华韵生产的HuayunMag™ Anti-HA Magnetic Beads,即Anti-HA磁珠,也称Anti-HA免疫磁珠或HA抗体磁珠,是由高品质的HA小鼠单克隆抗体与纳米级氨基磁珠共价偶联而成,可特异性地与动植物或微生物裂解液、血清、腹水等中含有HA标签的蛋白结合,从而用于带有HA标签的融合蛋白或其蛋白复合物的免疫沉淀(Immunoprecipitation, IP)、免疫共沉淀(Co-IP)或纯化。
HA标签(HA-tag)、Flag标签(Flag-tag)、Myc标签(Myc-tag)、 His标签(His-tag)和GST标签(GST-tag)等是表达载体上最常见的一些标签,通过与这些标签的融合表达可以非常方便地检测目的蛋白及与目的蛋白相互结合的蛋白,也可以非常方便地用于目的蛋白的纯化。
HA-tag是9个氨基酸残基(YPYDVPDYA)组成的多肽,源于人流行性感冒病毒血凝素(influenza virus hemagglutinin)的98-106位氨基酸序列,所以称为HA多肽。其常用的形式有HA和3X HA,通过基因重组技术把HA-tag的核酸序列与目的基因的5’端或3’端连接,就可以最终表达形成HA-tag的目的蛋白。HA-tag具有以下优点:HA-tag通常不会与目的蛋白相互作用,并且大多数情况下不会影响目的蛋白的功能;HA-tag作为标签蛋白,后续通过HA抗体(AH158)、Anti-HA磁珠即可对目的基因的表达、定位及功能进行检测或对目的蛋白进行纯化、免疫沉淀或免疫共沉淀等。基于以上优点,HA标签已被广泛应用于蛋白表达、纯化、鉴定、相互作用和功能等多方面的研究。
HuayunMag™ Anti-HA Magnetic Beads (Anti-HA磁珠),也被称为Anti-YPYDVPDYA Magnetic Beads,可以特异性地结合HA标签融合蛋白,并可以借助磁力架等磁分离设备非常便捷地应用于带有HA标签的融合蛋白或其蛋白复合物的免疫沉淀或纯化等实验。本产品进行免疫沉淀的流程参考图1。
图1.华韵的HuayunMag™ Anti-HA Magnetic Beads (Anti-HA磁珠)免疫沉淀流程图。
本产品特异性强、靶蛋白结合量高。与国内外大多数的同类产品相比,本产品抗体结合密度高,对带有HA标签蛋白的结合具有很强的特异性,并且本产品磁珠粒径小,不易产生非特异吸附。本产品每毫升磁珠悬浊液含约10mg磁珠,含有不少于0.6mg HA抗体,通常可结合不少于0.6mg HA标签融合蛋白,具体的最大结合量和标签蛋白的分子量大小等相关。每500微升样品,通常仅需使用10-20微升磁珠悬浊液,就可以高效地进行免疫沉淀实验。
本产品可结合多种形式的HA标签蛋白。本产品可特异性地结合甲硫氨酸修饰的N端HA融合蛋白(Met-HA-Protein)、N端HA融合蛋白(HA-Protein)、C端HA融合蛋白(Protein-HA)。
本产品结合目的蛋白速度快。本产品使用了纳米级磁珠(~200nm),具有超大的比表面积,便于抗体和抗原的快速有效结合。通常10分钟内即可完成抗原吸附的过程,30分钟内完成目的蛋白免疫沉淀操作。缩短操作时间可以有效避免在长时间操作过程中目的蛋白的降解或变性,充分保证目的蛋白的活性。
本产品可选择多种洗脱方法。本产品可以根据目的蛋白的结构、生物学功能及后续应用的要求等,使用多种洗脱方法,包括HA多肽、酸性和SDS-PAGE上样缓冲液等洗脱液进行洗脱。特别是HA多肽洗脱后不会包含抗体的轻链和重链,可以有效解决免疫沉淀后Western实验中轻链和重链的干扰问题。本产品用于GFP-HA融合蛋白的免疫沉淀效果参考图2。
图2.HuayunMag™ Anti-HA Magnetic Beads (Anti-HA磁珠)用于GFP-HA融合蛋白的免疫沉淀效果图。293T (人胚肾细胞)转染GFP-HA质粒36小时后,经Western及IP细胞裂解液(P0013)裂解。样品1为Input,即全细胞裂解液(total);样品2为Mouse IgG Magnetic Beads (小鼠IgG免疫磁珠) (P2171)免疫沉淀后经SDS-PAGE蛋白上样缓冲液(1X) (P0015A)洗脱后的样品,该Mouse IgG是正常的小鼠IgG (Normal Mouse IgG),为阴性对照;样品3和4都为本磁珠免疫沉淀后的样品,其中样品3使用SDS-PAGE蛋白上样缓冲液(1X)洗脱,样品4使用HA多肽洗脱。使用SDS-PAGE蛋白上样缓冲液(1X)洗脱后可以检测到HA抗体的轻重链,而使用HA多肽洗脱仅含有GFP-HA,整个泳道仅检测到单一的目的条带。Western印迹成像由HuayunImager™ 600化学发光成像系统完成(EI600)。实际结果会因实验条件、检测仪器等的不同而存在差异,图中数据仅供参考。
本产品的主要指标如下表:
| Characteristics |
Description |
| Product content |
10mg/ml magnetic beads in specific protective buffer |
| Beads size |
~200nm |
| Magnetization |
Superparamagnetic |
| Coupled antibody |
Anti-HA mouse monoclonal antibody |
| Isotype |
IgG1 |
| M.W. of antibody |
Approximately 150kDa |
| Antibody concentration |
≥0.6mg HA antibody per ml beads |
| Binding capacity |
≥ 0.6mg HA‐tagged fusion protein per ml beads |
| Specificity |
Met-HA-Protein, HA-Protein, Protein-HA |
| Elution method |
Acid, peptide competitive or SDS‐PAGE loading buffer elution.Note: If elute with SDS-PAGE loading buffer, the light (~25kDa) and heavy (~50kDa) chain of HA antibody will be denatured and release from the beads. |
| Application |
IP, Co-IP, Protein purification |