外泌体提取试剂(细胞培养基上清)Exosome Isolation Reagent from Cell Culture Media

产品编号 HYW0320
产品分类 热销产品
品牌 华韵生物
规格 50ml
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华韵生物 HYW0320 50ml ¥8125.00
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产品简介:

外泌体(Exosome)是由活细胞分泌的直径约为 30-150 nm 的小囊泡,具有典型的脂质双分子层结构,存在于细胞培养上清液、血清、血浆、唾液、尿液、羊水以及其它生物体液中。外泌体被认为是特定细胞间效应物及信号大分子传递的信使,然而,人们对外泌体的形成,组成成分及所参与的生物学过程仍不完全清楚。对外泌体功能及转运机制进行生物学研究,需要研究者首先能够分离、提取出完整的外泌体, 但目前所使用的提取方法复杂繁琐, 且特异性不高。

外泌体提取试剂(细胞培养基上清)提供了一种从细胞培养液样品中浓缩、分离完整外泌体的简单且可靠的方法。通过试剂中的亲水性基团锁住样品中的水分子,迫使外泌体从细胞培养液样品中分离出来,然后通过短暂低速离心来收集总外泌体。

 

操作提示:

由于细胞培养常规所用的胎牛血清(FBS)本身含有较高含量的外泌体,为了确保所分离的外泌体来源于你感兴趣的目的细胞,建议使用无外泌体胎牛血清(FBS)培养目的细胞,否则会导致所收集的细胞来源外泌体掺入胎牛血清外泌体,出现污染现象。若无法获得无外泌体胎牛血清,一些细胞系也可采用无血清培养的方式培养长达 12 小时,即可避免外泌体污染现象。

 

使用方法(仅供参考):

1.收集细胞培养上清液,3000xg 离心 15 分钟以去除上清液中的细胞及细胞碎片。

2.取上清转移至新的洁净 EP 管中,切记不要搅动上清液中的团状沉淀物。

3.向步骤2中所收集的不含细胞的细胞培养上清液中加入0.5 倍体积的外泌体提取试剂(如:1 mL细胞培养上清液中加入 0.5 mL 外泌体提取试剂;10 mL 细胞培养上清液中加入 5 mL 外泌体提取试剂)。

4.轻摇或涡旋混匀细胞培养上清液/外泌体提取试剂混合物,直至成为均质溶液,4℃孵育过夜。

5.完成步骤 4 后,将样品置于 4℃,10000xg 离心 30 分钟。

6.吸弃上清液,EP 管底部的米色或白色沉淀物即含有外泌体(大部分情况下肉眼不可见)。

7.用适量 PBS 缓冲液或同类缓冲液重悬沉淀物(如:1 mL 细胞培养上清液所得外泌体沉淀物,重悬体积为:25-100 µL;10mL 细胞培养上清液所得外泌体沉淀物,重悬体积为:100-1000 µL)

8.沉淀物被重悬后,所获得的总外泌体即可用于下游分析鉴定实验,或进一步纯化总外泌体。分离提取获得的总外泌体可于 4℃保存长达 1 周,-20℃长期保存。

 

注意事项:

1、本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品。

2、为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

 

保存条件:

4℃保存,一年有效。

 

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