Annexin V-PE细胞凋亡检测试剂盒(Annexin V-PE Apoptosis Detection Kit)是用藻红蛋白(Phycoerythrin, 简称PE)标记的重组人Annexin V来检测细胞凋亡时出现在细胞膜表面的磷酯酰丝氨酸的一种细胞凋亡检测试剂盒。可以使用流式细胞仪、荧光显微镜或其它荧光检测设备进行检测。
本试剂盒检测的是红色荧光,因此在待检测的细胞已经表达GFP等绿色荧光蛋白的情况下,特别适合使用本试剂盒检测细胞凋亡。PE可以被495nm、545或564nm的激发光所激发,发出峰值为575nm的荧光。(参考图1)

图1.Phycoerythrin的荧光光谱
Annexin是一类广泛分布于真核细胞细胞浆内钙离子依赖的磷酯结合蛋白,参与细胞内的信号转导。但仅Annexin V被报道可以调控一些PKC的活性。
Annexin V选择性结合磷酯酰丝氨酸(phosphatidylserine,简称PS)。磷酯酰丝氨酸主要分布在细胞膜内侧,即与细胞浆相邻的一侧。在细胞发生凋亡的早期,不同类型的细胞都会把磷酯酰丝氨酸外翻到细胞表面,即细胞膜外侧。磷酯酰丝氨酸暴露到细胞表面后会促进凝血和炎症反应。而Annexin V和外翻到细胞表面的磷酯酰丝氨酸结合后可以阻断磷酯酰丝氨酸的促凝血和促炎症反应活性。对于坏死细胞,由于细胞膜的完整性已经丧失,Annexin V-PE可以进入到细胞浆内,与位于细胞膜内侧的磷脂酰丝氨酸结合,从而也使坏死细胞呈现红色荧光。
用带有红色荧光的荧光探针PE标记的Annexin V,即Annexin V-PE,就可以用流式细胞仪或荧光显微镜非常简单而直接地检测到磷酯酰丝氨酸的外翻这一细胞凋亡的重要特征。
正常细胞不会被Annexin V-PE所染色,凋亡细胞和坏死细胞都会被Annexin V-PE所染色。如果希望进一步区分凋亡和坏死细胞,可以使用其它细胞凋亡检测试剂盒(如C1062 Annexin V-FITC细胞凋亡检测试剂盒)进行检测。使用本试剂盒检测细胞凋亡的效果参考图2。
图2. Annexin V-PE细胞凋亡检测试剂盒的检测效果图。Jurkat细胞(人T淋巴细胞瘤细胞)不处理或用50μM Camptothecin处理3小时后,使用本产品和Hoechst 33342进行染色。正常情况下几乎所有Jurkat细胞呈Annexin V-PE阴性,只有极少数的凋亡或坏死细胞呈现红色荧光(图B, D);使用50μM Camptothecin处理Jurkat细胞3小时,大多数细胞呈Annexin V-PE阳性,凋亡细胞的细胞膜被染成明亮的红色荧光(图F, H)。蓝色荧光为Hoechst 33342标记的所有细胞的细胞核(图C, G)。本试剂盒中不提供Hoechst 33342,如有需要,可向华韵订购C1028 Hoechst 33342活细胞染色液(100X)等。实际结果会因实验条件、检测仪器等的不同而存在差异,图中数据仅供参考。
本试剂盒小包装C1065S可以检测20个样品,中包装C1065M可以检测50个样品,大包装C1065L可以检测100个样品。