2024/12/3 12:46:00

一、细胞爬片预处理

吸出培养板中的液体,将细胞爬片浸入固定液(4% parafprmaldhyde),4℃固定1-2h,吸去固定液,用PBS漂洗3次,每次5min。吸弃PBS,将细胞爬片浸入通透液(0.2% TrionX100),37℃孵育10min,吸弃通透液,用PBS漂洗三次,每次5min。

 

二、DNase | 处理阳性对照

用ddH2O 按照1:9的比例将10XDNase | Buffer 稀释成 1X DNase | Buffer 工作液,混匀,取出爬片,吸水纸吸去多余液体,放在载玻片上,在阳性样本上滴加适量1X DNase | Buffer 工作液,覆盖细胞,室温平衡5min

用1X DNase | Buffer工作液,按照1:99的比例将DNase | (20U/μL),稀释成DNase | 工作液(200U/mL),混匀,吸去样本上DNase | buffer工作液,在阳性样本上滴加适量稀释后的DNase | 工作液(200U/mL),37℃孵育10-30min,把爬片放回孔板中,用PBS漂洗3次,每次5min。

 

三、标记和复染

取出爬片,放到载玻片上,每个样本滴加适量Td Equilibration Buffer 覆盖细胞,37℃孵育10-30min。配制阳性对照和实验样本的标记工作液,(注意不加TdT酶)混匀,吸去平衡液,每个样本滴加适量标记工作液,覆盖细胞,湿盒中37℃避光反应60min。

将爬片放回孔板中,用PBS漂洗3次,每次5min,用PBS按照1:24的比例将25X DAPI工作液。

混匀,取出爬片,放到载玻片上,每个样本滴加适量1X DAPI 覆盖细胞,室温避光孵育5min,将爬片放回孔板中,用PBS漂洗4次,每次5min,取出爬片,每个在玻片上滴加适量抗荧光淬灭剂的封片剂,,细胞爬片倒扣放到载玻片上。

 

四、检测

荧光显微镜下观察,拍照(注意避光)

 

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