2024/11/12 11:30:00

一、考马斯亮蓝染色液的配制
1.准备500 mL的玻璃烧杯、500 mL的蓝盖瓶、500 mL、100 mL和200 mL的量筒,并将它们取至配液室。

2.按照操作规程,称取考马斯亮蓝染色液R250:0.5 g,在玻璃烧杯中配制。用200 mL量筒量取125 mL异丙醇,用100 mL量筒量取50 mL冰醋酸,加入烧杯中。同时用500 mL量筒取300 mL工艺用水并加入混合物中。

3. 在配制好的混合物中加入磁力搅拌器转子,转速设定为500rpm,搅拌至溶质充分溶解,溶液变得澄清无固体颗粒。

4. 用工艺用水补足烧杯中的混合液至500 mL的刻度,并充分混合均匀。

5.在灭菌室的通风橱内,使用漏斗和滤纸进行常压过滤。将过滤后的溶液倒入500 mL蓝盖瓶中,并在常温条件下保存。

 

 

二、5X蛋白电泳缓冲液的配制

1.准备1L的玻璃烧杯、1L的棕色蓝盖瓶、1L的量筒,并将它们取至配液室。

2.按照《电子天平标准操作规程》,称取94.0 g Glycine;按照《分析天平标准操作规程》,称取15.1 g Tris 和5.0 g SDS,将它们置于1L玻璃烧杯中。用1L量筒量取700 mL工艺用水倒入烧杯中。

3. 加入磁力搅拌器转子,按照《磁力搅拌器标准操作规程》设置转速为500rpm。搅拌直至溶质充分溶解,溶液变得澄清无固体颗粒。

4.用工艺用水补足烧杯中的溶液至1L刻度线。

5.按照《真空抽滤装置标准操作规程》选择0.45μm的滤膜规格进行溶液过滤。将过滤好的溶液倒入1L棕色蓝盖瓶中,并置于灭菌室中常温保存。

 

三、5X蛋白电泳上样缓冲液的配制

1.从灭菌室取来50mL离心管和1.5 mL的EP管到配液室进行准备。确保工作环境清洁,避免污染。

2.按照标准操作规程准确称取所需试剂:SDS 2 g、溴酚蓝 100 mg、1.0 M Tris-HCl (pH 6.8) 5 mL、甘油 10 mL,并放入50 mL离心管中。

3.使用移液枪吸取10 mL工艺用水加入离心管中,上下摇晃直至溶质充分溶解,确保溶液澄清无固体沉淀。

4.在50 mL离心管中用工艺用水补足至20 mL刻度,并混合均匀,确保溶液浓度均匀。

5.将配制好的溶液分装至1.5 mL EP管中,每管1 mL,存放于配液室冰箱中(-20℃)保存。在使用前,每管加入50 μL β-巯基乙醇。

 

四、30%Acr-Bis溶液(丙烯酰胺-甲叉双丙烯酰胺))的配制
1.从灭菌室取来50mL离心管和1.5 mL的EP管到配液室,确保操作台面清洁。

2.按照《电子天平标准操作规程》,准确称取所需试剂:SDS 2 g、溴酚蓝 100 mg、1.0 M Tris-HCl (pH 6.8) 5 mL、甘油 10 mL,分别放入50 mL离心管中。

3.使用移液器吸取10 mL工艺用水加入离心管中,上下摇晃混合溶液,直至溶质充分溶解,确保溶液无固体沉淀。

4.补充工艺用水至50mL离心管20 mL刻度,并充分混合均匀。

5.将配制好的30% Acr-Bis溶液分装至1.5 mL EP管中,每管1 mL。将EP管置于配液室冰箱中(-20℃)保存。使用前为每管加入50 μL β-巯基乙醇。

 

 

五、10%SDS溶液的配制
1.在器具存放室中取出100 mL的玻璃烧杯和100 mL的量筒。按照标准操作规程,称取10克SDS并置入玻璃烧杯中。

2.用100 mL量筒量取80 mL工艺用水倒入玻璃烧杯中,充分溶解后再用工艺用水补足至100 mL刻度线。

3.选择0.45μm的滤膜规格,将溶液过滤后倒入100 mL的蓝盖瓶中。

4.将蓝盖瓶放置于灭菌室通风橱下方的柜子中,常温保存。

 

 

六、10%APS溶液的配制
1.称取1克APS并将其置于15 mL离心管中。

2.使用移液器抽取8 mL纯化水,将其完全溶解APS后再定容至10 mL。需要注意的是,过硫酸铵溶液(AP10%)在室温下不稳定,因此最好将其保存在4℃的环境中,可以保存1周;或者在-20℃条件下保存,可以保存3个月。

 

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