一、凝胶阻滞实验EMSA原理简介
凝胶阻滞(Electrophoretic mobility shift assay, EMSA)实验是体外分析DNA与蛋白质相互作用的一种特殊的凝胶电泳技术。
其原理为蛋白质与核酸分子结合后将大大增加其相对分子质量,而凝胶电泳中核酸的迁移率与其相对分子质量成正比,因此没有结合蛋白质的核酸片段跑得快,而与蛋白质结合形成复合物的核酸则跑得慢。
二、凝胶阻滞实验EMSA流程
凝胶阻滞(Electrophoretic mobility shift assay, EMSA)实验是体外分析DNA与蛋白质相互作用的一种特殊的凝胶电泳技术。
其原理为蛋白质与核酸分子结合后将大大增加其相对分子质量,而凝胶电泳中核酸的迁移率与其相对分子质量成正比,因此没有结合蛋白质的核酸片段跑得快,而与蛋白质结合形成复合物的核酸则跑得慢。
1.构建表达载体:目的基因克隆或目的基因合成;限制性内切酶酶切骨架载体并纯化;目的基因插入骨架载体;转化大肠杆菌,筛选阳性克隆并测序鉴定;
2.转化表达菌株:将目的表达载体转化表达菌株;
3.制备目的蛋白:诱导目的蛋白表达并提取纯化目的蛋白;
4.进行凝胶阻滞(EMSA)实验;
5.拍照记录实验结果。
三、凝胶阻滞实验EMSA技术服务范畴
1.转录因子与启动子区域的结合验证
2.蛋白-核酸复合体的形成
四、凝胶阻滞实验EMSA技术服务优势:
1.团队经验丰富;
2.提供原始图片,保证数据真实可靠。