2024/11/27 10:41:00

一、储存温度对样本的影响
生物样本的长期储存,通常使用尽可能低的温度来降低样本内的生化反应,以提高样本内各种成分的稳定性。生物大分子、细胞、组织和器官的常用储存温度为-80°C(超低温冰箱)、-140°C(液氮气相或深冷冰箱)及-196°C(液氮液相),温度越低样本的稳定保存时间越长。
不同温度对生物样本的影响和保护作用
1、-60~0°C储存
此温度是水的结晶温度,容易对细胞和组织的微观结构造成损害,一般不使用这一温度来保存组织和细胞。且在组织样本内生物大分子受到细胞组织内多种因素的影响,稳定性有可能明显降低,所以通常样本库不使用-60~0°C作为储存温度。
2、-80°C储存
-80°C是较常用的样本保存温度,也是常用超低温冰箱所能达到的温度。基于操作简便性、储存量和成本等因素来考量,这一温度也是目前保存样本中生物大分子活性的常用温度。但对不同的生物大分子活性来说,这一温度下到底能保持多久的问题仍然处于研究探索中。
3、-140°C储存
-140°C是低于水的玻璃化温度(-136°C),也是气相液氮罐和深冷冰箱所能达到的温度,样本在这一低温范围内生物学活动极大降低,是保存样本中细胞活性的理想温度。深冷冰箱是电制冷,无需液氮,装满样本后的稳定温度通常在-140°C以下,和使用气相液氮罐相比,其优势在于不需频繁添加液氮,维护方便。但电制冷的降温速度低于液氮,一旦开启容器取放样本时容易造成较大范围的温度波4、

4、-196°C储存
-196°C是液氮挥发的温度,所以只有液氮液相保存技术能达到此温度。样本内的生理、生化活动在此温度下基本停止,稳定性状的样本可以得到长期保存。液氮保存是长期保存样本内细胞活性、组织器官的复杂结构及活性的最有效方法,已广为接受与认可。与其他不同温度冷冻模式相比,液氮容器液相储存样本需要做好防护样本间的交叉污染。

 

二、常见样本储存温度的选择
选择储存温度应考虑样本的类型、预期储存的时间、样本中生物分子的特性、不同细胞的特性。细菌和细胞的活性临界温度通常认为是-140°C,在这个温度下,所有的代谢活动都停止,对于能承受在此温度下保存的样本,建议选择低于这个温度进行储存,利于长期稳定的储存。一些样本不能承受这么低的温度,它们的储存温度一般选择-80°C,在此温度下,代谢活动并没有完全停止。另外,一些经过特殊处理的样本,则可在低温和室温条件下储存。
1、固体组织样本的储存温度:
长期储存的新鲜冰冻组织和 OCT包埋冰冻组织应储存于液氮中,冰冻组织切片或者用于DNA 和 RNA 提取的冰冻组织应储存在-80°C。经过福尔马林固定的石蜡包埋组织及组织切片应储存在室温,在低于 27°C的环境下,并控制虫患和湿度。
2、液体样本的储存温度:
对于液体样本,包括血液和尿液,样本里的各种成分应在储存前分离,使得每一种成分能够在最佳条件下储存。全血、血清、血凝块、非淋巴细胞和血浆样本应储存在-80°C。血沉棕黄层和白细胞应储存在液氮中。尿液应储存在-80°C或者液氮中。
3、细胞的储存温度:
长期保存的细胞系应储存在液氮中。气相液氮比液相液氮储存样本更好。虽然液相液氮的温度更低一些(-196°C),但气相液氮的温度(-150°C)仍在临界温度之下。对于需要但没有条件使用液氮保存的细胞样本,应至少储存-80°C环境中。

 

三、样本的冻存和取用
样本储存在稳定的条件下,应避免反复冻融。样本反复冻融会加快生物大分子物质的降解,严重影响样本的质量。

样本在冻存前,最好分装成小份样本再储存,可以避免不必要的反复

 

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