华韵生产的吖啶橙染色试剂盒(Acridine Orange Staining Kit)是一种高效、便捷、灵敏的通过吖啶橙染色液对细胞中DNA和RNA进行荧光染色的试剂盒,可用于区别正常细胞、凋亡细胞及坏死细胞。本试剂盒可以使用荧光显微镜进行荧光成像检测,也可以使用流式细胞仪或荧光酶标仪进行荧光的定量检测。
吖啶橙(Acridine Orange, AO),是一种常用的三环芳香类阳离子型碱性荧光染料,其盐酸盐的CAS号为65-61-2,分子量为301.81,可以染色和标记DNA、RNA。吖啶橙具有膜通透性,能透过细胞膜,使DNA和RNA染色,因此吖啶橙常用于细胞内DNA和RNA的检测。吖啶橙以插入的形式与DNA双链结合,此时其荧光发射峰为530nm,激发后呈绿色荧光;吖啶橙也可以离子相互作用和染料堆积的形式与RNA或单链DNA结合,此时其荧光发射峰为640nm,激发后呈红色荧光[1]。吖啶橙也可以通过pH依赖性方式进入酸性细胞器如溶酶体中,从而用于自噬的研究,但其染色缺乏特异性[2]。
吖啶橙染色常应用于细胞凋亡的检测。吖啶橙可透过正常细胞膜,经染色后在荧光显微镜下观察,正常细胞的细胞核呈正常的绿色或黄绿色荧光;而在凋亡细胞中,因染色质固缩或断裂为大小不等的片断,吖啶橙使其染色呈现致密浓染的黄绿色荧光或黄绿色碎片颗粒;而坏死细胞荧光减弱甚至消失。吖啶橙染色常与碘化丙啶(Propidium Iodide, PI)联合使用,碘化丙啶是一种核酸红色荧光染料,只能染色细胞膜完整性丧失的坏死细胞,并与核酸结合发出明亮的红色荧光,由此可区分出正常细胞、凋亡细胞及坏死细胞[3]。
本试剂盒着色清晰,使用方便。HeLa细胞使用本试剂盒的染色效果参考图1。
图1. 华韵的吖啶橙染色试剂盒(C0233S)用于HeLa细胞的染色效果图。如图所示,正常HeLa细胞的细胞核被染成绿色荧光。实际染色效果会因样品、检测条件的不同而存在差异,本图仅供参考。
对于96孔板中的样品,按照每孔使用100μl吖啶橙染色液计算,本试剂盒的小包装和中包装分别可以进行1000次和5000次检测;如果用于流式细胞仪检测,按照每个样品的检测体系体积为0.5ml时,本试剂盒的小包装和中包装分别可以进行200次和1000次检测;对于6孔板中的贴壁培养细胞样品,按照每孔使用1ml吖啶橙染色液计算,本试剂盒的小包装和中包装分别可以进行100次和500次检测。