验证质粒是否构建成功的方法有两种：
1.一种是通过qPCR检测目的基因的表达量；
2.另一种是通过WB检测转染质粒后蛋白水平
一.qPCR进行质粒效率验证
步骤：
1.将质粒转染进入293T或者其他细胞，转染后48h可以进行qPCR检测
2.使用Trizol进行细胞RNA的提取,RNA浓度及纯度的测定
3.将RNA反转录为cDNA
4.qPCR检测目的基因的表达水平
注意：由于qPCR需要以内参基因作为对照来分析基因表达，因此选择合适的内参基因非常重要。常用的内参有18s RNA、β-actin、Gapdh、α-tubulin和β-tubulin。通过测定目标基因的mRNA水平，可以评估质粒是否成功地使目标基因转录。
二.蛋白水平的检测
WB检测步骤：
1.细胞培养与蛋白提取：质粒转染72h后提取细胞蛋白；为确保后续实验中使用的蛋白质量一致，需要使用如BCA或Bradford方法来测定蛋白提取物的浓度。
2.SDS-PAGE凝胶电泳：将蛋白提取物与蛋白负载缓冲液混合，然后加入到SDS-PAGE凝胶槽中进行电泳。蛋白质会根据其大小和电荷在凝胶中形成不同的条带。
3.转膜：将凝胶中的蛋白质转移到膜上，这通常是通过半湿式或全湿式转印方法完成的。
4.抗体孵育：转膜后，使用5%脱脂牛奶封闭非特异性结合位点。然后加入特异性的第一抗体，4℃孵育过夜。次日加入标记的二抗进行孵育。
5.显影与分析：最后，加入ECL显色液使膜上的蛋白质产生发光反应，通过对照组与实验组分析条带的强度和位置，可以评估质粒的表达效率。
