实验成功和结果准确性的关键。选择高效的热稳定DNA聚合酶和相应的PCR缓冲液，以提高PCR的扩增效率和特异性。对于复杂模板或长片段扩增，可以选择具有相应扩增能力的DNA聚合酶。使用导热性能更好的PCR管材质，如硅基、玻璃等新材料，以提高热传导速度。改变PCR管形状以增加受热面积
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WB条带中间泛白是什么原因造成的？又该如何解决？
WB条带中间泛白可能由多种原因造成，这些原因主要涉及实验过程中的操作细节和试剂的使用。解决WB条带中间泛白问题需要综合考虑实验过程中的多个环节和因素，并根据具体情况采取相应的解决方案。如果二抗过多导致反白问题，可以尝试使用ECL化学发光试剂进行再次显影。将底物A和B各1ml加入小皿中，将条带浸泡在发光底物中
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抗体稀释液和免疫荧光液有什么区别
抗体稀释液和免疫荧光液在生物化学和分子生物学实验中扮演着不同的角色，它们之间存在明显的区别。抗体稀释液和免疫荧光液在成分、功能和应用场景上存在显著差异。抗体稀释液主要用于稀释抗体以适应实验需求；而免疫荧光液则是一系列用于免疫荧光染色实验的试剂的总称，其中包括一抗稀释液、二抗（荧光标记）等关键成分。两者在生物化学和分子生物学实验中各自发挥着重要的作用。
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WB避坑指南&试用装申请活动
Western Blot（WB）作为一种常规用于研究蛋白质分离和鉴定的技术，虽然看似简单，但实际操作中却有许多需要注意的细节。使用物理或化学方法破碎组织或细胞，加入适量裂解液及酶抑制剂。裂解液的用量需根据样本量适当调整，如30mg的组织可加入500μl的RIPA裂解液（含酶抑制剂），一个6孔板的细胞可加60μL裂解液（含酶抑制剂）
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一抗回收后可以用多少次？回收的一抗应该放4℃还是-20℃？
一抗回收后可以用多少次以及回收的一抗应该放在多少度保存，这两个问题的答案并不是绝对的，它们受到多种因素的影响，包括抗体的种类、质量、保存条件以及实验的具体需求等。一抗回收后的使用次数和保存温度需要根据具体情况进行判断和选择。在实验过程中，应该根据抗体的种类、质量、实验需求以及保存条件等因素来制定合理的使用计划和保存方案
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抗体稀释液中是否需要加入其他成分呢
抗体稀释液中是否需要加入其他成分，这主要取决于具体的实验需求、抗体的性质以及稀释液的设计目的。需要注意的是，不同生产厂家生产的抗体稀释液配方可能有所不同，因此在使用时应仔细阅读产品说明书，并按照说明书的要求进行操作。此外，在自行配制抗体稀释液时，也应注意各成分的配比和加入顺序，以确保稀释液的质量和稳定性
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Western Blotting实验中一张膜要孵育多个抗体
在Western Blotting（WB）实验中，一张膜要孵育多个抗体时，需要考虑多种因素，包括抗体的来源、特异性、目标蛋白的分子量差异等。确保所有操作都在无菌、无酶污染的环境中进行。使用高质量的抗体和试剂以获得最佳结果。严格遵守实验室的安全规定和操作规程。总之，在Western Blotting实验中一张膜要孵育多个抗体时，应根据实验的具体需求和条件选择最合适的方法和步骤
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17KD小分子蛋白一次出结果经验分享
在进行17KD小分子蛋白的Western Blot（WB）实验时，由于小分子蛋白的特殊性，实验过程中需要特别注意一些细节以确保结果的质量。1.温度控制：电泳和转膜过程中注意控制温度，避免高温导致分子运动加快，加剧弥散现象。2.抗体选择：确保一抗和二抗的特异性，避免非特异性结合导致的背景信号过高。3.实验记录：详细记录实验过程中的每一步操作，以便在出现问题时进行回顾和分析
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分子诊断之七大主流等温扩增技术原理及应用
子诊断中的七大主流等温扩增技术各自具有独特的原理和应用，这些技术以其简单、快速、高效等优点，在疾病诊断、基因筛查、DNA测序等领域得到了广泛应用。七大主流等温扩增技术各有其独特的原理和应用场景，在分子诊断领域发挥着重要作用。这些技术的不断发展和完善将为生命科学研究和临床应用提供更加高效、便捷的解决方案。
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跑WB为什么一块胶上两次重复会出现两种完全相反的趋势?
在Western Blot（WB）实验中，如果同一块胶上两次重复的结果出现两种完全相反的趋势，这可能是由于多种因素导致的。如果同一块胶上两次重复的结果出现完全相反的趋势，建议重新进行实验以验证结果的可靠性。同时，也可以考虑增加实验的重复次数或采用其他方法进行验证和比较。在样品制备过程中可能存在不一致性
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抗体偶联APC-Cy7流程
抗体偶联APC-Cy7的流程通常涉及多个步骤，这些步骤需要精确操作和适当的实验条件以确保偶联的成功和效率。激活的APC-Cy7应在黑暗中冷藏，避免光线照射。封闭试剂和修饰试剂应新鲜配制，并立即使用，避免长时间存放。标记的抗体应具有高特异性和不低于90%的纯度。通过以上步骤，可以成功地将APC-Cy7偶联到抗体上
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流式检测标签类型和特点
如绿色荧光蛋白（GFP）、青色荧光蛋白（CFP）、黄色荧光蛋白（YFP）、红色荧光蛋白（DsRed）、mCherry、mBanana等，作为基因表达的报告系统，广泛应用于流式细胞术。丰富的标签试剂使得流式细胞术能够进行高维度、高灵敏度的细胞分析，为细胞生物学研究提供了强有力的工具。用于质谱细胞术的抗体与镧系元素系列的单一同位素重金属离子偶联
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WB检测自噬底物蛋白P62相关经验总结
WB（Western Blot，蛋白质印迹法）是一种常用的生物化学技术，用于检测样品中特定蛋白质的存在、含量及其变化。在自噬研究中，WB检测自噬底物蛋白P62（也称为SQSTM1）是一种重要的方法，用于评估自噬的活性。P62蛋白是自噬过程中的一个重要受体，它通过与LC3（微管相关蛋白轻链3）结合，将泛素化蛋白和受损细胞器靶向自噬体进行降解
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WB的定量结果必须要归一化处理吗？
在Western Blot（WB）实验中，定量结果的归一化处理是非常必要的。归一化是实验数据处理的关键步骤，它有助于消除样本间或实验中的偏差，确保实验结果的可靠性和可比性。WB实验的定量结果必须要进行归一化处理。通过选择合适的归一化方法，可以消除实验中的偏差，提高实验结果的可比性和说服力。在实际操
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WB之SDS作用解析
在Western Blot（WB）实验中，定量结果的归一化处理是非常必要的。归一化是实验数据处理的关键步骤，它有助于消除样本间或实验中的偏差，确保实验结果的可靠性和可比性。WB实验的定量结果必须要进行归一化处理。通过选择合适的归一化方法，可以消除实验中的偏差，提高实验结果的可比性和说服力。在实际操
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DNA凝胶回收常见问题
DNA凝胶回收是分子生物学实验中常见的步骤，用于从琼脂糖凝胶中分离和纯化特定的DNA片段。然而，在进行DNA凝胶回收时，可能会遇到一些常见问题，这些问题会影响回收的效率和结果。DNA凝胶回收过程中遇到的问题多种多样，但大多数问题都可以通过仔细操作、遵循实验步骤和注意事项来解决。在进行DNA凝胶回收
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甘油菌种复苏保存步骤技巧与注意事项
甘油菌种复苏保存的步骤、技巧与注意事项涉及多个方面，选择对数生长期的菌种，此时菌种生长旺盛，代谢活跃，有利于后续的保存效果。将菌种接种于LB液体培养基或其他适宜的液体培养基中，培养至体系内浑浊可见。准备50%浓度的甘油溶液，可通过等体积的蒸馏水和甘油混合得到。由于纯甘油十分粘稠，难以定量
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全蛋白的提取方法和注意事项
全蛋白的提取方法和注意事项是实验过程中的关键环节，它们直接影响到后续实验结果的准确性和可靠性。在进行全蛋白提取时，需要注意以下几点以确保实验结果的准确性和可靠性：1.低温操作：整个提取过程应尽量在低温下进行（如4℃），以防止蛋白的降解和变性。2.蛋白酶抑制剂：在裂解液中加入适量的蛋白酶抑
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WB实验里，蛋白可以提完后面再跑吗
在WB（Western Blotting，蛋白质印迹）实验中，蛋白的提取与后续的电泳、转膜、显色等步骤是相对独立的，因此蛋白在提取后是可以暂时保存，并在后续时间点再进行电泳等后续实验的。WB实验中蛋白可以提完后面再跑，但需要注意保存条件和保存时间，以确保蛋白的稳定性和活性。同时，在后续实验中应控制各步
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是先调pH后定容，还是先定容后调pH
在实验室操作中，关于溶液的pH调整和定容的顺序，一般遵循“先调pH后定容”的原则。在进行溶液配制时，应先根据实验需求计算出所需的溶质和溶剂的量，然后将溶质溶解在适量的溶剂中。接着，使用酸碱调节剂（如盐酸、氢氧化钠等）逐步调整溶液的pH至所需值。最后，将溶液定容至所需体积。这样可以确保溶液的
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WB 提前配胶 VS 现配现用
在Western Blot（WB）实验中，凝胶的制备是一个至关重要的步骤，它直接影响到实验结果的准确性和条带的清晰度。关于凝胶的制备方式，实验室中常见的有两种：提前配胶和现配现用。这两种方法各有其优缺点，选择哪种方式往往取决于实验的具体需求和实验人员的偏好。同时，无论选择哪种方法，都应注意凝
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808 nm无重原子光敏剂
808 nm无重原子光敏剂是一类在生物医学、材料科学等领域具有广泛应用前景的化合物。它们的主要特点是不含有重金属元素（如铂、铱、钌等），因此具有较低的毒性和更好的生物相容性。随着对无重原子光敏剂研究的不断深入，科学家们不断开发出新型的无重原子光敏剂，并探索其在各个领域的应用。随着技术的
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检测抗原反应性T细胞，你用对指标设对门控了么？
在检测抗原反应性T细胞时，选择合适的指标和设置正确的门控是至关重要的，以确保实验结果的准确性和可靠性。1.选择合适的刺激物：根据实验目的选择合适的抗原或刺激物来激活T细胞。对于特异性抗原反应性T细胞的检测，应使用能够特异性识别并结合抗原的刺激物。2.优化实验条件：在实验过程中应注意优化
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DTA在分子生物学中的应用
EDTA（乙二胺四乙酸）是一种有机化合物，常温常压下为白色粉末，能溶于氢氧化钠、碳酸钠及氨溶液中，微溶于冷水，不溶于醇及一般有机溶剂。EDTA分子中含有两个氨基（-NH2）和四个羧基（-COOH）。这两个氨基提供了两个氮原子作为配位原子，而四个羧基则提供了四个氧原子作为配位原子，共计六个配位原子
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海藻糖在分子生物学中的用途
海藻糖，又称为α,α-海藻糖或α-D-吡喃葡萄糖基-α-D-吡喃葡萄糖苷，是由两个葡萄糖分子通过糖苷键连接而成的非还原性双糖。这种双糖分子因其独特的物理化学性质和生物活性，在分子生物学领域引起了广泛关注。本文将深入探讨海藻糖在生物制品稳定、基因工程、细胞保护以及实验技术优化等方面的应用
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细胞培养小室PC膜和PET膜该怎么选
PC膜材质的细胞共培养小室和PET膜材质的细胞小室是常见的用于细胞培养的 耗材，它们在材质特点、透气性、透光性、实验应用以及其他特性等方面存在一些区别。PC膜材质的细胞共培养小室和PET膜材质的细胞小室在材质特点、透气性、透光性、实验应用以及其他特性等方面存在差异。在选择时，应考虑实验的具体
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菌种保藏的常见方法汇总
菌种保藏是微生物学中的一项重要技术，旨在通过创造特定的环境条件来延长菌种的存活时间并保持其遗传稳定性。菌种保藏的方法多种多样，各有优缺点。在选择保藏方法时，应根据微生物的种类、保藏时间的长短以及实验室的具体条件来综合考虑。
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RT-qPCR检测的一步法与两步法及其优缺点
RT-qPCR（Quantitative Reverse Transcription PCR，即定量逆转录PCR）是一种常用于基因表达分析、RNA干扰验证、病原体检测等分子生物学应用的实验方法。在RT-qPCR中，RNA首先通过逆转录酶转录成cDNA，随后以cDNA为模板进行qPCR反应。RT-qPCR可以通过一步法或两步法来完成，一步法RT-qPCR和两步
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M1型和M2型极化的巨噬细胞有什么不同
M1型和M2型极化的巨噬细胞在多个方面存在显著差异，这些差异主要体现在功能、细胞因子分泌、表面标志物、代谢途径以及它们在疾病中的作用等方面。M1型和M2型极化的巨噬细胞在功能、细胞因子分泌、表面标志物、代谢途径以及疾病中的作用等方面存在显著差异。这些差异使得巨噬细胞能够根据不同的生理和病
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哪些因素可以诱导巨噬细胞向M2型极化呢
还有一些其他因素也可能影响巨噬细胞向M2型极化，如共培养系统（将巨噬细胞与其他细胞类型如T细胞、树突状细胞等进行共培养）和脂多糖（LPS）处理（虽然LPS通常用于诱导M1型极化，但在某些条件下也可能促进M2型极化）。然而，这些因素的具体作用机制和效果可能因实验条件和细胞类型的不同而有所差异
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哪些因素可以诱导巨噬细胞向M1型极化呢
核因子κB（NF-κB）、信号转导子和转录激活子（STAT）等转录因子的激活在巨噬细胞向M1型极化过程中发挥重要作用。这些转录因子能够调控相关基因的表达，促进巨噬细胞向M1型极化。诱导巨噬细胞向M1型极化的因素主要包括细胞因子（如IFN-γ、TNF-α、LPS等）、微生物及其产物以及环境刺激等。这些因素通过
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体外诱导巨噬细胞极化的方法都有哪些？
体外诱导巨噬细胞极化的方法多种多样，主要依赖于不同的细胞来源和诱导因子。需要注意的是，不同的细胞来源和诱导因子可能会对巨噬细胞极化的效果和特性产生影响。因此，在进行体外诱导巨噬细胞极化实验时，应根据具体实验目的和条件选择合适的细胞来源和诱导因子。同时，还需要注意实验操作的规范性和
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蛋白定量的3种常用方法
蛋白定量，即蛋白质定量，是生物学实验中不可或缺的一部分，用于确定蛋白质的含量。在酸性溶液中，考马斯亮蓝G250染料与蛋白质中的碱性氨基酸（如精氨酸）和芳香族氨基酸残基相结合，导致染料的最大吸收峰位置从488nm变为595nm，颜色从棕红色变为蓝色。结合到蛋白质分子上的染料数与蛋白质所带正电荷成
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高碘酸和过碘酸有啥区别？
高碘酸：具有很强的氧化性，能将多种有机化合物氧化，例如可以将邻二醇氧化成醛或酮等。在氧化过程中，高碘酸自身被还原为碘酸或其他含碘化合物。过碘酸：同样具有强氧化性，但在某些反应中的氧化能力和选择性可能与高碘酸略有不同。例如，在对特定有机化合物的氧化反应中，过碘酸可能表现出不同的反应速率
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盘点几种常见的细胞核染料，你了解多少？
在生物学和医学研究中，细胞核染料是常用的实验工具，它们能够特异性地染色细胞核，帮助研究者观察和分析细胞的形态、结构和功能。类型：Hoechst染料是一类非嵌入式荧光染料，可以穿透活细胞的细胞膜，与DNA结合后发出蓝色荧光。常见种类：主要包括Hoechst 33258和Hoechst 33342。两者在功能上相似，但
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分子克隆和细胞转染之间的区别是什么
分子克隆和细胞转染是生物学研究中的两个重要过程，它们之间存在明显的区别，主要体现在目的、操作对象、步骤以及应用等方面。分子克隆：其主要目的是将特定的DNA片段（如目的基因）与载体DNA（如质粒、病毒等）通过体外重组技术连接，形成重组DNA分子。这个过程旨在获得大量、稳定且可遗传的DNA拷贝
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细胞表型检测实验有哪些
细胞表型检测实验是生物学研究中非常重要的一部分，旨在通过观察和分析细胞的形态、生长、代谢、分子表达等方面的特征，来了解细胞在生理、病理或药物作用下的变化。这些实验方法各有特点和应用场景，研究者可以根据具体的研究目的和实验条件选择合适的实验方法进行检测和分析。同时，在进行细胞表型检测实
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蛋白质在细胞中的主要功能
蛋白质在细胞中的主要功能非常多样且关键，它们共同维持着细胞的正常生命活动。1. 结构组成：蛋白质是细胞膜和细胞间质的主要成分之一，参与细胞的结构构成。2. 催化作用：蛋白质可以构成人体必须催化和调节功能的各种酶。3. 免疫功能：参与机体的免疫系统，如补体、干扰素、抗体、免疫球蛋白等
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如何优化细胞悬液的均匀性？
在实际应用中，建议根据具体实验需求和样本特性，选择合适的优化策略，并进行必要的验证和优化，以确保获得均匀的细胞悬液。优化细胞悬液的均匀性是细胞生物学实验中的一个重要环节。1. 优化细胞消化和分散： ▲ 使用适当的酶（如胰蛋白酶、胶原酶等）消化细胞，确保细胞充分分散。▲ 控制消化时间和条件
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PCNA在DNA损伤修复中的角色
PCNA（增殖细胞核抗原，Proliferating Cell Nuclear Antigen）在DNA损伤修复中扮演着至关重要的角色。研究表明，PCNA的异常表达或功能缺陷与多种疾病的发生发展密切相关。例如，PCNA的泛素化修饰在跨损伤DNA合成通路中的调控作用被发现与乳腺癌的发生发展有关。此外，PCNA还参与了其他多种疾病相
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八种细胞器结构和功能
八种主要细胞器的结构和功能概述如下：1、线粒体-结构：线粒体具有双层膜结构，外膜平滑连续，内膜向内折叠形成嵴，大大增加了内膜的表面积。线粒体内部含有基质和DNA、RNA等遗传物质。功能：线粒体是细胞进行有氧呼吸的主要场所，被誉为细胞的“动力车间”。它通过氧化磷酸化过程合成ATP，为细胞提供大
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PCR实验室紫外灯，真的可以消毒吗？
紫外线根据生物效应的不同，可以分为多个波段，其中UV-C波段（200-275nm）的紫外线具有强大的消毒功能。UV-C波段中的250-270nm波段紫外线尤为强效，它能够破坏微生物细胞的DNA（脱氧核糖核酸）和RNA（核糖核酸）的分子结构，造成生长性细胞和（或）再生性细胞死亡，从而实现对细菌、病毒等病原体的有
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解析IVD领域七大创新技术
分子诊断技术利用分子生物学的方法，如核酸扩增、基因测序、基因芯片等，对人体的基因、RNA、蛋白质等分子进行检测，以诊断疾病或评估健康状况。其中，核酸扩增技术（如PCR）可以快速、灵敏、特异地检测出微量的核酸分子；基因测序技术（如NGS）则能确定DNA或RNA分子中碱基的排列顺序，为生物的结构、
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免疫组化样本固定与制片的实用指南
免疫组化样本固定与制片的实用指南主要涉及样本的固定、包埋、切片、脱蜡水化以及后续的处理步骤。1.在整个实验过程中，要注意操作规范和实验条件的控制，以确保实验结果的准确性和可靠性。2.样本固定、包埋、切片和脱蜡水化等步骤是免疫组化实验的基础和关键，必须严格按照实验流程进行操作。3.在实验
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细胞外基质粘弹性对细胞行为的影响
细胞外基质（ECM）的粘弹性对细胞行为具有显著影响。粘弹性是指材料在受到外力作用时，既表现出弹性（能够恢复原始形状）又表现出粘性（在变形过程中会耗散能量）的特性。在细胞培养和组织工程中，ECM的粘弹性对细胞的生长、分化、迁移、增殖等多种行为起着至关重要的作用。以下是对细胞外基质粘弹性对
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透射电镜下的细胞胞葬
透射电镜（Transmission Electron Microscope, TEM）在细胞生物学研究中是一种非常重要的工具，它利用电子束穿透样品，并通过电磁透镜放大成像，以极高的分辨率观察细胞的超微结构。关于透射电镜下的细胞胞葬（这里可能指的是细胞凋亡过程中的细胞形态变化或细胞自噬等现象，但“细胞胞葬”并非一个标
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溶酶体驱动线粒体内膜的碎片去除
溶酶体驱动线粒体内膜的碎片去除是一个重要的细胞过程，该过程对于维持线粒体健康和功能至关重要。溶酶体是细胞内的一种重要细胞器，具有消化和降解、废物溶解、免疫功能、调节细胞内pH值等多种功能。而线粒体则是细胞的“能量工厂”，负责产生ATP等能量分子，以支持细胞的正常运作。近年来，发现溶酶体与
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细胞免疫荧光实验protocol
一、试剂耗材准备：可用于荧光实验的一抗、荧光二抗、4%多聚甲醛、曲拉通（破膜剂）、BSA或二抗来源动物的血清，一般是山羊血清（用于封闭）、PBS、DAPI和抗荧光淬灭封片剂（可选用含DAPI的抗荧光淬灭封片剂）、盖玻片或专用细胞爬片、载玻片等。二、细胞爬片准备：爬片可以用一般的盖玻片，也可以用专
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细胞接毒操作步骤及注意事项
1.准备细胞：选择适当的细胞系，培养并使其达到适当的生长状态。2.准备病毒：根据你需要的病毒和浓度，制备好病毒溶液，如腺病毒、逆转录病毒等。3.接毒：当细胞长到合适密度时，就可以进行接种（建议在细胞传代48h内进行接种，细胞密度达80-90%左右进行）。移除先前的培养液，用1*PBS洗2-3次，移除残留的
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流式细胞术实验流程总览
使用蛋白质运输抑制剂来在细胞内捕获细胞因子/蛋白质。注意孵育时间以避免毒性。冻存和培养的细胞以及组织来源的细胞通常含有许多死细胞，这些细胞可能会表现出不寻常的自发荧光和非特异性染色。1）使用细胞筛网过滤可以去除细胞团块，以防止高背景染色或仪器堵塞。2）通过维持细胞在适当的温度，可以防止
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流式细胞仪类型和技术特点
通过流体学、光学和电子学三个关键系统实现细胞分析和分选。流体学系统使用鞘液输送细胞至检测点，光学系统利用激光和光电探测器捕捉细胞的光散射和荧光信号，而电子系统将这些信号转换为数字数据。多激光配置允许同时检测多个参数，而新型检测器如APD提升了检测的灵敏度。这些技术的综合应用使得流式细胞
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吐温20在WB中的作用是什么？
吐温20作为一种非离子型表面活性剂，在WB实验中主要用于洗掉非特异性结合的蛋白质，从而提高检测的特异性和信噪比。降低溶液表面张力：吐温20能够降低溶液的表面张力，使抗体更容易扩散并结合到膜上的目标蛋白。减少非特异性结合：由于吐温20的表面活性剂特性，它可以减少抗体对抗原的非特异性作用，从而
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免疫学不能不知道8个基础实验
现代分子生物学和免疫学的进展加深了我们对许多疾病的了解，并且导致了免疫新策略的产生，免疫学检测方法可分为体液免疫和细胞免疫测定。 WB 蛋白免疫印迹是将蛋白样本通过聚丙烯酰胺电泳按分子量大小分离，再转移到杂交膜（blot）上，然后通过一抗/二抗复合物对靶蛋白进行特异性检测的方法。
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细胞膜的功能结构和提取方法
细胞膜是一种特殊生物膜，不仅保证了细胞内各种生理反应有序进行，也实现了物质、能量和信号的正常传导，其大部分功能依靠细胞膜上的膜蛋白完成。膜蛋白提取的难点较多，主要原因是膜蛋白在生物体内的表达水平较低，具有极强的疏水特性，并且通常在实验条件下难以维持正确构象。生物膜的特定功能主要是由蛋白
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流式细胞——制备样本时怎样减少细胞碎片产生？
众所周知，流式细胞仪本身不能将细胞碎片自动过滤而只分析细胞,细胞碎片的产生会影响数据的质量和分析的准确性。列如，细胞碎片的存在可能会导致流式细胞仪的前向散射光（FSC）和侧向散射光（SSC）参数的读数异常，这可能会干扰对细胞大小和颗粒度的准确评估。此外，细胞碎片还可能影响细胞活性的检测
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采血管抗凝剂的作用机制及应用
抗凝剂在医学领域中扮演着至关重要的角色，它们通过一系列精妙的作用机制，防止血液在不需要凝固的时候过早凝固，从而让我们的检验畅通无阻。采血管中常见的抗凝剂主要包括肝素、乙二胺四乙酸盐（EDTA）、枸橼酸钠和草酸盐等，它们各自通过不同的机制来防止血液凝固。不同的抗凝剂有不同的用处，以下是
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流式细胞术测量自然杀伤细胞毒性
使用流式细胞术测量自然杀伤细胞毒性，该方法具有不使用放射性试剂、高灵敏度和快速检测等优点，并通过对健康个体和预期NK细胞功能缺陷患者的样本进行验证，证明了其在临床环境中的有效性和适用性。NK细胞是先天免疫的重要组成部分，对免疫监视至关重要。流式细胞术提供了一种替代51Cr释放试验的方法
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如何确保实验室加热设备安全？
在发生设备故障或事故时，应立即停止使用加热设备，并采取相应的应急措施。如发生火灾，应迅速使用灭火器或灭火毯进行灭火，并及时报警。总之，确保实验室加热设备安全需要从设备选择、操作规范、维护检查和应急措施等多个方面进行综合考虑和管理。只有这样，才能有效地预防事故的发生，保障实验室人员
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Calcein-AM/PI细胞活死双染
Calcein-AM/PI细胞活死双染是一种流行的荧光染色技术，用于区分活细胞和死细胞。Calcein-AM是一种可渗透细胞膜的非荧光前体，它在活细胞中由内源性酯酶转化为绿色荧光的Calcein，表明细胞活性。丙啶碘（PI）是一种不能穿透完整细胞膜的红色荧光染料，只在死细胞中染色，因为它们的膜完整性受损
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PCR，qPCR，RT-PCR，RT-qPCR的区别
传统PCR：这是一种基本的聚合酶链反应，用于在无定量监测的情况下扩增特定DNA片段。它仅告诉我们目标DNA片段是否存在于样本中。定量PCR（qPCR）：也称为实时PCR，它不仅能够扩增DNA，还能够实时监测扩增过程，提供定量的数据输出。这是通过在PCR反应中引入荧光标记实现的，荧光强度随DNA量的增加而增
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盘点几种常见的细胞核染料
在细胞生物学研究中，细胞核染料是实验操作的核心工具之一。无论是用于观察细胞形态、研究细胞周期，还是评估细胞凋亡与坏死，细胞核染料都起着至关重要的作用。这些染料可以通过与细胞核中的DNA结合，发出荧光，帮助科研人员在显微镜下清晰地观察细胞核的形态和结构。同时，染料还可用于检测细胞状态
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CFSE细胞增殖实验
CFSE染色的基本原理是利用其荧光特性来观察和量化细胞分裂。CFSE分子可以透过活细胞的细胞膜，进入细胞后通过非特异性的酯酶活性被转化为更加亲水的形式，与细胞内蛋白共价结合。在细胞分裂时，荧光标记的CFSE将均匀分配到两个子细胞中，由于分裂的每次过程荧光信号都会减半，通过流式细胞仪可以准确测
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Co-IP结果解读及实验步骤
共沉淀（Co-Immunoprecipitation，Co-IP）是一种强大的分子生物学技术，用于研究两种或多种蛋白质之间的相互作用。通过使用特定的抗体捕获目标蛋白质及其结合的蛋白质，Co-IP可以帮助科学家揭示蛋白质在细胞信号传导、疾病发展及生物体内其他关键过程中的功能和相互作用网络。这项技术不仅可以识别已
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流式实验中常见问题解答
流式细胞术，通常被称为流式实验，是现代生物医学研究中不可或缺的技术之一。这项技术通过使用激光来激发流经仪器的单细胞，并分析这些细胞散射光和荧光的特性，使研究者能够快速分析数千至数百万个单细胞的物理和化学性质。由于其能够提供细胞大小、形状及其内部和表面分子的定量信息，流式实验已成为细胞
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一文搞懂流式线粒体通透性转换孔（MPTP）实验
线粒体通透性转换孔（MPTP）是一种位于线粒体内膜上的蛋白质复合体，关键功能是调控细胞的生死。MPTP的打开会导致细胞内钙离子和其他代谢物的失衡，引发细胞凋亡。这一过程在许多生理及病理状态下极为重要，尤其是在细胞应激和损伤修复中。
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细胞换液知识点解析+小技巧
细胞换液，即更换培养细胞所用的培养基，是细胞培养中一项常规但关键的操作。其主要目的是移除代谢产物、调整营养成分和维持pH平衡，确保细胞处于最佳生长状态。定期换液可以避免营养物质耗尽和代谢废物积累，这些都可能对细胞生长产生负面影响。适当的换液频率有助于维持细胞生长环境的稳定性，支持细胞健康和增殖
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如何正确处理细胞复苏过程中的冷冻保护剂以减少对细胞的损伤？
在细胞复苏过程中，正确处理冷冻保护剂是非常关键的步骤，以确保细胞的活性和减少潜在的损伤。那么在实际操作中我们应该如何正确处理细胞复苏过程中的冷冻保护剂才能将冷冻保护剂对细胞的损伤降到最低呢？在整个复苏过程中，操作应迅速且小心，以最大程度地恢复细胞的健康状态。同时，操作人员应采取适当的防护措施，以防止冻伤或接触有害化学物质。
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细胞不贴壁，可能与这些原因有关
①胰蛋白酶消化过度：胰酶处理时间过长，可能导致细胞膜蛋白受损，影响细胞贴壁。②微生物污染：支原体感染或其他微生物污染会导致细胞功能紊乱，影响贴壁能力。③培养基pH值过碱：培养基pH值过高，可能导致细胞不适应，影响贴壁。④细胞老化：细胞传代次数过多，可能会导致细胞老化，失去贴附性。⑤接种细胞起始浓度不当
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细胞冻存时要不要缠封口膜？
1.封口膜在极低温环境下，如-80℃或液氮温度，会变得非常脆弱并容易破裂，脱落。2.封口膜在低温下可能会与冻存管内壁粘连，使得在复苏时难以完全去除。3.不缠封口膜还有助于在冻存盒中更容易地放置冻存管。4.封口膜在冻存过程中破裂，它不仅无法有效地封闭冻存管，还可能导致冻存液泄漏或液氮进入冻存
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流式细胞术中如何通过设置参数门控实现对细胞群体的筛选？
参数门设置的目的及步骤流：式细胞术中，参数门控是一种用于筛选特定细胞群体的技术。通过设置不同的参数门，可以根据细胞的物理和荧光特性来选择性地排除或保留细胞。以下是通过参数门控实现细胞群体筛选的步骤：1.前向散射（FSC）与侧向散射（SSC）门控：FSC通常与细胞大小相关，而SSC与细胞内部复杂性或颗粒度相关
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液相实验中常用溶剂间的互溶性
理解溶剂间的互溶性尤为重要，因为它直接影响到溶剂的混合效果，从而决定了溶质的溶解度、反应速率及产品的纯度。例如，在药物合成中，选择能够有效溶解所有反应物的溶剂，能够确保反应完全进行，降低副反应的发生。在生物样品的提取和分析过程中，正确的溶剂互溶性能够保证生物活性物质的完整性和稳定性
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铁死亡和细胞凋亡有什么区别
铁死亡：是一种铁离子依赖性的程序性细胞死亡形式。它主要在二价铁离子或酯氧合酶的作用下，催化细胞膜上高表达的不饱和脂肪酸，发生脂质体过氧化，从而诱导细胞死亡。此外，还表现为抗氧化体系（如谷胱甘肽GSH和谷胱甘肽过氧化物酶GPX4）的表达量降低。细胞凋亡：是一种由基因控制的细胞自主的有序的死亡
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细胞凋亡的检测方法汇总
细胞凋亡的重要性与基本概念：细胞凋亡，也被称为程序性细胞死亡，是细胞有序、主动死亡的过程，对于生物体的发育和稳态维持至关重要。这种细胞死亡方式是高度受控的，能够帮助生物体去除老旧、受损或有潜在危险的细胞，从而保持健康的细胞环境。与凋亡相对的另一种细胞死亡形式是坏死，坏死通常是因为外部
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一次把细胞培养用血清给大家聊透
在细胞培养的世界里，血清扮演着至关重要的角色。它不仅是培养基的一部分，更是细胞生长和分化的催化剂。血清中含有丰富的生长因子、激素和营养物质，这些成分能够模拟自然生长环境，促进细胞增殖和存活。血清中的生长因子，如表皮生长因子（EGF）和纤维母细胞生长因子
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荧光定量PCR全流程实验步骤和注意事项
荧光定量PCR（qPCR）技术，作为现代生物科学领域的一项核心工具，广泛应用于基因表达分析、病毒检测和癌症研究等多个领域。qPCR技术融合了传统PCR的基本原理和先进的荧光检测技术，能够精确地测定特定DNA序列的数量。它不仅提高了实验的灵敏度和准确度，还大大缩短了实验时间。在进行荧光定量PCR（qPCR）
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生物缓冲液：分子生物学中的无声英雄
在分子生物学的实验世界里，我们常关注那些显赫一时的“明星试剂”如抗体、酶和血清，这些关键试剂对实验结果具有决定性的影响。然而，在这些实验的背后，有一个经常被忽视却至关重要的幕后英雄——生物缓冲液。这种看似平凡的溶液在实验中扮演着不可替代的角色，它通过精确维护反应环境中的pH稳定，确保生物化
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何时用瓶皿培养？何时用孔板培养？
在细胞生物学研究中，细胞培养是一个关键环节，而选择合适的培养器皿更是确保实验成功的基础。无论是培养瓶、培养皿，还是多孔板，每种器皿都有其独特的用途和优势。了解何时使用哪种器皿，不仅能提高实验效率，还能确保数据的准确性和可重复性。在细胞培养实验中，选择合适的培养器皿是确保实验成功的关键
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刚复苏的细胞怎么又就挂了？
细胞复苏的关键步骤：确保活性与最小化损伤细胞复苏是生物医学实验中的一项关键技术，直接影响到细胞的活性和后续实验的有效性。正确的复苏操作不仅可以提高细胞的存活率，还可以确保细胞功能的完整性。以下是针对细胞复苏过程中几个关键操作的详细指导。复苏过程中的关键注意事项 1. 水浴时间的控制
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小白入门，如何搞懂线粒体研究
要搞懂线粒体研究，可以从以下几个方面入手，以便全面而深入地理解这一复杂而重要的细胞器。我们给大家一个大致的框架，旨在帮助初学者或感兴趣的研究者逐步深入线粒体研究的领域。一、了解线粒体的基本概念与结构 定义与功能：线粒体是真核细胞中特有的半自主性细胞器，主要负责产生细胞所需的能量
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细胞在-80℃冰箱中能保存多久
根据细胞的类型、冻存条件和冻存液的配方等因素，细胞在-80℃冰箱中的保存时间有所不同。通常情况下，细胞可以在此温度下保存几个月至一年不等。然而，对于某些特定细胞类型和使用优化冻存液的情况下，其保存时间可能会更长。总体而言，-80℃冰箱适合短期保存细胞，若需要长期保存，则建议将其转移到液氮
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线粒体的10大研究方向
1.线粒体在能量代谢中的作用：线粒体是细胞内的“动力工厂”，负责将食物转化为ATP，为细胞提供能量。研究线粒体在能量代谢中的作用，有助于理解细胞生命活动的能量需求与供应。2.线粒体与细胞凋亡的关系：线粒体在细胞凋亡过程中起着关键作用。其结构和功能的改变可以触发细胞凋亡。研究线粒体如何参与细胞
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为什么你养的细胞总是污染？细胞培养常见污染及防治！
细胞污染是指在细胞培养过程中，异种细胞、细菌、真菌、酵母、支原体等微生物或病毒等外源性物质被引入到了细胞培养物中，从而影响了细胞培养的健康和正常生长。细胞污染可能导致实验结果的失真，同时还会对细胞的生长状态、代谢活性等产生负面影响。细胞培养中的污染防治是一个系统工程，需要严格的操作规
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TRIzol提取细胞RNA
TRIzol是一种含有酚和氯仿的试剂，可以有效地分离出RNA、DNA和蛋白质。其工作原理基于物质的溶解性差异。在高盐环境中，RNA、DNA和蛋白能够在不同的有机相和水相中分层。具体来说，当样本在TRIzol中裂解后，加入氯仿并离心，系统会分成上层的水相、中间的蛋白质相和下层的有机相。RNA位于上层水相中，而D
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细胞冻存的实验步骤&注意事项
严格遵守细胞冻存实验操作规程，做好实验记录和数据归档。根据不同细胞类型选择适合的冻存液，定期更新冻存液以确保质量。细胞冻存后定期检查存活率及细胞状态，保持仪器设备的定期维护与检修。细胞冻存是细胞学研究中不可或缺的重要技术，正确的操作步骤和注意事项能有效保证细胞的长期保存与应用。
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提高悬浮细胞感染效率的关键
悬浮细胞的感染效率是在基因操作和细胞生物学实验中面临的一个重要挑战。由于悬浮细胞不依赖于基质进行生长，其独特的生物学特性使得它们在病毒感染过程中表现出较低的感染效率。提高悬浮细胞的感染效率不仅能够提升实验的成功率，还能为基因功能研究和细胞治疗提供更强有力的工具。
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细胞复苏时，到底要不要用培养基稀释含细胞的冻存液后再离心？
在细胞生物学研究中，细胞冻存和复苏是常见且重要的操作步骤。细胞冻存技术的应用不仅能够保存珍贵的细胞系，还能在需要时提供稳定的细胞来源。然而，细胞复苏过程中的操作细节，尤其是是否需要用培养基稀释含细胞的冻存液后再离心，常常引发研究者的讨论和关注。细胞冻存液通常含有高浓度的二甲基亚砜
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刚复苏的细胞为什么会背景脏还有小黑点，如何判断是细胞碎片还是污染？
细胞复苏是细胞生物学研究中的一个重要环节，但在实际操作中，常常会遇到一些困扰，比如刚复苏的细胞背景脏、出现小黑点等现象。这些问题不仅影响实验结果的准确性，还可能导致实验失败。那么，刚复苏的细胞为什么会出现背景脏和小黑点呢？这些小黑点是细胞碎片还是污染？如何判断和处理这些问题？
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细胞划痕实验步骤，干货满满
在铺细胞阶段，注意根据不同细胞类型添加适量细胞，通常约为 5x105 个细胞，以确保细胞能够在过夜培养后达到充分覆盖。在细胞划线过程中，使用枪头比着直尺，确保线条垂直于板背后的横线划痕，避免倾斜造成误差。在洗细胞和培养观察阶段，严格按照操作步骤进行，确保细胞清洁和培养条件的稳定
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细胞复苏后需要多久才能开始进行实验？怎么判断呢？
通常情况下，细胞复苏后通常需要一定的时间来恢复生长状态，以便进行后续的实验。复苏后的细胞需要在第二天（约12-24小时）观察细胞状态并更换新鲜培养基。在细胞形态、生长速度等恢复正常后，可以进行传代等操作。一般来说，根据经验复苏后的细胞需要经过2-3次传代（按照常见细胞的生长速度，2天传一代的
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细胞上清液里蛋白的浓缩操作方法
在细胞生物学和生物化学研究中，细胞上清液中的蛋白质分析是一个关键步骤。细胞上清液是细胞培养过程中从培养基中分离出的液体部分，包含了细胞分泌的各种蛋白质和代谢产物。为了进一步研究这些蛋白质的功能和特性，通常需要对其进行浓缩和纯化。本文将介绍几种常用的细胞上清液中蛋白质浓缩方法，包括超滤
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流式细胞术分析细胞周期的实验步骤
流式细胞术是一种很常见的实验方法，对于细胞周期来说，一般是采用经典的碘化丙啶（PI）染色的方法进行周期分析， PI可以和双链DNA结合产生荧光，荧光强度和DNA含量呈正比，因此，我们可以根据DNA含量的多少来进行细胞周期的分析。按照实验要求进行细胞铺板，待细胞长到需要的密度收细胞。
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线粒体，对细胞代谢的四大贡献
细胞生长与分裂：一些特殊的线粒体还能参与合成细胞生长和分裂所需的分子，如核苷酸、氨基酸和血红素等。内分泌信号分子释放：性腺和肾上腺皮质中的线粒体专门负责类固醇的生成，包括定义生物体性别的激素（雌激素、孕酮和睾酮）以及机体调节代谢和心理压力所需的糖皮质激素和矿皮质激素等。
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从分子克隆到细胞转染全解析
从分子克隆到细胞转染是一个涉及多个步骤和技术的复杂过程。分子克隆通过重组技术将目的基因与载体连接起来，形成重组质粒；而细胞转染则将重组质粒或外源基因导入真核细胞中，以实现基因的表达和功能研究。在实际操作中，需要根据实验目的和细胞类型选择合适的分子克隆和细胞转染方法，并严格按照操作步骤
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线粒体在铁死亡发生过程中的五大重要作用
1. 线粒体ROS的产生：ROS的来源：线粒体是大多数哺乳动物细胞中ROS（活性氧）的重要来源。在氧化磷酸化过程中，线粒体内部会产生大量的ROS。ROS与铁死亡的关系：ROS的增加会促进铁死亡的发生。过量的ROS会导致脂质过氧化，进而引发细胞死亡。线粒体靶向的抗氧化剂或酶可以抑制这一过程。
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手把手教学｜MTT实验检测细胞活性
MTT实验的原理依赖于细胞内琥珀酸脱氢酶的活性。这种酶能催化MTT分子在细胞内的还原过程，形成水不溶性的蓝紫色结晶甲瓒（Formazan），并沉积在细胞中。活细胞具有此酶的功能，因此能够产生甲瓒结晶，而死细胞缺乏这种功能。二甲基亚砜（DMSO）被用来溶解细胞内的甲瓒结晶。通过酶标仪在490nm或
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如何高效复苏细胞？这四点要注意！
每次复苏细胞都手忙脚乱？好不容易复苏的细胞竟然污染了？高效复苏细胞流程包括了①从液氮罐中取出冻存细胞，放入37℃水浴锅中融化，轻柔离心后收集细胞沉淀；②缓慢用移液枪吸去上清，加入适量浓度和体积的完全培养基，重悬细胞沉淀，转移至细胞培养皿或细胞培养瓶；③根据细胞培养皿或者培养瓶的体
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如何避免细胞培养试剂交叉污染
避免细胞培养试剂交叉污染是确保实验准确性和可靠性的关键步骤。避免细胞培养试剂交叉污染需要从多个方面入手，包括规范操作流程、加强清洁与消毒、优化实验环境、提高操作人员素质以及采取其他预防措施等。这些措施的实施将有助于提高实验结果的准确性和可靠性。
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流式钙离子荧光探针实验
流式钙离子荧光探针实验是一种常用的生物化学技术，用于检测细胞内游离钙离子浓度的变化。钙离子荧光探针（如Fluo-3 AM或Fluo-4 AM）这些探针通常配制在无水DMSO中，使用前需根据实验需求稀释至适当浓度。细胞培养液、HBSS（Hank's Balanced Salt Solution）、HEPES缓冲液等。胎牛血清
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科研人必备！手把手教选抗体
在生物医学研究的世界中，抗体是不可或缺的工具。无论是用于基础科学的探索，还是应用于临床诊断和治疗策略，抗体的作用至关重要。正确的抗体可以帮助科研人员精确标记特定的细胞类型或蛋白，从而揭示生物过程的细节或疾病的本质。相反，错误选择的抗体可能导致实验结果的误导，浪费宝贵的时间和资源
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实验干货 | Edu告别细胞增殖烦恼
细胞增殖基础--细胞增殖是生物体生长和组织修复的基本过程。它涉及细胞周期的几个关键阶段：G1期（细胞生长）、S期（DNA复制）、G2期（准备分裂）和M期（细胞分裂）。每个阶段都受到精确的调控机制的控制，确保DNA复制和细胞分裂的正确进行。细胞周期的失调可能导致细胞功能异常或疾病，如癌症。
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实验干货 | 避免细胞污染的小操作
细胞培养技术是生物医学研究中的基石，它允许科研人员在控制环境下研究细胞的生长和行为。然而，细胞培养过程中的污染是常见的挑战，它可能导致实验失败或数据失真。细胞污染主要包括细菌、真菌、酵母和交叉污染。这些污染源可以通过多种途径进入培养系统，包括污染的培养基、不当操作或设备内部的污染
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双荧光素酶报告基因实验
基因报告系统的基本概念--基因报告系统是一种用于监测和量化基因表达活性的生物技术工具。报告基因，如荧光素酶或β-半乳糖酶，被插入到感兴趣的启动子下游，其表达水平直接反映了启动子的活性。这种系统在药物筛选、基因调控机制研究以及信号传导路径分析中具有重要应用
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细胞增殖检测新技术——EdU染色
在现代生物医学领域，细胞增殖的检测是研究细胞生物学基本过程的关键技术，尤其在癌症研究和药物开发中扮演着至关重要的角色。传统上，BrDU（溴脱氧尿苷）标记法广泛用于跟踪DNA复制，从而标记增殖细胞。然而，BrDU方法操作繁琐，且需要破坏细胞DNA结构才能检测，这在一定程度上限制了其应用范围
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TSA多重免疫荧光染色的实验
在TSA多重免疫荧光染色技术已广泛应用于生物学、医学研究以及临床病理诊断等多个领域。通过该技术，研究人员可以更加深入地了解组织微环境中的复杂信息，为疾病的诊断和治疗提供有力支持。1.样本准备：将组织切片进行预处理，如脱蜡、水化等。2.抗原修复：根据一抗选择合适的修复液，将切片组织浸没
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RNA提取的试剂和耗材需要哪些特点
RNA提取的试剂和耗材需要具有一系列特点以确保RNA的高质量提取。RNA提取的试剂和耗材需要具有高效裂解能力、无RNase污染、低毒性、稳定性好、兼容性强以及纯化效果好等特点。同时，耗材还需满足无RNase、耐高温高压、材质优良、密封性好、规格多样和易于操作等要求。这些特点共同保证了RNA提取过程的
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科研干货 | 一文搞懂细胞培养实验
细胞培养是生物医学研究中的一项核心技术，广泛应用于药物开发、基因研究、癌症研究等多个领域。通过体外培养细胞，科学家们能够观察和研究细胞在特定条件下的行为及反应，为理解疾病机制和开发新疗法提供了重要依据。细胞培养的基础概念细胞培养是一种在体外模拟体内环境，将细胞置于人工控制的条件下进行生长和繁殖的技术
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细胞因子检测技术概览
细胞因子检测技术是研究免疫功能和疾病机制的关键工具。ELISA（酶联免疫吸附试验）原理：利用抗体特异性结合目标蛋白，通过酶标记产生可检测的信号。应用领域：广泛用于疾病诊断、疫苗研发和免疫学研究。优点：成本低，操作简便，特异性强。缺点：灵敏度受限，批间差异可能较大。
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流式实验中的对照设置
对照在流式实验中的重要性--信号相对性：流式细胞术测量的信号（散射光信号和荧光信号）都是相对于背景的，需要对照来界定这些信号的范围，区分背景荧光和实验信号。门的位置设定：对照帮助确定选择特定细胞群体的门的位置，确保对目标细胞群体的准确分析。实验操作判断：对照有助于识别实验过程中可能
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流式细胞仪检测ROS的实验步骤
活性氧（ROS）是氧代谢的天然副产物，正常情况下，机体含量较低。当机体受到损伤刺激时，如药物毒性、缺氧等，ROS水平会急剧增加，超过机体自身清除能力时，机体氧化-抗氧化作用失去平衡，从而导致细胞膜破坏，最终引起机体细胞死亡。因此，ROS的测定有助于判断细胞损伤情况
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科研干货|CCK8细胞增殖实验
在准备阶段，您需要准备以下试剂和耗材：完全培养基、磷酸盐缓冲液（PBS）、CCK8试剂盒、96孔板和细胞计数板。此外，还需要以下仪器：培养箱、显微镜、超净工作台和酶标仪。（2）实验操作--a. 细胞种植板：首先向96孔板中加入每孔100ul的细胞悬液。通常情况下，每孔应含有1000-3000个细胞，具体的细
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教你如何将质粒转化于感受态细胞！
将质粒转化于感受态细胞是分子生物学实验中的一项基础技术，常用于将外源DNA导入细菌中以进行质粒扩增或蛋白表达。保实验所用的质粒 DNA 质量良好，浓度适中。可以通过琼脂糖凝胶电泳等方法检测质粒的纯度和完整性。准备感受态细胞。可以购买商业化的感受态细胞，也可以自己制备。感受态细胞通常需要在
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THP-1细胞的培养方法和注意事项
细胞聚团可能是细胞营养缺失或者受到损伤，所以共用了细胞膜，以便于彼此释放的促进生长的因子可以被很快接收到，细胞生长一段时间后，可吹打开，离心，然后换液。另外，THP1细胞离心速度一般不要高于800rpm，实验室常用600-700rpm，否则可能会导致细胞死亡。
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常用的DNA的提取方法
随着技术不断发展，DNA提取方法不断优化，新的技术不断出现，如纳米材料技术、芯片技术、自动化技术等在DNA效率和纯化方面都表现出明显的优势。每种方法都有优缺点，选择合适的方法需要根据实验目的、实验条件等综合考虑，不断优化条件来获取高纯度和高质量的DNA样本。
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细胞冻存管要不要缠封口膜？
细胞冻存管是否要缠封口膜并没有绝对的答案，而是需要根据实验的具体需求、冻存管的密封性能以及实验环境来综合考虑。在一般情况下，如果冻存管密封性能良好且实验环境稳定，可以不使用封口膜；但在特殊情况下，如实验对样本密封性有特别高的要求或冻存管密封性能不佳时，可以考虑使用封口膜来增强密封性
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细胞冻存管要如何正确使用和保存呢？
避免反复冻融：尽量避免对同一批细胞进行反复冻融操作，以减少对细胞的损伤和死亡。长期保存策略：对于需要长期保存的细胞样本，应制定详细的保存计划和策略，包括定期更换冻存液、更新细胞系等。综上所述，正确使用和保存细胞冻存管需要遵循一系列严格的操作规程和注意事项，以确保细胞样本的安全性和可用性。
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RNA和WB蛋白表达不一致怎么办？
当RNA表达与WB（Western Blot）蛋白表达不一致时，可能由多种因素导致。以下是一些建议的解决步骤和考虑因素：检查实验操作：确保RNA抽提和WB实验的所有步骤都严格按照标准流程进行，避免操作误差。验证实验试剂的质量和有效期，确保实验条件的一致性。重复实验：在不同时间点、使用不同的样本或批次进行重复实验，以确认结果的可靠性。
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如何提高RNA的纯度
一、实验环境和工作区域的清洁。保持清洁：RNA酶（RNase）是一种无处不在的酶，能够降解RNA。因此，保持实验台面和器具的清洁是避免RNase污染的第一步。实验人员应经常清洁实验区域，并使用RNase-free的试剂和耗材。个人卫生：实验人员应注意个人卫生，如经常更换手套、避免触摸面部等，以防止交叉污染。
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超净台和安全柜内到底能不能用酒精灯？
在超净台内，酒精灯的使用存在一定的争议。一方面，酒精灯周围可以形成一个相对无菌的环境，这对于某些需要高度无菌条件的实验步骤是有帮助的。例如，在开启试剂瓶盖、灼烧接种环或涂布棒等操作时，酒精灯可以提供一定的保护，防止灰尘和微生物的污染。此外，酒精灯的高温可以破坏细菌和其他微生物的细胞结
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细胞表型检测实验有哪些？
光学显微镜观察。使用普通光学显微镜可以直接观察细胞的大小、形状、贴壁状态等基本形态特征。例如，成纤维细胞通常呈长梭形，上皮细胞多为多边形。相差显微镜可更好地观察活细胞的细节，如细胞内的颗粒、细胞器的运动等。电子显微镜观察。扫描电子显微镜（SEM）用于观察细胞表面的微观结构，如微绒毛、褶皱等
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流式细胞术检测细胞周期的原理是什么？
流式细胞术检测细胞周期的原理主要基于细胞周期各时相中DNA含量的不同以及碘化丙锭(PI)与DNA的结合特性。流式细胞术检测细胞周期的原理是基于细胞周期各时相中DNA含量的不同以及PI与DNA的结合特性，通过流式细胞仪对细胞进行多参数、快速的定量分析来实现对细胞周期各时相的检测和区分。
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一文读懂CCK-8检测实验，看完你就会了！
在细胞生物学研究中，CCK-8 检测实验是一种广泛应用的方法，用于评估细胞增殖、细胞毒性以及药物敏感性等。下面就让我们深入了解这个强大的实验技术，看完这篇文章，你一定会掌握 CCK-8 检测实验的关键要点。CCK-8 检测实验是一种简单、快速、准确的细胞生物学实验方法。通过掌握其原理、实验步骤和注意事项
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细胞冻存时如何选择合适的冻存管？
在细胞冻存时，选择合适的冻存管可以从以下几个方面考虑：聚丙烯（PP）材质。优点：具有良好的化学稳定性，能耐受低温环境，不易破裂。对大多数细胞冻存保护剂也具有较好的耐受性，不会与保护剂发生化学反应。同时，PP 材质的冻存管透明度较高，方便观察细胞样本。适用情况：适用于常规的细胞冻存，如哺乳动物细胞、细菌、酵母等的冻存。
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冻存管选择的其他参考标准
不同颜色的冻存管可以用于区分不同类型的细胞样本或实验条件。例如，使用特定颜色的冻存管来存储特定细胞系、不同处理组的细胞或者不同冻存时间的样本。这样在存储和取用细胞时，可以快速准确地识别所需的样本，减少错误的发生。一些冻存管还带有颜色编码的盖子或标签区域，方便进行分类和标记
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关于细胞培养常见问题及解决方法的资料
在细胞培养过程中，一旦发现问题，要及时分析原因并采取相应的解决措施，同时做好记录，以便后续参考和改进。此外，严格的无菌操作、规范的实验流程和良好的实验环境对于细胞培养的成功也至关重要。如果问题持续存在或难以解决，建议咨询专业的细胞培养技术人员或相关机构。
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养死多少细胞，才能总结出这14条经验！
在生命科学和细胞培养领域，确实需要经历大量的实验、观察和失败，才能逐渐积累起宝贵的经验和知识。这14条经验（尽管未具体列出，但基于一般科研和实验经验）很可能是关于细胞培养、处理、分析等方面的深刻见解。这些经验的总结，不仅仅是关于“养死多少细胞”的数量问题，更是对实验设计、操作细节、
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DNA凝胶回收试剂盒试剂配方
DNA凝胶回收试剂盒的试剂配方因不同品牌、型号和用途而异，但通常包含一些基本的试剂和步骤。凝胶溶解液（Buffer G/PG）：用于溶解琼脂糖凝胶中的DNA。此溶液可能含有胍盐或其他离子，有助于DNA从凝胶中释放出来。洗涤液（Wash Buffer）：用于去除吸附柱上残留的杂质和盐分。洗涤液在使用前通常需要加入无水乙醇进行稀释，以达到最佳的洗涤效果
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Caspases酶活性检测
Caspases酶活性检测是细胞生物学和医学研究中的一个重要环节，主要用于评估细胞凋亡过程中Caspases家族的酶活性。Caspase酶活性检测是评估细胞凋亡过程中Caspases家族酶活性的重要手段。通过选择合适的检测方法和严格控制实验条件，可以获得准确可靠的实验结果，为细胞生物学和医学研究提供有力的支持。
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【神经免疫】| T细胞与疼痛
T细胞与疼痛之间存在密切的关系，它们通过参与神经病理性疼痛的慢性化过程、免疫调节作用以及疼痛缓解的神经免疫机制等方式，对疼痛的发生、维持和缓解产生影响。然而，由于疼痛机制的复杂性，T细胞在其中的具体作用仍需进一步深入研究。未来，随着对神经免疫机制的不断探索
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【神经免疫】| 巨噬细胞与疼痛
首先，在组织损伤或炎症状态下，巨噬细胞会被激活并聚集到损伤部位。它们会释放多种炎性介质，如前列腺素、一氧化氮、细胞因子（如白介素-1、白介素-6 等）。这些炎性物质能够降低疼痛阈值，使得神经末梢对疼痛刺激更加敏感，从而导致疼痛感觉的增强。比如说，在慢性腰痛的患者中
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RNA提取中如何避免污染
在RNA提取过程中，避免污染是至关重要的，因为RNA酶（RNase）无处不在且非常稳定，能够轻易降解RNA。保持清洁：确保实验环境和工作区域的清洁，定期消毒实验台面和器具。RNA提取必须在无RNase的环境中操作。设置专用实验室：如果条件允许，设置RNA操作专用实验室，以减少交叉污染的风险。
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双荧光素酶报告基因实验技术详解
双荧光素酶报告基因实验技术是一种分子生物学技术，它通过使用两种不同的荧光素酶——萤火虫荧光素酶(Firefly Luciferase, F-Luc)和海肾荧光素酶(Renilla Luciferase, R-Luc)来同时监测两个基因的活性。这项技术为基因表达调控研究提供了一种高效、可靠的方法。以下是对该技术的详细解析
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细胞增殖EdU 法原理及应用
EdU 是一种胸腺嘧啶核苷类似物，能够在细胞增殖过程中被细胞摄入并整合到 DNA 中。与传统的 BrdU 检测方法相比，EdU 法具有更高的灵敏度和更快的检测速度。EdU 上的乙炔基能与荧光标记的小分子叠氮化物探针（如 FITC Azide、AF 系列染料等）在一价铜离子的催化下，发生点击反应
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细胞培养中碰到支原体污染怎么办？
在细胞培养过程中遇到支原体污染是一个常见的问题，支原体是一种介于细菌和病毒之间的微生物，具有高度适应性和生存能力，能够在多种环境中存活并繁殖。处理支原体污染需要采取一系列措施，以确保细胞培养环境的清洁和细胞的健康生长。以下是一些具体的处理步骤和建议：
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细胞培养中的小黑点，可能是什么？
凋亡小体：细胞凋亡是程序性的细胞死亡过程，当细胞在培养环境中受到不利因素（如营养成分改变、毒素、细胞代谢产物积累等）影响时，可能发生凋亡。凋亡的细胞会形成由细胞器和细胞核碎片组成的小体，称为凋亡小体，这些凋亡小体在显微镜下可能呈现为小黑点
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细胞铺板总是铺不均匀，该如何去做
每加完半拉板子时，把细胞重新混匀，继续加样。加样结束后，可采用敲击法使细胞分布更均匀。具体操作是将板子置于台面上，左手持住板子的左边，右手轻轻敲击板子的右边缘（5-8次），然后顺时针旋转板子，依次敲击剩余三个边。注意力度适中，避免过强或过多次数的敲击导致细胞聚集
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细胞贴壁不均匀的原因
细胞贴壁不均匀的原因可以归结为多个方面，这些原因主要涉及到实验操作、设备条件以及细胞自身状态等。以下是对这些原因的详细归纳接种时没有混匀：在进行细胞接种时，如果细胞悬液没有充分混匀，就可能导致部分区域细胞密度过高，形成团块，而其他区域则细胞稀疏
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生物实验室中常用缓冲液汇总
生物实验室中常用的缓冲液种类繁多，每种缓冲液都有其特定的用途和优势。生物实验室中常用的缓冲液多种多样，每种缓冲液都有其独特的成分、用途和优点。选择合适的缓冲液对于确保实验结果的准确性和可靠性至关重要。在实际应用中，应根据实验的具体需求和条件来选择合适的缓冲液
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神经炎症的四大分类与七大机制
急性神经炎症通常是由感染、创伤或缺血等急性损伤引起的短暂性炎症反应。这是一种机体的自我保护机制，旨在清除病原体、受损细胞和碎片，促进组织修复。在急性神经炎症中，炎症细胞迅速被募集到损伤部位，释放炎症介质，引发一系列免疫反应。
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神经系统电化学信号传导的机制与特点
神经传导发生在非常微观的尺度上，如神经元的突触间隙、离子通道等。要直接观察和测量这些微观结构中的电化学过程，需要极其先进的技术和设备。 比如，研究离子通道的开放和关闭机制，需要使用高分辨率的电生理技术，如膜片钳技术，但这种技术操作难度大，对实验条件要求高。
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线粒体凋亡信号在神经系统疾病中的五大机制
神经系统疾病是一类严重影响人类健康的疾病，其发病机制复杂多样。线粒体凋亡信号通路在神经系统疾病的发生和发展中起着重要作用。本文详细阐述了线粒体凋亡信号在神经系统疾病中的几大作用机制，包括线粒体通透性转换孔的开放、细胞色素 C 的释放、Bcl-2 家族蛋白的调控
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免疫炎症驱动神经损伤的十大作用机制
神经损伤是一类严重影响人类健康和生活质量的疾病，其发病机制复杂多样。近年来，越来越多的研究表明，免疫炎症反应在神经损伤的发生和发展中起着关键作用。免疫炎症驱动神经损伤的机制涉及多个方面，包括细胞因子的释放、氧化应激、细胞凋亡等。深入了解这些机制对于开发有效的治疗策略具有重要意义。
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测序技术在神经系统疾病诊断中的应用
神经系统疾病的准确诊断一直是医学领域的重要挑战。近年来，测序技术的快速发展为神经系统疾病的诊断带来了革命性的变化。本文详细阐述了测序技术在神经系统疾病诊断中的应用，包括其原理、优势、局限性以及在多种神经系统疾病中的具体应用案例。通过对相关研究的综述，揭示了测序技术在提高诊断准
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临床常规检测的免疫相关指标
T 淋巴细胞亚群检测：T 淋巴细胞在免疫应答中起着关键作用。通过检测不同亚群的比例，可以了解机体的细胞免疫功能状态。例如，CD4+T 细胞和 CD8+T 细胞的比例失衡可能与多种疾病相关。其机制是基于不同的表面标志物（如 CD4 和 CD8）来区分 T 淋巴细胞亚群
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氧化应激在神经损伤中的作用机制
氧化应激在神经损伤中的作用和机制一直备受关注，其通过多种途径参与神经细胞损伤过程。氧化应激是指细胞内外环境产生过多的活性氧（ROS）和活性氮（RNS）导致氧化应激反应。在正常情况下，机体通过抗氧化系统来清除ROS和RNS，维持氧化还原平衡。然而，在某些情况下，如外部损伤
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检测炎症因子水平的常见方法
检测炎症因子水平的常见方法主要有以下几种：酶联免疫吸附测定（ELISA）：这是一种常用的定量检测方法。先将特异性抗体包被在微孔板上，加入待检样本，样本中的炎症因子与抗体结合，再加入酶标记的二抗，通过显色反应，使用酶标仪测量吸光度，从而确定炎症因子的浓度。
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铁死亡在神经损伤中的作用机制
铁代谢异常：在脑缺血等情况下，脑内铁浓度可能升高。例如，缺血性脑损伤时，损伤区域附近血管渗漏可导致全铁转铁蛋白流入，使铁浓度增加；脑缺血期间脑内转铁蛋白高亲和力受体1表达上调。外源性全铁转铁蛋白增加会使血铁蛋白饱和度上升，而外源性给予去铁传递蛋白降低血铁蛋白饱和度则具有神经保护作用
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脑缺血后引发的铁死亡与其他因素引发的铁死亡有何区别？
脑缺血引发的铁死亡主要是由于脑部血液供应中断，导致氧气和营养物质缺乏，进而引起一系列代谢紊乱和细胞损伤。例如，缺血会造成细胞内铁离子的失衡和脂质过氧化的增加。其他因素如某些药物、辐射、化学物质等引发的铁死亡，可能是直接作用于特定的细胞通路或分子靶点，导致铁代谢、脂质氧化等方面的异常
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十种常用线粒体功能检测方法
线粒体是存在于细胞内的重要细胞器，它有着独特的双膜结构。线粒体就如同细胞的“动力引擎”，一方面通过一系列复杂的生化反应将有机物转化为细胞可利用的能量形式 ATP，为细胞的各项活动提供源源不断的动力；另一方面，它还参与到诸如物质代谢、细胞信号转导等多种关键过程中，对维持细胞的正常生理功
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[免疫]|常见炎症因子的分类、作用及机制
炎症因子是一类在炎症反应中发挥重要作用的生物活性分子，它们参与调节免疫细胞的活化、增殖、分化以及炎症的启动、维持和消退等过程。综上所述，这些炎症因子在炎症反应中发挥着复杂而多样的作用，它们通过相互作用和协同调节，共同维持机体的免疫平衡和炎症稳态。对这些炎症因子的深入研究有助于我们更好地理解炎症相关疾病的发病机制，并为开发新的治疗策略提供理论依据。
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液氮罐选型的几个重要问题及其解答
气相液氮罐的设计使得样本不直接接触液氮。样本被放置在托盘或冻存架上，而液氮则储存在托盘之下。样本依靠液氮蒸发上升的温度（这个温度略高于液氮本身的温度，但仍在极低的范围内）进行保存。因此，在这种方式下，样本不会直接接触液氮
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一文教你读懂Western Blot实验结果
细胞密度对转染效率有一定的影响。不同的转染试剂，要求转染时的最适细胞密度各不相同，即使同一种试剂，也会因不同的细胞类型或应用而异。转染时过高或者过低的细胞密度会导致转染效率降低，乃至表达水平偏低。最好预实验摸索下条件再进行
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WB实验总是失败？揭秘10个秘诀让你的Western blot一次成功
Western blot（WB）是一种检测特定蛋白质表达水平的实验技术，跟我们小伙伴的实验生活息息相关，但由于复杂的步骤，一不留神就做不出来，着实让人头疼。“干湿结合”比纯实验周期更短，更容易出阳性结果，以下是一些确保WB实验顺利进行的建议：
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电泳缓冲液要不要经常换？
一般来说，为了确保电泳实验的准确性和可重复性，建议定期更换电泳缓冲液。具体的更换频率可以根据实验室的实际情况进行调整。如果实验结果不稳定或出现异常，可以考虑首先检查并更换电泳缓冲液。同时，在更换缓冲液时，要确保使用新的、未开封的缓冲液，并遵循实验室的操作规程和安全注意事项。
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细胞株培养过程出现的问题及其预防和处理
细胞株是用单细胞分离培养或通过筛选的方法，由单细胞增殖形成的细胞群。细胞株的特殊性质或标志必须在整个培养期间始终存在。然而，细胞株在体外培养的过程中会出现一些问题，比如：细胞株无法在培养皿上贴壁生长，细胞株生长缓慢，细胞株死亡等。解决预防处理措施参照如下：
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细胞瞬时转染效果不佳？如何让你的实验成功率翻倍？
在开始准备DNA和转染试剂稀释液时要使用无血清的培养基，因为血清会影响复合物的形成.，也不可以有抗生素，比如青霉素和链霉素，是影响转染的培养基添加物。这些抗生素一般对于真核细胞无毒，但阳离子脂质体试剂增加了细胞的通透性，使抗生素可以进入细胞。这降低了细胞的活性
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荧光定量PCR(RT-qPCR)反应体系的灵敏度提高方法
实时荧光定量 PCR (RT-qPCR) 是一种用于实时扩增和检测特定 DNA 或 RNA 序列的分子生物学技术。该方法利用荧光染料或探针，当与扩增的 DNA 或 RNA 分子结合时会发出信号，从而可以对目标序列进行量化。荧光定量PCR其本质是通过荧光探针或荧光DNA结合染料和实时荧光
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96孔细胞铺板的铺板密度介绍
在实验室中，细胞铺板是一项基础且重要的操作，它涉及到将单个细胞精确地铺设在培养皿中。细胞铺板密度是细胞培养实验中一个重要的参数，它直接影响到实验结果的准确性和可靠性。细胞铺板密度是指在一定体积的培养皿中铺放的细胞数量。细胞铺板密度过低可能导致细胞生长缓慢
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细胞电转效率受哪些因素影响，效率低的原因及改进建议
外加电场的强度是影响电穿孔效率的重要因素。如果电压过低，细胞的质膜改变不足以让DNA通过；反之，电压过高则会对细胞造成不可逆的损伤。研究发现，对于大多数哺乳动物细胞系，当电压在250~500V/cm范围内时，可以观察到最高的瞬时表达水平
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逆转录常见问题与解决办法
1、可以通过测逆转产物cDNA浓度判定逆转效率吗？不可以。逆转录产物cDNA是混合物，除了cDNA产物以外，还有buffer、逆转录酶、引物，同时还包含未转录的模板RNA，总RNA中的tRNA、rRNA等，都会干扰浓度测定结果，因此不能反应真实的cDNA产量。
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RNA的种类与功能介绍
人体一个细胞含RNA约10pg，而含DNA约7pg。与DNA相比，RNA种类繁多，分子量较小，含量变化大。RNA在细胞内扮演着重要的角色，可根据结构和功能的不同分为信使RNA和非编码RNA。本文将对RNA的分类、功能及其研究进展详细探讨。
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ELISA标准曲线ELISACalc绘制方法
ELISA 标准曲线可采用不同的绘图软件来绘制 ，我公司推荐使用的“ELISACalc”软件，ELISACalc软件与CurveExpert相比较，能选取的拟合模型种类较少，优点是操作简单，可以结合excel表格处理数据方便复制粘贴，计算大批量数据时有明显优势。
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细胞培养为什么要加入胎牛血清？
你是否曾经好奇过，在细胞培养过程中，为什么要加入胎牛血清？这看似简单的一步，却蕴含着生命科学的奥秘。今天，我们就来揭开这个谜底，一起探索胎牛血清在细胞培养中的神奇作用！胎牛血清是细胞培养中用量最大的天然培养基,含有丰富的细胞生长必须的营养成份,常用于动物细胞的体外培养,具有极为重要的功能。
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WB蛋白样本煮多久合适？
通常来说，WB 蛋白样本的煮制时间在 3-5 分钟左右。不过，这只是一个大致的范围哦，具体时间还得根据实际情况来调整。通常6孔板细胞80%以上密度，需200ul，其他按平板面积比类推。当样品核酸、蛋白浓度过高时，煮样后会发现枪头吸不上来，非常粘、一砣一砣的，很容易堵住枪头。
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细胞培养操作时，瓶皿管盖朝上还是倒扣？
大家好！今天我们要探讨一个细胞培养中的关键问题：瓶皿管盖朝上还是倒扣？这个看似微小的细节，却牵动着细胞的命运。让我们一同深入了解吧！小伙伴说，朝上；如果放的位置在操作区，朝上有手和外面拿进去的培养基之类的从上面过的，会有污染的风险
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微生物学常用培养基配方大全
1.牛肉膏蛋白胨培养基(培养细菌用)；牛肉膏3g/L，蛋白胨5g/L，NaC1 10 g/L，琼脂1.5~2.0 g/L，pH 7.0~7.2。121℃灭菌20 min。JSENB品牌微生物培养原料一站供应。2.高氏(Gause)1号培养基(培养放线菌用)；可溶性淀粉20 g/L，KNO3 1 g/L，NaCl 0.5 g/L， K2HPO4 0.5 g/L，MgSO4 0.5 g/L
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ELISA样本收集处理方法
用于ELISA实验的样本一般有血清、血浆、尿液、裂解液、唾液、粪便、脑脊液、细胞培养上清以及组织匀浆等。不同样本类型的预处理方法也不同。适当的样本预处理是确保ELISA实验正确性和准确性的第一步。这里，我们将介绍几种不同样本类型的处理方法
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PCR引物设计中的关键点
引物最好在模板cDNA 的保守区内设计--DNA序列的保守区是通过物种间相似序列的比较确定的。在NCBI上搜索不同物种的同一基因，通过序列分析软件（比如DNAman）比对（Alignment），各基因相同的序列就是该基因的保守区
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WB实验中常用的抑制剂及作用原理介绍
蛋白质纯化、提取过程中常受到其本身存在的水解酶的影响。在提取蛋白质的过程中细胞破碎释放出蛋白酶，这些酶在与欲提取的蛋白质接触时，一旦条件适宜，就会发生反应，导致蛋白质分解。因此，在蛋白质提取过程中，需要加人蛋白酶抑制剂以防止蛋白质水解以保持蛋白质的完整性
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酶标仪的工作原理以及和分光光度计的区别
由酶联免疫吸附实验法可知，酶标仪应该用比色法来分析抗原或抗体的含量，即它应依照比色原理进行工作。实际上，酶标仪就是一台变相的光电比色计或分光光度计，其基本工作原理与主要结构和光电比色计几乎相同。图1是一种单通道、自动进样的酶标仪的工作原理图
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PCR扩增的增强剂和抑制剂有哪些？
1. 激活剂：激活剂通过改善聚合酶的活性，让整个PCR过程焕发活力。10~100ug/ml BSA（牛血清白蛋白）就能在某些情况下提升聚合酶的稳定性和活性。2. 保护剂：保护剂的作用在于防止模板DNA降解，确保DNA的完整性。如T4基因32蛋白能保护单链DNA不受核酸酶攻击。
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质粒纯化一定要注意这几点！
同一大肠杆菌母株的质粒产量可能因多种因素而有很大差异。然而，质粒的复制起点将发挥重要作用，因为它将决定每个大肠杆菌细胞的质粒拷贝数 。因此，根据质粒的拷贝数，可能需要扩大质粒制备规模或进行多次质粒制备，以获得足够的质粒DNA供下游应用使用
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培养细胞生长减慢的原因和其解决办法
可能的原因有：1.更换了不同的培养液或血清；2.培养液中一些细胞生长必需成分如谷氨酰胺或生长因子等耗尽或缺乏或已被破坏；3.培养物中有少量细菌或真菌污染；4.试剂保存不当；5.比较新培养液与原培养液成分，比较新血清与旧血清支持细胞生长实验找出可能的原因。
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血清的主要成分和功能
牛血清在细胞培养中对细胞的生长增殖具有重要甚至是难以替代的作用，它含有丰富的细胞生长必须的营养成分。主要有以下成分和功能：A、 血清中的主要物质—蛋白质如白蛋白等具有缓冲细胞培养液酸碱度、维持渗透压的作用。B、 转铁蛋白、甲状腺素结合蛋白等结合蛋白，有识别维生素、脂类、金属和其它激素等，并能与有毒金属和热原质结合，从而起到解毒作用
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细胞传代培养常见问题合集
一般拿到细胞后，应该注意什么？收到细胞先不开盖,用酒精将整个细胞瓶外壁进行消毒，放在培养箱静置若干小时后（看细胞密度而定）在倒置显微镜下观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照（建议收细胞时的培养基拍一张照片，观察培养基的颜色和是否有漏液情况，显微镜下拍细胞100X，200X各两张）
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实验常用试剂的有效期确定及延长方法
化学试剂不像食品和药品有严格的保质期，化学试剂一般没有保质期的具体要求和界限，这与化学试剂的保质期受多方面因素影响有关；要根据化学性质、保存条件等，再结合工作的实际情况判断试剂是否出现变质、能否继续使用
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蛋白质的原核表达与亲和纯化
蛋白纯化是指通过基因工程技术将编码蛋白的核酸序列导入到宿主细胞，使其大量表达，再使用适当的纯化方法将其在体外纯化出来，从而获得高纯度、活性和产量的蛋白质。蛋白质表达系统可以分为原核表达系统和真核表达系统两大类。下面介绍在原核系统中诱导表达蛋白质并使用亲和层析的方法体外纯化蛋白的原理和方法
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二氧化碳培养箱—细胞培养摇篮
一般细胞培养液的pH在7.0-7.4之间。由于碳酸盐pH缓冲系统是一种生理pH缓冲系统（它是人体血液中最重要的pH缓冲系统），所以大多数培养液用它来保持稳定的pH。用粉末配制培养液时，常常需要加入一定量的碳酸氢钠。对大多数以碳酸盐作为pH缓冲系统的培养液而言，以为了维持稳定的pH，培养箱中的二氧化碳需要维持在2-10%之间，以保持培养液中溶解的二氧化碳的浓度
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19个细胞免疫荧光关键点详解
免疫荧光技术是标记免疫技术中发展最早的一种，是在免疫学、生物化学和显微镜技术的基础上建立起来的一项技术，包括荧光抗体法和荧光抗原法，但在实际工作中荧光抗原技术应用较少。细胞免疫荧光染色是免疫荧光技术在细胞中的应用。
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细胞长不好的原因与解答！
1.缩短胰蛋白酶消化时间或降低胰蛋白酶浓度；2.分离培养物，检测支原体。清洁支架或培养箱。如发现支原体污染，丢弃培养物；3.使用无菌醋酸溶液调整pH值或充入无菌CO2；4.启用新的保种细胞；5.调节最佳接种细胞浓度。
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支原体检测与清除攻略
实验过程中，我们的细胞很珍贵，实验试剂也属实不便宜呢，虽说我们现在已经拥有了各种各样的支原体清除和除菌剂产品，但是避免污染的最好方式还是注意实验规范以及定期清洁，为了不给细菌、真菌、支原体卷土重来的机会，最好同时把实验环境中的污染源也一起消灭，最后希望大家的实验都顺顺利利，远离污染
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一文理清免疫荧光实验流程和常见问题
固定液种类：有机溶剂（甲醇、乙醇、丙酮等）；交联剂（4%PFA、10%中性福尔马林），固定液的选择取决于被研究抗原的性质及所用抗体的特性。但针对磷酸化的抗体，不适合用甲醛，会导致磷酸蛋白从膜表面转移到胞浆中，故应选择冰冷的无水甲醇或无水乙醇，同时应注意甲醛会挥发，在4-8°C不宜储存太久
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实验中培养基和玻璃器材灭菌方法解读
干热灭菌一般是利用电热烘箱作为干热灭菌器。前面所包装好的玻璃器皿，如带棉塞的三角瓶，试管、包装好的吸管、培养皿等，放入电热烘箱中。打开烘箱顶部的通气孔，接上电源加热，使箱内空气的温度达到160℃~170℃，关闭通气孔使箱内的温度保持在160℃左右并维持1.5-2h。时间一到，切断电源
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如何优化ELISA实验？
ELISA实验优化过程中应测试许多因素，例如用于包衣的抗原或抗体的浓度、温度、各个步骤的持续时间、包被缓冲液的类型，例如磷酸盐缓冲盐水（PBS）或碳酸盐缓冲液）、样品制备方法（有或没有EDTA、去互补、血清或血浆或整个样品）。平板饱和也是一个需要优化的步骤，例如不同浓度的牛血清白蛋白（BSA）
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你想不到的PCR问题总结
变性对PCR扩增来说相当重要，如变性温度低，变性时间短，极有可能出现假阴性;退火温度过低，可致非特异性扩增而降低特异性扩增效率退火温度过高影响引物与模板的结合而降低PCR扩增效率。有时还有必要用标准的温度计，检测一下扩增仪或水溶锅内的变性、退火和延伸温度，这也是PCR失败的原因之一
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25种实验室常见有毒化学试剂，务必学会应对和处理！
实验室人身安全问题，永远是摆在第一位的。实验室很多试剂是有毒的，而说实话，很多实验室并没有对新人专门培训，都是师兄师姐“传帮带”。实验室有毒的化学试剂可多了，一不小心就在无形中影响了免疫系统、神经系统等，因此留意哪些是“敌人”，以及如何应对非常重要。
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实验室超纯水存放的要求
即取即用：超纯水取水后很容易遭到环境污染，所以使用前取水(即取即用)方式时最合适的。只有把超纯水与环境接触的时间缩到极短，才能够获得纯度极高的超纯水。 存放时间：在配置高纯度的化学试剂时，尽量不要使用长时间储桶中存放的超纯水，因为储桶经长时间使用后，会因杂质、微生物的污染而造成水质的劣化，超纯水像这种水，在使用时已经不再是超纯水。
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荧光定量PCR实验中对照类型介绍
qPCR从样本采集到结果检出有很多的步骤，包括样本采集、样本保存、样本处理、样本检测、数据分析等一系列环节，不同的环节可以选择不同的对照进行监测，对照总体可分为阴性对照与阳性对照两类
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一文带你了解11项细胞因子
细胞因子可被分为白细胞介素、干扰素、肿瘤坏死因子超家族、集落刺激因子、趋化因子、生长因子等。细胞因子在体内通过旁分泌、自分泌或内分泌等方式发挥作用，具有多效性、重叠性、拮抗性、协同性等多种生理特性，形成了十分复杂的细胞因子调节网络，参与人体多种重要的生理功能
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细胞培养基常见问题注意这些就够了！
细胞培养基是细胞培养中不可缺少的营养成分，但是最基础的培养基却给很多实验者带来了一系列的问题。如果细胞状态不好，后续试验将无法进行，甚至前功尽弃。如何选用培养基? 选择培养基没有一定标准，有几点建议可供参考：1. 建立某种细胞株所用的培养基应该是培养这种细胞首选的培养基
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质粒菌株产品操作说明书
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养）①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
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如何判断并预防黑胶虫污染
目前很多细胞存在被“黑胶虫”污染的现象，对细胞培养及其后续实验造成了极大的影响。“黑胶虫”至今无明确定义，其是生物还是非生物？是细菌还是真菌？还是血清中的蛋白结晶？各有说法，且不同人员观察到的形态不一。通过检测发现
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ELISA试剂盒的测试要求
固相载体的选择：许多物质可作为固相载体，如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纤维素等。其形式可以是凹孔平板、试管、珠粒等。目前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何种载体，在使用前均可进行筛选：用等量抗原包被，在同一实验条件下进行反应，观察其显色反应是否均一性，据此判明其吸附性能是否良
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总结ELISA加样方法技巧
在ELISA中除了包被外，一般需进行4-5次加样。在定性测定中有时不强调加样量的准确性，例如规定为加样一滴。此时应该使用相同口径的滴管，保持准确的加样姿势，使每滴液体的体积基本相同。在定量测定中则加样量应力求准确。标本和结合物的稀释液应按规定配制。加样时应将液体加在孔底
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血清说明书——储存、解冻、使用方法
血清在生产制备完成后，通过质量检测，然后被运送至市场上销售。整个过程中，包括运输流程，储存温度应严格保证在-20℃，避免反复冻融影响血清活性。实验人员在收到血清，检查完好后，及时将血清送至-20℃冰箱中储存，用时再取出采用三步法解冻
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培养细胞生长减慢的原因和其解决办法
1.更换了不同的培养液或血清；2.培养液中一些细胞生长必需成分如谷氨酰胺或生长因子等耗尽或缺乏或已被破坏；3.培养物中有少量细菌或真菌污染；4.试剂保存不当；5.比较新培养液与原培养液成分，比较新血清与旧血清支持细胞生长实验找出可能的原因。
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如何避免细胞污染和细胞发生污染处理方法
如何避免细胞污染，细胞污染的种类可分成细菌、酵母菌、霉菌、病毒和霉浆菌。主要的污染原因为无菌操作技术不当、操作室环境不佳、污染之血清和污染之细胞等。严格之无菌操作技术、清洁的环境、与品质良好之细胞来源和培养基配制是减低污染之最好方法。
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培养细胞出现死亡其可能的原因和解决办法
可能的原因:有培养箱内无CO2；培养箱内温度波动太大；细胞冻存或复苏过程中损伤；培养液渗透压不正确；培养液种有毒代谢产物堆积等。解决办法:可以检测培养箱内CO2浓度，检查培养箱内温度；取新的保存细胞种；检测培养液渗透压等；换入新鲜培养液等。
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放置在冰箱中的培养基颜色会发生变化，为什么？
培养基保存于4℃冰箱中，培养基内CO2会逐渐溢出，造成培养基越来越偏碱性。而培养基中酸碱指示剂（通常为 phenolred）的颜色也会随碱性增加而更偏暗红。培养基偏碱后再用于细胞培养将造成细胞生长停滞或死亡。培养基偏碱时，可以通入无菌过滤的CO2，以调整pH值。
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培养细胞时应使用5%还是10%CO2,培养液pH对细胞生长的影响
一般培养基中大都使用HCO3-/CO3-2/H +作为pH的缓冲系统，而培养基中NaHCO3的含量将决定细胞培养时应使用的CO2浓度。当培养基中NaHCO3含量为每公升3.7g时，细胞培养时应使用10%CO2；当培养基中NaHCO3为每公升1.5g时，则应使用5%CO2培养细胞。
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如何消除组织培养的污染
首先，确定污染物是细菌、真菌、支原体或酵母，把污染细胞与其它细胞系隔离开，用实验室消毒剂消毒培养器皿和超净台，检查HEPA过滤器。高浓度的抗生素和抗霉菌素可能对一些细胞系有毒性，因而，做剂量反应实验确定抗生素和抗霉菌素产生毒性的剂量水平。这点在使用抗生素如两性霉素B和抗霉
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6孔细胞培养板接种和换液
问：我的细胞传代很正常，但一种到六孔板里（不管加药和对照），总有两三个孔（随机）细胞长得不好，很小，像破碎了。有人遇到过这种情况吗？到底是啥原因呢？请各位指点。答：可能跟你加液的温度有关。如果你细胞刚刚拿出来换液加液，培养基也是从4度冰箱拿出来不久，很容易细胞就会冻死了
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细胞复苏的操作步骤及注意事项
平时研究用的细胞，有需要冷冻保存。冷冻的过程称为冻存，把冻上的细胞化开的过程叫细胞复苏。细胞复苏是一简单的试验操作，但操作中有许多需要注意的事项，在实验操作中注意细小问题，才能使复苏后的细胞状态保持良好。
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关于IgG的作用，及与IgM的区别
IgG全称Immunoglobulin G，又称免疫球蛋白G。是血清主要的抗体成分，约占血清Ig的75%。其中40～50%分布于血清中。IgG主要由脾、淋巴结中的浆细胞合成和分泌，以单体形式存在。人IgG有四个亚型：IgG1、IgG2、IgG3、IgG4。
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常用细胞固定液及优缺点比较
将纯的丙酮预先放入冰箱-20℃后便为冷丙酮（放心，丙酮在此温度不会为固体的）细胞爬片取出后，PBS洗2遍，便可加入冷丙酮于-20℃（丙酮有很强的挥发性，注意将含有丙酮和爬片的器皿盖严，防止其挥发）固定10分钟。取出后，室温吹干，然后放入-20℃保存。
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HE染色法的原理及步骤
HE 染色法为苏木精-伊红染色法，是石蜡切片技术里常用的染色法之一，也是组织学、胚胎学、病理学教学与科研中最基础、最广泛的技术方法。属性为碱性的苏木素染色液可以使细胞着蓝色，为酸性的伊红使细胞着红色，其结果胞核呈蓝色，胞浆呈红色。
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Hank's与D-Hank's的作用
Hank's液是生物医学实验中最常用的无机盐溶液和平衡盐溶液（Balanced Salt Solution,BSS ）， 主要用于配制培养液，稀释剂和细胞清洗液，而不能单独作为细胞组织培养液。Hank's也称作HBSS，英文全名Hank's Balanced SaltSolution。
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western blot实验注意事项
Western Blot实验又称蛋白质印迹法、免疫印迹试验。Western Blot是分子生物学、生物化学和免疫遗传学中常用的一种实验方法。Western Blot原理是通过特异性抗体对凝胶电泳处理过的细胞或生物组织样品进行着色。
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Masson 三色染色试剂盒染色原理方法
结缔组织狭义上是指其含有的三种纤维：胶原纤维、网状纤维、弹力纤维、而胶原纤维（collagen fiber）是分布最广、含量最多的一种纤维。Masson三色染色是结缔组织染色中最经典的一种方法，是显示组织中纤维的主要方法之一，是胶原纤维染色权威而经典的技术方法。
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TAE缓冲液与TBE缓冲液的作用区别
分子生物学实验中常用的电泳缓冲液主要有三种：TAE、TBE和TPE。TBE与TPE缓冲容量高，DNA分离效果好，但TPE会导致DNA片段回收时含磷酸盐浓度高，容易使DNA沉淀。TAE缓冲容量低，但价格较便宜，TBE缓冲液含有的EDTA可螯合二价阳离子，可抑制DNase活性，防止PCR扩增产物降解。
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链脲佐菌素如何诱导糖尿病动物模型
链脲佐菌素（STZ）是一种氨基葡萄糖-亚硝基脲，是一种DNA烷基化试剂，能通过GLUT2葡萄糖转运蛋白（GLUT2 glucose trasport protein）独自进入细胞。对胰腺胰岛素诱发的β-细胞具毒性。
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BCA蛋白浓度测定试剂盒检测蛋白浓度的原理及特点
BCA(bicinchoninic acid)法蛋白浓度定量试剂盒是在世界上常用的蛋白浓度检测方法之一BCA法基础上改进而成。众所周知，二价铜离子在碱性的条件下，可以被蛋白质还原成一价铜离子（biuret reaction），一价铜离子和独特的BCA Solution A（含有BCA）相互作用产生敏感的颜色反应。
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抗荧光衰减封片剂（含DAPI）和不含DAPI的区别
抗荧光衰减封片剂是一种用于减缓荧光衰减的封片试剂。以甘油为基础，加入抗荧光衰减剂，有强烈的抗荧光衰减作用，用于对荧光组织和细胞样品的封片。封片后，样品4℃或者-20℃避光可保存2-3周。在封片时用移液枪滴一滴抗荧光衰减封片液，盖上盖玻片就可以了。
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细胞冻存液的原理及配制方法
细胞冻存及复苏的基本原则是慢冻快融，实验证明这样可以最大限度的保存细胞活力。目前细胞冻存多采用甘油或二甲基亚砜作保护剂，这两种物质能提高细胞膜对水的通透性，加上缓慢冷冻可使细胞内的水分渗出细胞外，减少细胞内冰晶的形成，从而减少由于冰晶形成造成的细胞损伤。
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教你成为平淡无奇的WB实验小能手—样本制备篇
蛋白质印迹（Western Blot, WB）又称为免疫印迹（Immunoblot），是利用SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）将样品中分子量大小不同的蛋白分开，然后通过电转移的方法将凝胶中的蛋白定量地迁移并几乎原位复制、固定到固相膜上，再利用抗原、抗体的特异性结合反应，特殊的抗体标记技术以及相应的检测方法，进而对目的蛋白进行定性、相对定量检测的技术。
