HuayunRIP™ RIP Assay Kit (Protein A/G琼脂糖)，即HuayunRIP™ RIP Assay Kit (Protein A/G Agarose)、HuayunRIP™ RIP Assay Kit with Protein A/G Agarose或HuayunRIP™ RNA Immunoprecipitation Assay Kit with Protein A/G Agarose，中文名为HuayunRIP™ RNA免疫沉淀检测试剂盒、RNA结合蛋白免疫沉淀试剂盒或RIP检测试剂盒，是一种用于通过免疫沉淀来沉淀和目标蛋白结合的RNA片段，最后通过PCR、qPCR或NGS等方法来检测免疫沉淀所获得的RNA片段的试剂盒。通常用于检测特定的RNA结合蛋白是否和预期的特定RNA在同一复合物中，或检测特定的RNA结合蛋白和哪些RNA结合。

转录水平对于真核生物基因表达至关重要，但mRNA水平并不总是与蛋白质的水平直接相关，这种差异的部分原因是mRNA的转录后调控[1]。转录后调控的关键是RNA结合蛋白(RNA-binding protein, RBP)及其相关mRNA靶标的相互作用，RBP通过与mRNA靶标形成核糖核蛋白(Ribonucleoprotein, RNP)复合体来影响mRNA的定位、修饰、稳定性和翻译水平[2]。研究发现，随着原核生物向真核生物的进化和核膜的发育，RBP的数量显著增加，转录后的基因表达研究往往集中于RBP。从RNP的复合物中识别这些未知的mRNA靶标对于理解RBP的机制和功能及其对蛋白质表达水平的影响至关重要。此外，RNA结合的蛋白不仅仅是mRNA，还包含各种非编码RNA例如长链非编码RNA (Long non-coding RNA, lncRNA)和小RNA (Small RNA, sRNA)等。染色质免疫沉淀(Chromatin Immunoprecipitation, ChIP)可用于检测细胞内DNA结合蛋白结合的DNA靶标。与之类似，RNA免疫沉淀(RNA Immunoprecipitation, RIP)可用于检测细胞内RNA结合蛋白结合的RNA靶标。通过RBP的特异性抗体免疫沉淀RNP复合体，然后分离纯化在RNP复合物中的RNA，再通过qRT-PCR或高通量测序等方法检测相应的RNA (图1)。RIP检测有助于了解蛋白和RNA的相互作用，探索转录后基因表达调控的深入的分子机制。

图1.华韵HuayunRIP™ RIP Assay Kit (Protein A/G琼脂糖) (P1801)工作原理图。

HuayunRIP™ RIP Assay Kit (Protein A/G琼脂糖)采用了Protein A/G Agarose，比Protein A Agarose或Protein G Agarose适合于免疫沉淀更多种类的抗体，包括mouse IgG1, IgG2a, IgG2b, IgG3, IgA, rat IgG1, IgG2a, IgG2b, IgG2c, rabbit IgG, rabbit and goat polyclonal Abs，以及human IgG1, IgG2, IgG3和IgG4。

HuayunRIP™ RIP Assay Kit (Protein A/G琼脂糖)提供了RIP实验所需所有试剂，其中，RIP级别的Protein A/G Agarose由Protein A/G共价连接到4%的高交联度、高流速琼脂糖(cross-linked, 4% Agarose, Fast Flow)上，每毫升Protein A/G agarose beads (沉淀物)可以结合超过25mg human IgG；蛋白酶和核糖核酸酶抑制剂，包括PMSF、RNase Inhibitor，可用于保护RNP复合体在免疫沉淀过程中不被降解；RNA纯化试剂盒如RNAeasy™动物RNA抽提试剂盒(离心柱式) (R0027)或Huayunzol (R0011)，RNA反转录与定量检测试剂盒HuayunRT™ Q cDNA第一链合成试剂盒(D7190)和HuayunFast™ SYBR Green qPCR Mix (2X) (D7501/D7503/D7507/D7260/D7262/D7265)可以向华韵单独订购。

本试剂盒用于HuayunRIP™ Antibody and Primer Pair Kit for HuR RIP Assay (P1821)的免疫沉淀效果参考图2。

图2.华韵HuayunRIP™ RIP Assay Kit (Protein A/G琼脂糖) (P1801)用于HuayunRIP™ Antibody and Primer Pair Kit for HuR RIP Assay (P1821)的免疫沉淀效果图。HeLa细胞(每个免疫沉淀相当于150万个细胞量)制备成RIP裂解物，用5µg阴性对照IgG和5µg HuR抗体(RIP阳性对照)进行免疫沉淀，HuR抗体相对于阴性对照IgG的RNA富集程度通过本说明后附的2-ΔΔCt公式计算获得。实际结果会因实验条件、检测仪器等的不同而存在差异，图中数据仅供参考。

本HuayunRIP™ RIP Assay Kit (Protein A/G琼脂糖)如果用于常规的RNA免疫沉淀，共可以免疫沉淀22个样品。