样品、固定、取材、脱水（不同的组织在各缸内溶液处理时间稍有不同）、包埋、切片、捞片之后将片子放架子上室温晾干10min，再放60度烘烤2-3h，通风橱内操作（脱腊：二甲苯20min，二甲苯15min，二甲苯10min）修复，加0.01M枸橼酸缓冲液，pH6.0，高档煮沸（8min），中档（10min）继续加热，室温冷却。
灭活：3%的过氧化氢，室温孵育15min，用PBS洗涤三遍（3*3min），加一抗，4℃孵育过夜，第二天早上，37℃复温（30min），PBS清洗三次，每次3分钟后，擦干组织周围水份，加试剂2（聚合物辅助剂），37℃孵育35min。
加二抗37℃孵育35min，PBS清洗3次，每次3分钟，配DAB。
显色，在显微镜下观察，当显色适当的时候，用纯水冲到废液瓶中，擦干组织周围水份，苏木素染核 45s。
洗涤，1%盐酸酒精分化，PBS洗涤并返蓝一段时间（显微镜下观察）。
通风橱窗内操作，每个试剂中放置5min，封片：将中性树胶滴在组织旁边，再用盖玻片盖上，将封好的切片置于通风橱中晾干，镜下观察组织阳性表达分布。
