ELISA(enzyme-linked immunosorbent assay酶联免疫吸附测定法）是免疫学中的经典实验。ELISA的基础是抗原的固相化及抗体的酶标记。结合在固相载体表面的抗原仍保持其免疫学活性，酶标记的抗体既保留其免疫学活性，又保留酶的活性。
在检测时，受检标本（测定其中的抗原）与固相载体表面的抗体反应。洗涤后加入酶标记的抗体，通过反应结合在固相载体上。加入酶反应的底物后，底物被酶催化成为有色产物，产物的量与标本中受检物质的量直接相关，可根据呈色的深浅进行定性或定量分析。
由于酶的催化效率很高，间接地放大了免疫反应的结果，使测定方法达到很高的敏感度。
一、ELISA样本的处理
ELISA检测的目的是为实验提供准确可靠的定量分析实验依据。为了保证实验数据的可靠性，在实验过程中必须坚持全面质量控制和全过程质量控制。在收集标本前都必须有一个完整的计划。
注意事项
1. 每个标本量收集体积＝ 100ul × 检测种类，如要做复孔，标本量收集体积＝100ul ×检测种类×2 。
2.对于作某一个具体指标来说，最好先用一系列稀释度作一批标本测定，得出对实验有意义的一个稀释度（即测定剂量反应曲线），然后用一个最适稀释度测定即可。
3.收集标本前必须清楚要检测的成份是否足够稳定。对收集后当天进行检测的标本，储存在 4 ℃ 备用，如有特殊原因需要周期收集标本，将标本及时分装后放在 -20 ℃ 或 -70 ℃ 条件下保存。避免反复冻融。标本 2 -8 ℃ 可保存 48 小时， -20 ℃ 可保存 1 个月。-70 度可保存 6 个月。部分激素类标本需添加抑肽酶。
4.血清标本采集时，应注意避免溶血，红细胞溶解时会释放出具有过氧化物酶活性的物质，以HRP为标记的ELISA测定中，溶血标本可能会增加非特异性显色。
5.为了保证尿液检测结果的准确性，必须正确收集尿液标本和保存。盛尿容器要清洁干燥。最好使用一次性的容器（如塑料尿杯），避免因用药并清洗不干净而造成的污染，影响检测结果。尿液标本必须新鲜，留取后，应及时检测或保存，以免细菌繁殖。因在室温中久置后（尤其是夏季）尿中磷酸盐等可析出结晶而干扰检测。
6.标本宜在新鲜时检测。如有细菌污染，菌体中可能含有内源性HRP，也会产生假阳性反
应。保存过久可发生聚合在ELISA中可使本底加深。
7.结标本融解后，蛋白质局部浓缩，分布不均，应充分混匀宜轻缓，避免气泡，可上下颠倒混和，不要在混匀器上强烈振荡。
8.混浊或有沉淀的标本应先离心或过滤，澄清后再检测。
9.反复冻融会使蛋白效价降低，所以待测标本如需保存作多次检测，宜少量分装冻存。
二、标本类型
ELISA常见标本
1.液体类标本：包括血清、血浆、尿液、胸腹水、脑脊液、细胞培养上清等。
2.培养细胞
3.组织标本
标本的保存
1.一般说来，在5天内测定的标本可放置于4℃，超过一周测定的需低温冻存。
2.对收集后当天进行检测的标本，储存在 4 ℃ 备用，如有特殊原因需要周期收集标本，将标本及时分装后放在 -20 ℃ 或 -70 ℃ 条件下保存。避免反复冻融。
3.标本 2 -8 ℃ 可保存 48 小时， -20 ℃ 可保存 1 个月。-70 度可保存 6 个月。部分标本也可加入适当防腐剂，激素类标本需添加抑肽酶。
标本的处理
可用作ELISA测定的标本十分广泛，体液（如血清）、分泌物（唾液）和排泄物（如尿液）、细胞培养上清、细胞、组织等均可作标本以测定其中某种成份。有些标本可直接进行测定，有些则需经预处理。
1.血清
室温血液自然凝固 10-20 分钟后，离心 20 分钟左右（ 2000-3000 转 / 分）。收集上清。如有沉淀形成，应再次离心。
2.血浆
应根据试剂盒的要求选择 EDTA 、柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂，加入 10 ％（ v/v ）抗凝剂 ( 0.1M 柠檬酸钠或 1% heparin 或 2.0%EDTA.Na2) 混合 10-20 分钟后，离心 20 分钟左右（ 2000-3000 转 / 分）。仔细收集上清。如有沉淀形 成，应再次离心。
3.尿液、胸腹水、脑脊液
用无菌管收集。离心 20 分钟左右（ 2000-3000 转 / 分）。仔细收集上清。如有沉淀形成，应再次离心。
4.细胞培养上清
检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心 20 分钟左右（ 2000-3000 转 / 分）。仔细收集上清。检测细胞内的 成份时，用 PBS （ PH7.2-7.4 ）稀释细胞悬液，细胞浓度达到 100 万 /ml 左右。通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心 20 分钟左右（ 2000-3000 转 / 分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
5.细胞
检测细胞的成份时，对于贴壁细胞，去除培养液，用PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍。加入适量裂解液。用枪吹打数下，使裂解液和细胞充分接触。通常裂解液接触细胞10 秒后，细胞就会被裂解。对于悬浮细胞，离心收集细胞，用PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍.加入适量裂解液, 用枪吹打把细胞吹散。用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多，必需分装然后再裂解。充分裂解后，10000-14000g离心3-5 分钟，取上清，即可进行后续操作。
6.组织标本
切割标本后，称取重量。加入一定量的 PBS或组织蛋白萃取试剂，缓冲液中可加入蛋白酶抑制剂。用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心 20 分钟左右（ 2000-3000 转 / 分）。仔细收集上清置于 -20 度或 - 70 度保存，如有必要，可以将样品浓缩干燥。分装后一份待检测，其余冷冻备用。
