2025/4/9 13:48:00

一、实验器材和试剂

1.器材:标注体积刻度的试管(圆锥形底)、巴斯德吸管(短型和长型)、台式离心机。

2.试剂:培养级纯净水、2×Hanks平衡盐溶液、储存培养基(含10%血清)。所有直接接触细胞的用品和试剂必须保证无菌。

 

二、实验方法

1.离心处理:将原代细胞悬液以1000r/min的速度离心5分钟,然后弃去上清液。

2.细胞重悬与裂解:向细胞沉淀中加入10ml培养级水,并用移液管轻轻来回吹打数次以重悬细胞。注意控制细胞在低渗溶液中的暴露时间,通常建议低于15秒,因为不同细胞的抗低张能力不同。

3.恢复张力:迅速加入等体积的2×Hanks平衡盐溶液以恢复细胞悬液的张力,并用巴斯德吸管轻轻混匀。

4.再次离心:以1000r/min的速度再次离心5分钟,然后检查红细胞沉淀。如果红细胞仍大量存在,可以重复上述步骤。否则,将洗涤过的细胞重悬于储存培养基中。

5.后续处理:对细胞进行计数及活力检测后,放入培养箱进行培养。

 

三、注意事项

1.无菌操作:整个实验过程必须严格遵守无菌操作规范,以防止细胞污染。

2.细胞抗低张能力:不同细胞的抗低张能力不同,因此在使用低渗溶液裂解红细胞时,需要控制暴露时间,以避免对细胞造成损伤。

3.重复操作:如果一次操作后红细胞未能完全去除,可以重复裂解和离心步骤,直到红细胞被充分去除。

 

急速裂解法去除红细胞具有操作简便、效率高的特点,适用于需要快速去除红细胞并保留有核细胞的实验场景。然而,在实际操作中仍需注意无菌操作、细胞抗低张能力等因素,以确保实验的成功和数据的准确性。

 

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