一、核心原理
通用型植物线粒体DNA萃取的核心原理基于细胞内不同细胞器的大小、密度和重量差异，通过机械破碎、差速离心和密度梯度纯化，逐步实现线粒体的提取和纯化。完整的细胞器经裂解后，可以通过CsCl离心或酚-氯仿抽提获得DNA。在裂解细胞器之前，常用DNase清除非细胞器的DNA，以确保提取的线粒体DNA的纯度。
二、试剂盒提取方法
目前市场上已有多种通用型植物线粒体DNA萃取试剂盒可供选择，如赫澎（上海）生物科技有限公司的HEPENGBIO2126通用型植物线粒体DNA萃取试剂盒、上海科梦达生物科技有限公司的通用型植物线粒体DNA萃取试剂盒等。这些试剂盒通常包含所有必要的试剂和耗材，用户只需按照说明书操作即可完成线粒体DNA的提取。
三、手动提取方法
对于没有试剂盒的情况，也可以采用手动提取方法。以下是一个基于差速离心和蔗糖密度梯度纯化的手动提取方案：
取材与预处理：选取新鲜植物组织，洗净后剪碎，加入预冷的提取缓冲液（含蔗糖、EDTA等，维持渗透压和抑制DNase活性），冰浴研磨成匀浆。
去除细胞壁：向匀浆中加入适量纤维素酶和果胶酶，37℃水浴处理一段时间，以降解细胞壁，获得原生质体。
分离线粒体：
将处理后的原生质体悬液进行差速离心（先低速离心去除细胞核、细胞壁碎片等大颗粒杂质，再高速离心沉淀线粒体），收集线粒体沉淀。
沉淀用缓冲液悬浮，并重复高速离心步骤，以进一步纯化线粒体。
将粗线粒体铺于不连续浓度的蔗糖梯度上，进行超速离心，吸取特定蔗糖界面的线粒体。
破碎线粒体：向线粒体沉淀中加入含SDS（十二烷基硫酸钠）的裂解缓冲液，温和振荡，使线粒体膜破裂，释放DNA。
去除蛋白质等杂质：
加入蛋白酶K（水解蛋白质），37℃保温一段时间。
加入苯酚-氯仿-异戊醇混合液（按体积比25:24:1），充分混匀后离心，取上层水相（含DNA）。
沉淀DNA：向上层水相中加入2-3倍体积的无水乙醇（或异丙醇）和适量3mol/L NaCl溶液，轻轻混匀，-20℃静置一段时间，使DNA沉淀。
洗涤与溶解：离心收集DNA沉淀，用70%乙醇洗涤沉淀2-3次，去除残留杂质，室温晾干后，加入TE缓冲液（含Tris-HCl和EDTA）溶解DNA。
四、注意事项
1.操作环境：所有操作除特别指明外，均应在4℃进行，以防止线粒体因高温而失活。同时，应使用冷藏的缓冲液并在冰桶中操作。
2.细胞破碎程度：细胞过度破裂可能让线粒体受损，因此最好多次小心匀浆，并充分检测效果，达到线粒体释放但膜完整的目的。
3.线粒体保存：提取完成的线粒体最好立刻用于下游实验检测。若需存储，需要快速冻存在-80℃，切忌反复冻融。
B在选择试剂盒时，应注意其适用范围、灵敏度、特异性等指标，并根据实验需求进行选择。
