小鼠小胶质细胞(BV2)培养异常解决方案
1.细胞完全不贴壁
可能原因:培养基偏碱、培养瓶不透气或开封时间过长,导致培养基pH值增大。BV2细胞对培养基酸碱度敏感,在偏碱环境中易出现不贴壁现象。
解决方案:
更换新鲜配制的培养基,并使用透气瓶。
密切观察培养基颜色变化,若培养基呈紫红色,说明pH值偏高,需在CO₂培养箱中平衡至恢复红色后再使用。
2.细胞形态变为阿米巴样
可能原因:
存在潜在微生物污染,刺激细胞自分化。
使用的胎牛血清内毒素高,内毒素刺激细胞自分化。
解决方案:
通过去掉培养基中的抗生素确定污染类型,并排查污染源头。
尝试更换其他品牌的胎牛血清,降低内毒素对细胞的影响。
3.细胞生长缓慢或停滞
可能原因:
培养基或血清更换导致细胞不适应。
培养液中细胞生长必需成分如谷氨酰胺或生长因子耗尽或缺乏。
存在少量细菌或真菌污染。
解决方案:
比较新培养液与原培养液成分,逐步让细胞适应新培养液。
换入新鲜配制培养液,或补加谷氨酰胺及生长因子。
使用无抗生素培养液培养,若发现污染,丢弃培养物或用抗生素除菌。
4.细胞密度过大时出现大量漂浮
可能原因:BV2细胞生长速度快,若未及时换液或传代,细胞密度过大,营养成分减少,易导致细胞漂浮。
解决方案:
密切关注细胞状态,当密度较高、培养基有变黄趋势时及时换液。
细胞密度到达80%时及时进行传代,防止细胞过度生长。
5.细胞碎片较多
可能原因:细胞培养体系不适应、营养缺乏、渗透压异常等。
解决方案:
细胞外的黑色颗粒大部分是细胞碎片和细胞代谢产物,可先吸走培养基后用PBS润洗清除,再加新的培养基继续培养。
若润洗不能清除,可换液清洗后,等细胞密度70-80%左右消化处理细胞。消化完成后加完全培养基终止消化,混匀细胞,收集细胞悬液900-1000rpm离心3min,弃上清。再加5mL PBS重悬细胞,再离心后,用完全培养基重悬接种到新的培养皿。
6.细胞出现拉丝、触角多的情况
可能原因:细胞传代后可能出现此类形态变化,可能与细胞分化或消化传代过度有关。
解决方案:
先收集悬浮或贴壁不牢的细胞,用胰酶消化贴壁细胞1分钟左右后终止消化,收集消化下来的细胞。
计数传代后,细胞状态会有所改善。
7.细胞复苏后状态不佳
可能原因:细胞冻存或复苏过程中损伤。
解决方案:
复苏过程需严格按照操作规程进行,控制水浴时间和温度。
复苏后及时观察细胞贴壁情况,若状态不佳,可尝试重新复苏一管细胞进行培养。