一、转化表达菌株
选取的表达菌株:Rosette是一种含有三个稀有密码子的表达菌株，因此更适合用于这一目的
1.将Rosette菌株置于冰浴中，孵育30分钟，然后进行热激处理，在42°C下保持45秒，接着放入摇床中，以200rpm的速度在37°C下培养1小时。
2.取转化好的菌株涂抹到含有相应抗性的LB培养基上，在37°C下孵育12-18小时。
3.从平板上选取8-10个生长良好的单克隆菌落，转移到500-1000ml含有相应抗生素的液体LB培养基中，在37°C下培养5-10小时。
4.进行菌液PCR鉴定，并进行凝胶电泳检测。
5.保留菌液PCR呈阳性的菌株（即凝胶电泳上含有目的片段的菌株），将其与50%灭菌甘油按1:1的比例混合，并贮存在-80°C中。
二、诱导菌株表达蛋白-小摇诱导摸索诱导条件
1.从含有相应抗生素的LB培养基中取50ul至1ml阳性菌株；
2.将菌液置于摇床中，以37°C、200rpm的条件下活化4-6小时；
3.取活化后的菌株，按1:100的比例接种至含有相应抗生素的6ml LB培养基中；
4.继续在摇床上以37°C、200rpm的条件下培养4-6小时，直至光密度（OD）值达到0.8；
5.取出OD值在0.6-0.8之间的未诱导菌液1-2ml作为未诱导对照；
6.向OD值为0.8的菌液中加入终浓度为0.5-1.0mM的异丙基硫代半乳糖苷（IPTG）；
7.在16°C、180rpm的条件下进行诱导反应14-16小时；
8.取诱导前后的菌液，进行12000-13000rpm离心5分钟；
9.弃去上清液，加入1ml PBS缓冲液重悬，再次进行12000-13000rpm离心5分钟，重复2次；
10.加入40-60ul 2倍浓度的SDS loading缓冲液，将混合物置于95-100°C条件下加热10分钟；
11.根据目标蛋白的分子大小，制备适量浓度的SDS-PAGE凝胶；
12.诱导前样品上样12ul，诱导后样品上样15ul；
13.进行100-120V的电泳，进行染色和脱色后进行观察。
三、大摇诱导和诱导蛋白质提取
1.对小摇诱导条件进行了摸索后，我们进行了大摇诱导，将诱导体系扩大到100-300ml的规模。
2.在加入20ml细胞裂解缓冲液后，我们重新悬浮了菌体。
3.接着，我们加入了100ul DTT，40ul PMSF和20ul溶菌酶，并将混合物置于冰上15-30分钟，并将其搅拌均匀。在此过程中，我们经常翻转混合物。
4.将重悬菌体置于冰水混合物中超声破碎:
功率:100W→工作时间:15min→超声开时间:5s→超声关时间:10s→报警温度:30°C
5.在完成受体蛋白大摇诱导后，将细胞离心收集，采用15000rpm的速度，在4℃下离心30分钟；
6.接着将上清转移到新的离心管中，并分装，随后将其存放在-80°C下备用；
需要特别注意：若是第一次进行诱导蛋白提取实验，务必保留沉淀用于后续Western blot检测，以确认目标蛋白是在上清中进行表达，还是在沉淀中进行表达。
四、诱导前→诱导后
