一、技术原理与优势
PLA技术利用一对标记有单链DNA的特异性抗体识别目标蛋白，当两个抗体与同一蛋白或相邻蛋白结合时，其DNA标签通过连接酶形成环状结构，经滚环扩增（RCA）产生可检测的荧光信号。这一技术突破传统免疫检测的局限性，通过DNA介导的信号级联放大，将检测灵敏度提升至单分子级别，能够精准定位和定量分析蛋白质翻译后修饰（PTMs）。
二、在PTMs检测中的具体应用
1.高灵敏度检测：
PLA技术可检测极低丰度的PTMs，例如在肿瘤微环境中实现EGFR磷酸化修饰的动态监测。其检测限可达0.1amol/μL，较传统Western blot技术提升3个数量级，适用于微量样本（如肿瘤穿刺活检组织）的修饰分析。
2.原位可视化与空间分辨：
该技术可在保留细胞/组织结构的前提下，通过荧光信号定位修饰位点。例如，在肺腺癌组织中成功区分EGFR L858R突变体与野生型的空间共定位，揭示PTMs在肿瘤异质性中的分布特征。
3.发现新型修饰位点：
PLA技术突破传统方法对已知修饰位点的依赖，通过邻近探针设计可发现新型修饰位点。例如，联合质谱分析在乳腺癌中成功发现HER2的新型磷酸化位点，为药物靶点发现提供新维度。
4.动态监测与机制研究：
结合时间序列实验，PLA技术可追踪PTMs的动态变化。例如，在帕金森病模型中观察LRRK2激酶与pS1292磷酸化蛋白的互作强度变化，揭示修饰在疾病进程中的作用机制。
三、技术突破与临床转化价值
1.突破样本量限制：
传统Western blot需10^6个细胞样本，而PLA技术通过单分子级灵敏度，使肿瘤活检等微量样本的PTMs分析成为可能，加速临床样本的转化研究。
2.多维度数据整合：
PLA技术与质谱联用，可同时获取修饰位点信息（如重链焦谷氨酸化）和修饰肽段比例，为药物研发提供结构-功能关联的全面数据。
3.药物靶点发现：
在乳腺癌HER2新型磷酸化位点的发现中，PLA技术揭示了传统方法遗漏的修饰靶点，相关成果已进入临床转化阶段，体现其在精准医学中的潜力。
