2024/11/28 15:27:00

单链抗体表达系统:

scFv主要的表达系统包括原核表达系统与真核表达系统,其中,由于大肠杆菌生长速度快且成本较低,因此原核表达系统是重组抗体生产中最常用的表达系统。在原核表达系统中,不同的表达载体、融合标签,以及宿主菌都会产生不同活性的scFv。

首先,在表达载体方面,PET系列已成为在大肠杆菌中蛋白表达的首选,也是目前表达scFv的常用载体,此外噬菌体载体也可以作为一种选择,例如pIT2等。为了方便后续进行纯化与功能验证,往往会添加融合标签,例如His标签、Fc标签、SUMO标签等,His标签能够用于scFv的亲和层析纯化,目前已经成为最常用的融合标签。大肠杆菌菌株K-12系列和B系列是现阶段在生产中所常用到的宿主菌,而在实验室中则是BL(DE3)菌株较为常见,但由于大肠杆菌表达在密码子方面存在一定的缺陷,因此会导致scFv中会有部分不表达的密码子。卡梅德生物通过改造pET载体,获得双表达质粒,该质粒含有双MCS位点,双T7启动子,双lac操纵子和双核糖体结合位点,在蛋白重组表达过程中采用亲和标签融合表达,包括短肽类标签和长肽以融合蛋白形式共表达。Rosetta 2作为原核表达的宿主是一个较好的选择,它能够补充大肠杆菌缺乏的七种稀有密码子对应的 tRNA。

 

原核表达scFv:

在获得抗体基因库并通过噬菌体展示技术筛选之后所得到的scFv,可以通过各种表达系统去表达抗体蛋白。使用原核表达具有表达速度快、成本低,并且方法简单的优点,但一些小分子蛋白可能由于其蛋白均以包涵体的形式进行表达,后期需要进行工艺繁琐的蛋白变复性处理,例如Leptin,EGF等。为了在原核表达系统中实现高水平的溶解度和高产蛋白的表达,提供一个高质量的方案以及重组蛋白表达服务是很有必要的。

 

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