2025/5/21 14:45:00

干扰因素

1.内毒素抑制因子:血浆中存在多种内毒素抑制因子,如蛋白质等,这些物质可以与细菌内毒素结合,降低检测的灵敏度,导致测定值偏低或无法检测到内毒素。

2.蛋白酶干扰:血液中的丝氨酸蛋白酶等会干扰鲎试剂检测过程。部分蛋白酶会降解鲎试剂酶级联反应中的蛋白质,导致抑制反应;另一些则会激活该级联反应,导致假阳性结果。

3.(1,3)-β-D-葡聚糖:正常血液中含有的少量(1,3)-β-D-葡聚糖是真菌细胞壁的成分,会激活LAL酶级联反应,导致假阳性结果。

4.二价阳离子浓度不足:如Mg²⁺离子浓度不足,内毒素无法激活鲎试剂中的酶,反应被抑制。

5.高渗透压:较高浓度的糖或盐通常会抑制细菌内毒素检测反应。

6.酶、酶抑制剂:供试品若含有丝氨酸蛋白酶会增强反应,若含有丝氨酸蛋白酶抑制剂会抑制反应。

7.油脂类物质:脂类包裹内毒素,使内毒素无法暴露出来,导致实验结果出现假阴性。

8.其他干扰物质:如洗涤剂、抗生素(氨基糖苷类和青霉素)等也可能干扰细菌内毒素检测。

 

解决方法

1.样品稀释:稀释样本直至干扰消除,是较为有效的检测方法。通过逐级稀释直至加标/未加标样本浓度趋于一致,可降低干扰物质的影响。

2.热灭活法:通过加热使可能引起干扰的蛋白质变性或失去活性。例如,75℃加热10分钟,可降低丝氨酸蛋白酶等的干扰。但需注意加热可能影响细菌内毒素的表观浓度,需验证热灭活法的有效性。

3.化学处理:

添加酸或氯仿等化学物质,但这些方法仅在热灭活无效时推荐使用。

使用BET水或厂家提供的样本处理液稀释样品。

使用Glucashield®葡聚糖抑制缓冲液,通过特定的化学物质与(1,3)-β-D-葡聚糖结合,屏蔽葡聚糖对酶联反应的干扰,提升细菌内毒素检测特异性。

4.添加添加剂:使用钙镁离子添加剂(BY01)解决二价阳离子浓度不足的问题,但需注意过高的二价阳离子(如Ca²⁺)浓度可能会对试验带来抑制作用。

5.调节pH值:通过酸碱缓冲液调节供试品的pH值,使其处于最佳的pH范围(一般供试品溶液和鲎试剂混合后溶液的pH值在6.0~8.0的范围内为宜)。

6.使用高灵敏度鲎试剂:选择灵敏度更高的鲎试剂(如0.125EU/ml),并适当稀释样品溶液,以降低样品溶液对细菌内毒素检测的干扰。

7.采用其他检测方法:如重组C因子荧光法(rFC法),该方法具有更高的特异性、专属性、精密度、准确度、线性范围及定量限,可消除鲎试剂中β-1,3-葡聚糖对检测结果的干扰。

 

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