一、细胞系的建立要点及基本过程
1. 定义与特点
细胞系：指从原代培养物中首次传代成功的细胞群体，能够连续传代培养。细胞系可以是有限细胞系（传代次数有限）或无限细胞系（能够无限传代）。
2. 建立要点
组织来源：选择合适的组织来源，确保细胞来源可靠、无污染。
原代培养：将组织样本进行消化、分散，获得单细胞悬液，接种于培养瓶中进行原代培养。
传代培养：当原代培养的细胞生长至一定密度时，进行传代培养。传代过程中需注意细胞的消化、分散和接种密度。
细胞鉴定：通过形态学观察、生长特性分析、染色体核型分析等方法，对细胞系进行鉴定，确保其来源和特性。
3. 基本过程
组织采集与处理：获取组织样本，进行清洗、消毒、剪碎等处理。
细胞分离与培养：使用消化酶（如胰蛋白酶）将组织消化成单细胞悬液，接种于含有适当培养基的培养瓶中。
传代与扩增：待细胞生长至一定密度后，进行传代培养，逐步扩增细胞数量。
细胞系鉴定与保存：对细胞系进行鉴定，确认其来源和特性后，进行冻存保存。
二、细胞株的建立要点及基本过程
1. 定义与特点
细胞株：指通过选择法或克隆形成法，从细胞系中获得的具有特定性质或标志的细胞群体。细胞株具有稳定的遗传特性和生物学特性。
2. 建立要点
选择与克隆：从细胞系中筛选出具有特定性质或标志的细胞，通过克隆形成法获得单细胞克隆。
单克隆培养：对单细胞克隆进行扩增培养，获得遗传背景一致的细胞群体。
鉴定与验证：对细胞株进行鉴定，确认其特定性质或标志，并通过多次传代验证其稳定性。
3. 基本过程
细胞系准备：选择合适的细胞系作为细胞株建立的来源。
单细胞分离：使用有限稀释法、流式细胞术等方法，从细胞系中分离出单细胞。
克隆培养：将单细胞接种于培养板中，进行克隆培养。待克隆形成后，进行扩增培养。
细胞株鉴定：通过形态学观察、生长特性分析、特异性标志检测等方法，对细胞株进行鉴定。
细胞株保存与应用：对鉴定合格的细胞株进行冻存保存，并根据需要应用于相关研究。
三、细胞系与细胞株建立中的注意事项
1.无菌操作：在整个建立过程中，需严格遵守无菌操作规范，防止细胞污染。
2.培养条件优化：根据细胞类型和特性，优化培养基成分、温度、CO₂浓度等培养条件，确保细胞良好生长。
3.细胞鉴定与质量控制：对建立的细胞系和细胞株进行严格鉴定和质量控制，确保其来源可靠、特性稳定。
4.伦理与法规遵守：在涉及人源细胞或组织时，需遵守相关伦理和法规要求，确保研究的合法性和合规性。
