TT是一种常用于细胞活力检测和细胞毒性实验的试剂，其全称为3-(4,5-二甲基噻唑-2-基)-2,5-二苯基四氮唑溴盐。MTT实验的原理是活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能够将MTT还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲瓒（Formazan），而死细胞则没有这种能力。通过测量甲瓒的吸光度，可以间接反映活细胞的数量。
MTT 溶液的配制方法
通常，此法中的MTT 浓度为5mg/ml。因此，可以称取MTT 0.5克，溶于100 ml的磷酸缓冲液（PBS）或无酚红的培养基中，用0.22μm滤膜过滤以除去溶液里的细菌，放4℃ 避光保存即可。在配制和保存的过程中，容器最好用铝箔纸包住。
步骤：
1 细胞株用相应的细胞培养液传代培养至对数生长期(至少传两代，每代生长至80% confluence)，经胰酶-EDTA液消化，调整细胞终浓度为5×103 --5×104 /ml，接种于96孔板中，每孔200μl。查看每孔细胞是否均匀分布。
2 于37℃、5%CO2 培养箱中培养24 h后，弃去板上各孔内原有液体，分别换上190ul培养液，再10ul样品，各种样品设5个平行孔。与试验平行不加细胞只加培养液的空白对照，其他试验步骤保持一致，最后比色以空白调零。
3 48h后，每孔加入浓度为5mg/ml的MTT溶液20μl。继续温孵4 h后，弃去96孔板上各孔中原有液体，每孔再加入DMSO 150μl以溶解formazan沉淀。
4 室温下放置0.5 h后，在脱色摇床上振荡10分钟，用酶标仪在490 nm波长下测定各孔的吸光值。
5 按下式计算细胞生长的抑制率：细胞生长抑制率（%）=（对照组吸光值-实验组吸光值）/（对照组吸光值）×100%。
实验注意事项
1. MTT结晶形成的量与活细胞数成正比，但吸光度最好控制在0-0.7范围内以保证结果的线性。
2.MTT应现用现配，过滤后4℃避光保存，有效期两周，或配制成5mg/ml在-20℃长期保存，避免反复冻融。
3.MTT有致癌性，操作时应小心，并使用无菌技术。
4.配制MTT时，可以使用PBS或生理盐水，可能需要60℃水浴助溶。
5.操作过程中，应避免光照以防止MTT分解。
