一、明确应用场景与检测需求
1.细胞培养质量控制
场景特点：细胞培养过程中支原体污染可能导致实验结果偏差、细胞生长异常甚至培养失败。
检测需求：高灵敏度，确保早期发现低浓度污染，避免交叉污染扩散。
推荐试剂盒：qPCR法试剂盒（灵敏度可达10-100拷贝/mL），适用于常规细胞库、原代细胞及珍贵样本的检测。
2.生物制品生产放行
场景特点：疫苗、抗体等生物制品需严格遵循GMP规范，支原体检测为关键放行指标。
检测需求：高灵敏度与法规符合性，需通过药典方法验证（如欧洲药典2.6.7或美国药典<63>）。
推荐试剂盒：NAT（核酸扩增技术）法试剂盒，结合自动化设备实现高通量检测，满足法规要求。
3.科研实验污染排查
场景特点：实验结果异常时需快速排查支原体污染，样本量可能较大。
检测需求：中等灵敏度，兼顾检测速度与成本。
推荐试剂盒：直接培养法或DNA染色法试剂盒，操作简便，适合初步筛查。
4.环境监测与污染溯源
场景特点：实验室空气、设备表面等环境样本中支原体浓度低，需高灵敏度检测。
检测需求：超灵敏度，结合样本富集技术（如滤膜过滤）提高检出率。
推荐试剂盒：高灵敏度qPCR或ddPCR试剂盒，适用于环境样本的长期监测。
二、灵敏度选择的关键指标
1.检测下限（LOD）
低灵敏度试剂盒（LOD > 1000 CFU/mL）：适用于高浓度污染样本的快速筛查。
中等灵敏度试剂盒（LOD 100-1000 CFU/mL）：适用于常规质量控制。
高灵敏度试剂盒（LOD < 100 CFU/mL）：适用于早期污染检测与法规放行。
2.特异性
确保试剂盒仅检测支原体，避免与其他微生物（如细菌、真菌）交叉反应。
3.检测时间
快速检测试剂盒（<2小时）适用于紧急情况，而高灵敏度试剂盒可能需要更长时间（如qPCR需2-4小时）。
三、不同灵敏度试剂盒的对比
|
灵敏度等级 |
适用场景 |
典型试剂盒类型 |
检测时间 |
成本 |
优势 |
|
低灵敏度 |
快速筛查、高浓度污染样本 |
直接培养法、DNA染色法 |
<1小时 |
低 |
操作简便，成本低 |
|
中等灵敏度 |
常规质量控制、科研实验 |
ELISA法、普通PCR法 |
2-4小时 |
中 |
平衡灵敏度与成本 |
|
高灵敏度 |
生物制品放行、早期污染检测 |
qPCR法、ddPCR法 |
2-6小时 |
高 |
灵敏度高，符合法规要求 |
四、选用建议
1.1优先选择法规认可的试剂盒
生物制品生产需选用通过药典验证的试剂盒（如Roche的Mycoplasma Plus qPCR Kit）。
2.结合样本类型选择
细胞培养上清液：qPCR法试剂盒。
环境样本：高灵敏度qPCR结合样本富集技术。
3.考虑成本效益
高灵敏度试剂盒虽成本高，但可避免因污染导致的实验失败或产品召回，长期来看更具经济效益。
4.验证试剂盒性能
在正式使用前，需对试剂盒的灵敏度、特异性、重复性进行验证，确保其符合实验要求。
五、注意事项
1.避免假阴性
高灵敏度试剂盒可降低假阴性风险，但需注意样本采集、处理及保存的规范性。
2.避免假阳性
确保试剂盒无交叉反应，操作过程中避免污染。
3.结合其他检测方法
对于关键样本，可结合多种检测方法（如培养法+qPCR法）提高准确性。
