一、原代细胞周期测定的原理
细胞周期是指细胞从一次分裂结束到下一次分裂结束所经历的时间。它反映了细胞的增殖速度。单个细胞的周期测定可以采用缩时摄影的方法，但这种方法不能代表细胞群体的周期，因此现在多采用其他方法来测定群体周期。
二、BrdU方法
BrdU方法是一种利用BrdU渗入测定细胞周期的方法。BrdU是一种胸腺嘧啶核苷的类似物，当细胞处于细胞周期中的DNA合成期（S期）时，BrdU可以掺入到新合成的DNA中。通过检测BrdU的掺入情况，可以了解细胞的增殖状态。
实验步骤
1.细胞培养：将原代细胞培养至指数期。
2.加入BrdU：向培养液中加入BrdU，使最终浓度为10μg/ml。
3.秋水仙素处理：在培养44小时后，加入秋水仙素，使每ml中含0.1μg，以阻止细胞进入有丝分裂后期。
4.细胞收集与制片：48小时后，常规消化细胞并收集到离心管中，注意收集培养上清的漂浮细胞。然后进行常规染色体制片。
5.紫外照射：将染色体玻片置于56℃水浴锅盖上，铺上2×SSC液，距紫外灯管6cm处紫外照射30分钟，以使BrdU与DNA结合。
6.染色与观察：弃去2×SSC液，流水冲洗后，用Giemsa液染色10分钟，再流水冲洗并晾干。然后在显微镜下镜检100个分裂相，计算第一、二、三、四细胞期的分裂指数。
7.计算细胞周期：根据公式计算细胞周期（Tc）=48/{(M1+2M2+3M3+4M4)/100}(小时)，其中M1、M2、M3、M4分别代表第一、二、三、四细胞期的分裂指数。
试剂与配制
1.BrdU：1.0mg/ml，避光保存于4℃。
2.2×SSC：由NaCl 1.75克和柠檬酸三钠•2H2O 0.88克加水至100ml配制而成，4℃保存。
3.其他试剂：包括甲醇、冰醋酸、Giemsa染液、秋水仙素等，均按常规方法配制和使用。
三、注意事项
1.无菌操作：整个实验过程需要严格遵守无菌操作规范，以防止细胞污染。
2.BrdU浓度与孵育时间：根据细胞和实验目的不同，BrdU的掺入浓度和培育时间可能需要进行预实验测试确定。
3.细胞状态：确保细胞处于良好的生长状态，以提高实验的准确性和可靠性。
