一、预防RNA降解的措施
1.使用无RNase的耗材和试剂：
耗材：选择无RNase的枪头、离心管、移液器等，确保实验过程中不会引入RNase污染。
试剂：使用无RNase的水、缓冲液和酶类，如DEPC处理水、RNase抑制剂等。
2.优化样本采集和保存条件：
采集：尽量快速采集样本，减少样本在室温下的暴露时间。对于动物组织，可考虑在动物处死后立即取样，或使用液氮快速冷冻保存。
保存：样本采集后应立即置于液氮或-80℃冰箱中保存，避免反复冻融。对于需要长期保存的样本，可考虑使用RNA稳定剂或RNA保存液。
3.改进样本处理流程：
裂解：使用高效的裂解液，确保样本中的细胞或组织被充分裂解，释放出RNA。裂解过程中可加入RNase抑制剂，以抑制RNase的活性。
离心：离心时选择合适的转速和时间，确保样本中的杂质和蛋白质被有效去除，同时避免RNA的损失。
纯化：使用高效的RNA纯化柱或试剂盒，确保RNA的纯度和完整性。纯化过程中可加入DNase I处理，以去除基因组DNA的污染。
4.控制实验环境：
清洁：保持实验台面的清洁，定期使用RNase清除剂擦拭实验区域。
隔离：将RNA实验与其他可能产生RNase污染的实验（如DNA实验、蛋白质实验）分开进行，避免交叉污染。
个人防护：实验人员应佩戴手套、口罩和实验服，减少皮肤、呼吸和衣物上的RNase污染。
二、RNA降解后的补救措施
1.重新提取RNA：
如果RNA降解严重，且无法通过后续实验步骤进行补救，建议重新提取RNA。在重新提取时，应严格遵循上述预防RNA降解的措施，确保提取的RNA质量。
2.使用RNA修复试剂：
市面上有一些RNA修复试剂，可以在一定程度上修复部分降解的RNA。但这些试剂的效果有限，且可能不适用于所有类型的RNA降解。因此，在使用前应仔细阅读产品说明书，并进行预实验验证。
3.调整实验方案：
如果RNA降解程度较轻，且对实验结果影响不大，可以考虑调整实验方案。例如，在RT-PCR实验中，可以增加循环数或使用更敏感的引物；在RNA测序实验中，可以增加测序深度或使用更先进的测序技术。
三、特定样本类型的RNA提取注意事项
1.植物样本：
植物样本中含有大量的多糖和多酚类物质，这些物质可能干扰RNA的提取和纯化。因此，在提取植物RNA时，应选择适合植物样本的裂解液和纯化柱，并考虑加入多糖去除剂或多酚氧化酶抑制剂。
2.血液样本：
血液样本中含有大量的血红蛋白和免疫球蛋白，这些蛋白质可能干扰RNA的提取和纯化。因此，在提取血液RNA时，应选择适合血液样本的裂解液和纯化柱，并考虑加入红细胞裂解液或白细胞分离液。
3.FFPE样本（福尔马林固定石蜡包埋样本）：
FFPE样本中的RNA可能因固定和包埋过程而发生降解和交联。因此，在提取FFPE样本RNA时，应选择适合FFPE样本的裂解液和纯化柱，并考虑使用脱蜡剂和蛋白酶K处理以去除石蜡和蛋白质污染。
