Western结果往往就处于“白板”与“黑板”之间的某个条件：
1. 白板：
“白板”代表的意义是某些条件不足：
① 首先要考虑蛋白提取问题，样本浓度是否过低，正常Western实验每孔需要20-40μg左右的蛋白；
②一抗的稀释比例，一般新手做WB都会按照说明书的比例去做，一般说明书都是1:500-2000之间的比例，如果是白板就需要加大抗体比例，如果按说明书的最低推荐比例还是“白板”，那应该不是稀释比例的问题了；
③一抗孵育时间，常规的一抗孵育条件是4℃过夜，有时候抗体反应比较“迟钝”可能需要更强烈的孵育时间，比如延长孵育时间至2天，或者把摇床放入冰箱缓慢摇动孵育过夜，我们不建议37℃进行抗体孵育；
④ 显色体系的选择，一般来说ECL化学发光要比DAB灵敏5-10倍以上，所以尽量使用ECL；ECL发光液也分很多种，普通型、灵敏型、超灵敏型，我们都尝试过，的确在信号上有非常明显的差异；当然延长曝光时间也是提高信号灵敏度最常规的方法。
2. 黑板：
“黑板”顾名思义相对于“白板”，“黑板”代表的意义就是某些条件过量了；
① 要考虑上样量；
② 降低一抗稀释比例；
③降低二抗稀释比例，二抗其实是非常成熟的产品，质量是有保证的，我们一直在用HRP二抗，1:5000，常温40min，基本不需要摸索二抗条件，总结起来还是一抗、二抗都要买放心厂家的；
④ 缩短曝光时间。
关于封闭
封闭也是Western中比较关键的环节，一般常规的条件是5%脱脂奶粉溶于1×TBST中，常温下摇床缓慢摇晃，封闭1h；除此之外还需要向大家介绍另外一种封闭液—0.5% 明胶，这两种封闭液都适用于常规的Western实验，他们之间的取舍关系可近似认为，如果用脱脂奶粉封闭结果是“白板”或者信号较弱，可以考虑换明胶；如果用明胶封闭，结果杂带较多，背景较深可以考虑用脱脂奶粉；甚至有的时候两者可以混合起来使用，具体的细节需要大家在实验中细细品味。
