一、荧光素酶互补成像技术原理简介
萤火虫荧光素酶片段互补成像技术(LCI)是近年来形成的研究蛋白互作的新技术,把2个目标蛋白分别连接于萤火虫荧光素酶的C端 (CLuc:398–550 aa)和N端(NLuc:2–416aa)。
如果2个蛋白互作,N段和C端接近形成有活性的荧光素酶,荧光素酶分解萤光素底物并产生荧光。
将LCI技术与烟草瞬时表达技术相结合来研究植物蛋白的相互作用。
该技术具有很多优势:
1.可以实现活体细胞内实时、定量分析;
2.不受植物自发荧光的干扰;
3.不需要裂解细胞提取蛋白质,可以很好的反映植物生理条件下蛋白的互作状态。
荧光素酶互补成像(LCI)实验流程图
二、荧光素酶互补成像技术实验流程
1.植物表达载体构建(融合蛋白):目的基因克隆或目的基因合成;限制性内切酶酶切骨架载体并纯化;目的基因插入骨架载体;转化大肠杆菌,筛选阳性克隆并测序鉴定;
2.转化农杆菌:将目的载体转化到农杆菌菌株内,例如:GV3101;
3.注射烟草:将含有CLuc与NLuc的农杆菌菌液按照比例混匀,共同注射本氏烟叶片;
4.定量、定性分析;
5.检测目的蛋白的表达;
6.分析结果并完成交付。
三、荧光素酶互补成像技术结果展示
荧光素酶互补成像
1.荧光素酶互补成像技术技术服务范畴:验证两个已知蛋白质间的相互作用
2.荧光素酶互补成像技术技术服务优势:
①团队经验丰富;
②提供原始图片,保证数据真实可靠;
③该技术得到的蛋白互作关系符合体内实际情况,结果可信度高;
④可定性、定量分析蛋白互作关系。