完整的 western blot 实验从样品制备开始，到跑胶、转印、封闭、抗体杂交、成像涉及各个环节，其中任何步骤出现问题，都会影响到最终的实验数据质量。接下里，我们特备了关于电泳和转印环节的 Tips，让大家在 WB 实验中乘风破浪，不再头秃！
Tip 1：
洗净上样孔
在加样之前，用移液枪吹洗每个上样孔，洗净残留在上样孔中的丙烯酰胺残渣，从而避免畸形条带的出现。
Tip 2：
凝胶过热是大忌
如果凝胶在电泳过程中温度过高，则条带可能会出现「微笑」形状，即条带两侧向上弯曲的现象。切记要正确使用缓冲液，并控制好电泳功率，避免凝胶过热的出现。
Tip 3：
确保样品缓冲液离子强度正确
样品中的盐离子强度过高（或过低），都会导致条带出现偏斜或扭曲。如果样品提取过程中用到高盐溶液，就有可能要在上样前进行稀释或脱盐处理。
Tip 4：
不要过载上样
加大上样量有利于检测稀有目标蛋白。但过大的上样量会导致电泳过程中出现垂直条纹。如果必须大量上样时（> 30 ug 总蛋白），可将电泳电压降低 25％，有助于减少条纹。
Tip 5：
转印三明治要去除气泡
均匀的蛋白质转印需要三明治的各组件之间完全接触，尤其是凝胶和膜完全接触。没有去除的气泡会导致膜上出现空白点，直接影响实验结果！建议使用凝胶滚轮将这些气泡通通赶走！（提示：梯度凝胶最好上下滚动，而不是左右滚动。左右滚动会导致梯度凝胶翘曲和起皱。）
