实验目的:提取外周血RNA
实验步骤:
1.从-80℃冰箱取出外周血于冰上解冻,各取出150ul外周血于1.5ml EP管中。
2.加1 ml Trizol ,吹打混匀,冰上放置5min,使其充分裂解。
3.加200 ul氯 仿,充分吹打混匀,冰上放置15min。(备注:禁用涡旋振动器,以免基因组DNA裂解)
4.4℃,12000g离心15min。
5.轻轻吸取上层水相至新的1.5ml EP管中。
6.加入500ul 异丙醇混匀,冰上放置10min。
7.4℃,12000g离心10min,弃上清,RNA沉于管底。
8.加1ml 75%的乙醇至以上沉于管底的RNA中,温和振荡EP管,使沉淀充分溶解悬浮。
9.4℃,10000g离心5min,尽量去掉所有上清。
10.室温晾干10min,至嗅不到酒精为止。
11.分别加入20 ul灭菌的DEPC水溶解RNA样品,4℃,15min。
12. 测OD值定量RNA浓度。
最后跑1%琼脂凝胶检测RNA的完整性: