一、核心原理
通过低速差速离心和化学渗压休克处理纯化血小板，再利用物理或化学破膜方法结合高速差速离心，从动物血细胞中分离出完整且纯化的血小板线粒体细胞器。在蛋白酶抑制混合剂的作用下，使已纯化的线粒体膜结构破裂，从而获得线粒体内活性蛋白酶系统。
二、试剂盒组成
1.清理液（Reagent A）：用于清洗细胞颗粒群，去除杂质。
2.裂解液（Reagent B）：与净化液混合后形成裂解工作液，用于裂解细胞。
3.净化液（Reagent C）：与裂解液按比例混合，提高裂解效率。
4.强化液（Reagent D）：在裂解过程中加入，增强裂解效果。
5.保存液（Reagent E）：用于保存线粒体沉淀物。
6.破膜液（Reagent F）：使线粒体膜结构破裂，释放可溶性蛋白。
7.活性液（Reagent G）：与破膜液共同作用，保持蛋白活性。
8.上样液（Reagent H）：用于蛋白电泳等后续实验。
三、操作步骤
1.血小板纯化：
采集新鲜抗凝全血样品，通过低速离心去除上清液，保留细胞颗粒群。
用清理液清洗细胞颗粒群，去除杂质。
再次离心，获得血小板富集血清。
通过高速离心，获得纯化的血小板。
2.线粒体分离：
向纯化的血小板中加入裂解工作液（由裂解液和净化液混合而成），涡旋震荡混匀。
使用匀浆器匀化细胞，使细胞裂解。
通过低速离心去除未溶解的细胞和细胞核。
通过高速离心获得线粒体沉淀物。
3.可溶性蛋白提取：
向线粒体沉淀物中加入破膜液和活性液，涡旋震荡混匀。
孵育一段时间后，再次离心，获得上清液，即为所有可溶性线粒体蛋白系统。
若暂时不予后续处理，可保存于-20℃冰箱。
四、应用领域
1.细胞凋亡研究：线粒体在细胞凋亡过程中发挥重要作用，通过制备线粒体可溶性总蛋白，可以研究凋亡相关蛋白的表达和活性变化。
2.信号传递研究：线粒体参与细胞内的信号传递过程，通过制备线粒体可溶性总蛋白，可以研究信号传递相关蛋白的相互作用和调控机制。
3.代谢和营养学研究：线粒体是细胞内的能量工厂，通过制备线粒体可溶性总蛋白，可以研究代谢相关蛋白的表达和活性变化，以及营养素对线粒体功能的影响。
五、注意事项
1.避光操作：试剂盒中的部分试剂对光敏感，需避光保存和使用。
2.温度控制：裂解和孵育过程需在冰槽或低温条件下进行，以保持蛋白活性。
3.试剂保存：部分试剂需保存于-20℃冰箱，使用前需冻融。
4.离心条件：离心速度和时间的控制对实验结果至关重要，需严格按照说明书操作。
