一、贴壁细胞传代方法

贴壁细胞是指需要附着在培养器皿表面才能生长的细胞，如成纤维细胞、上皮细胞等。其传代方法通常包括以下几个步骤：

1.准备工作：

预热培养基、胰蛋白酶等试剂至37℃。

准备生物安全柜、离心机、移液枪、细胞培养瓶等实验器材。

2.去除旧培养基：

吸去培养瓶中的旧培养基，避免对细胞造成机械损伤。

3.洗涤细胞：

用磷酸盐缓冲液（PBS）洗涤细胞1-2次，以去除残留的血清和死细胞。每次洗涤时，轻轻晃动培养瓶，使PBS覆盖细胞表面，然后吸去。

4.消化细胞：

加入适量的胰蛋白酶消化液（如0.25%胰蛋白酶-EDTA溶液），使消化液覆盖整个细胞层。

将培养瓶置于37℃培养箱中消化1-3分钟，或在室温下消化2-10分钟（具体时间根据细胞类型而定）。消化期间可在显微镜下观察细胞状态，当细胞变圆、间隙增大时，表示消化适度。

5.终止消化：

加入完全培养基终止消化，轻轻吹打细胞层，使细胞分散成单细胞悬液。

6.离心收集：

将细胞悬液转移至离心管中，以800-1000转/分钟的速度离心3-5分钟，使细胞沉淀。

7.重悬细胞：

弃去上清液，加入适量的新鲜培养基，轻轻吹打细胞沉淀，使其重悬成单细胞悬液。

8.接种传代：

根据实验需要，将细胞悬液按一定比例接种于新的培养瓶中，加入适量的新鲜培养基，置于培养箱中继续培养。

 

二、悬浮细胞传代方法

悬浮细胞是指不依赖于培养器皿表面，能在培养液中悬浮生长的细胞，如某些肿瘤细胞、淋巴细胞等。其传代方法相对简单，通常包括以下几个步骤：

1.准备工作：

预热培养基等试剂至37℃。

准备生物安全柜、离心机、移液枪、细胞培养瓶等实验器材。

2.收集细胞：

将细胞悬液转移至离心管中，以800-1000转/分钟的速度离心3-5分钟，使细胞沉淀。

3.弃去上清：

小心吸去上清液，避免损失细胞。

4.重悬细胞：

加入适量的新鲜培养基，轻轻吹打细胞沉淀，使其重悬成单细胞悬液。

5.接种传代：

根据实验需要，将细胞悬液按一定比例接种于新的培养瓶中，加入适量的新鲜培养基，置于培养箱中继续培养。

对于某些悬浮细胞，如果其生长状态良好且趋于成团生长，可以直接在培养瓶中进行传代，而无需离心步骤。此时，只需吸去部分旧培养基，加入适量的新鲜培养基，然后轻轻吹打细胞团块，使其分散成单细胞悬液即可。

 

三、半贴壁细胞传代方法

半贴壁细胞是指部分细胞呈现贴壁生长现象，但贴壁不牢的细胞，如Hela细胞等。其传代方法结合了贴壁细胞和悬浮细胞的特点，通常包括以下几个步骤：

1.准备工作：

预热培养基、胰蛋白酶等试剂至37℃。

准备生物安全柜、离心机、移液枪、细胞培养瓶等实验器材。

2.收集悬浮细胞：

如果培养瓶中有悬浮生长的细胞，先用移液器将其吸出，转移至离心管中离心收集。

3.消化贴壁细胞：

对于贴壁生长的细胞，按照贴壁细胞的传代方法进行处理，包括洗涤、消化、终止消化等步骤。

4.离心收集：

将悬浮细胞和贴壁细胞分别离心收集后，合并细胞悬液。

5.重悬细胞：

加入适量的新鲜培养基，轻轻吹打细胞沉淀，使其重悬成单细胞悬液。

6.接种传代：

根据实验需要，将细胞悬液按一定比例接种于新的培养瓶中，加入适量的新鲜培养基，置于培养箱中继续培养。

 

注意事项

1.无菌操作：在整个传代过程中，要严格遵守无菌操作规程，防止细胞污染。

2.消化适度：胰蛋白酶的消化时间要适度，消化不足会导致细胞难以从培养瓶壁上脱落，而消化过度则可能损伤细胞。

3.细胞计数：在传代前，可以对细胞进行计数，以确定传代的比例和接种的密度。

4.培养条件：传代后的细胞要置于适宜的培养条件中继续培养，包括温度、湿度、气体环境等。