一、引言

石蜡包埋是一项关键技术，用于组织样本的长期保存和制备，通过创建稳定的组织块，便于后续组织病理学和免疫组织化学分析。此方法因其能精细保存组织结构和支持多次切片而成为病理学实验室的常用选择。石蜡包埋提供了出色的样本稳定性，有助于更长时间地保持组织标本的完整性和信息性。

二、材料与设备准备

1.样品采集：组织样本采集是石蜡包埋的第一步，其质量直接影响实验结果。选取目标组织需用锋利的手术刀切割，以避免组织损伤。采集后立即放入冷却的生理盐水中以保持样本新鲜，以备及时固定。

2.主要试剂与耗材：

固定剂：福尔马林广泛用作常用固定剂，通常采用10%的中性缓冲福尔马林（NBF），确保样本及时浸没，固定时间一般为24-48小时。

脱水剂：需要梯度浓度的乙醇（70%、85%、95%、100%），用于逐步去除组织中的水分。

石蜡：选用高纯度石蜡，因其均匀粘度能有效浸透样本。

3.设备一览：

包埋盒：用于固定组织块并确保其形状规则。

包埋机：实现精确控温，是石蜡浸泡及包埋的核心设备。

脱水机：帮助完成梯度脱水过程。

三、组织固定与脱水

1.固定步骤： 选择10% NBF确保固定的充分和均匀性。小样本需完全浸入固定液中，更换新鲜固定液以防止固定效果减弱。避免过度固定，以防组织分子结构密集影响后续处理。

2.脱水流程：依次将固定的样本放入70%、85%、95%和100%的乙醇中，每次浸泡时间约为1-2小时。浓度梯度的合理应用有助于稳步去除水分而不损害组织结构。最后一次100%乙醇处理时间稍长，以确保完全脱水。

四、组织浸蜡与包埋

1.浸蜡步骤：置于溶解石蜡中的脱水样本，通过渗透，使蜡完全替代乙醇。在恒温约60℃的包埋机内，浸泡时间视组织大小而定，通常需要2-4小时。控制温度是关键，过高会损伤组织、过低可能导致浸润不良。

2.包埋操作：选择适当尺寸的包埋盒，将浸透石蜡的样本置于其中，所附方向应有利于后续切片。用液态石蜡填满包埋盒，并迅速冷却至固化，以确保样本被完好固定。确保样本面平整，避免大小不均影响切片质量。

五、切片与后续处理

1.切片准备：选择切片刀时，务必选择高硬度和高锋利度的刀锋，以确保切片顺利和光滑。调整切片机时，常用的切片厚度为4-6微米，这是免疫组化和常规病理分析的理想范围。为了防止切片过程中样本的损坏，确保刀与样本面之间的角度为3-8度。适当的角度和已磨好的刀锋能避免切片出现折叠或撕裂。

2.贴片与保存：将切片转移至载玻片时，需用温水漂浮法使切片舒展，自然附着。之后应快速将切片固定至预热至40℃的载玻片上，以确保其平整。保存条件亦是实现样本长效保存的关键，切片应存放在低湿度、防尘的环境，避光以防样本降解。玻片上用石蜡章标记样本的重要信息，是保证样本长期完整开放的核心步骤之一。

六、常见问题与解决方案

问题排查：

1.组织重叠：通常由过分拥塞或操作不当引起，这会影响到样本观察的准确性。

2.切片翘曲：这常发生在切片厚太薄或样本固定不佳时。

3.故障排除技巧：对于组织重叠，需调整石蜡包埋的姿势，确保样本放置平稳，或者重新浸蜡以避免过度压缩。切片翘曲问题则需检验样本固定是否充分，必要时重新脱水及浸蜡，以保证切片均匀一致。对于以上两种问题，适当润湿样本并控制适度的切片速度能有效改善。

七、总结

石蜡包埋的质量直接关系后续实验的成功与否，因此，保持良好的样本处理、固定、脱水及浸蜡的工序是至关重要的。

在每个步骤中，精准操作和细致调控都不容忽视。技术熟练加上用心，方能确保最终切片的成功与准确。