宫内干细胞移植治疗先天性脊椎裂胎鼠的新方法已成功建立,该方法通过胎仔外科、显微外科及显微注射技术,将转染绿色荧光蛋白基因的骨髓间充质干细胞(MSCs)移植至胎鼠脊髓中,实现了较高的干细胞成活率,为神经管畸形治疗提供了新思路。
具体方法
1.实验动物与模型制备:
选择孕16、17、18天的雌性大鼠,通过维甲酸口服给药制备先天性显性脊椎裂胎鼠模型。
2.干细胞移植技术:
采用胎仔外科、显微外科和显微注射技术,将转染绿色荧光蛋白基因的骨髓间充质干细胞(MSCs)移植到脊椎裂胎鼠的脊髓中。
移植过程中,需精确控制显微注射针的位置和深度,以确保干细胞准确注入脊髓组织。
3.术后观察与评估:
孕20天时剖腹取胎,计算胎鼠成活率。
制作胎鼠脊髓切片,在荧光显微镜下观察胎鼠脊髓中干细胞的移植情况,包括干细胞的存活、迁移和分化。
研究成果
1.干细胞成活率:
接受手术的孕鼠86只,孕20天成活81只,成活率为94.2%。
行干细胞移植的先天性显性脊椎裂胎鼠258只,共取出198只,成活率为76.7%。其中,胎龄为16、17、18天的胎鼠成活率分别为72.1%、77.3%、87.0%。
荧光显微镜下观察胎鼠脊髓切片,可见呈现绿色荧光的MSCs,干细胞移植成活的胎鼠195只,成活率为98.5%。
2.干细胞分化情况:
移植的MSCs不仅分化为不同的神经细胞,包括神经干细胞、神经元和神经胶质细胞,而且还可以分化为肌原细胞。
分化率在P10-14代MSCs明显高于P3-6代MSCs,在孕16天移植明显高于孕17天和18天。
方法优势
1.高成活率:该方法实现了较高的干细胞成活率,为先天性脊椎裂的治疗提供了有效的细胞来源。
2.多向分化潜能:移植的MSCs具有多向分化潜能,能够分化为多种神经细胞类型,为脊髓组织的修复和再生提供了可能。
3.早期干预:宫内干细胞移植能够在疾病早期进行干预,为先天性脊椎裂的治疗提供了新的时间窗口。