一、双向琼脂扩散试验
1. 试验原理
将可溶性抗原和抗体分别加入琼脂板上具有一定距离和孔径的小孔内，使其在一定条件下相互扩散。如果抗原和抗体相互对应，且浓度、比例适当，则会在抗原、抗体孔之间出现清晰可见的沉淀线。
2. 试验材料
琼脂粉
平皿或载玻片
打孔器
生理盐水或其他缓冲液
待测抗原和抗体
3. 试验步骤
配制琼脂凝胶：将琼脂粉溶解于生理盐水或其他缓冲液中，加热煮沸至完全溶解，冷却至适宜温度后浇注于平皿或载玻片上，待其凝固。
打孔：使用打孔器在琼脂板上打孔，孔距和孔径根据实验需要确定。
加样：将待测抗原和抗体分别加入对应的小孔内。
扩散与观察：将加样后的琼脂板置于湿盒中，在适宜的温度下扩散一定时间（通常为24-48小时）。观察抗原、抗体孔之间是否出现沉淀线。
4. 结果判断
出现沉淀线：表明抗原与抗体发生特异性结合，为阳性反应。
未出现沉淀线：表明抗原与抗体未发生特异性结合，为阴性反应。
5. 应用
双向琼脂扩散试验主要用于分析溶液中的多种抗原，检测血清中各种免疫球蛋白、甲胎蛋白、乙肝表面抗原等。由于需要时间较长且灵敏度不高，因此通常用于初步筛选和定性分析。
二、单向琼脂扩散试验
1. 试验原理
将适量抗体与琼脂混匀后浇注成板，凝固后在板上打孔。孔中加入抗原后，抗原会向孔的四周扩散，边扩散边与琼脂中的抗体结合。一定时间后，在抗原与抗体比例适当处形成白色沉淀环。沉淀环的直径与抗原的浓度成正比。
2. 试验材料
琼脂粉
平皿或载玻片
打孔器
生理盐水或其他缓冲液
待测抗原
已知浓度的标准抗原（用于绘制标准曲线）
3. 试验步骤
制备琼脂板：将适量抗体与琼脂混匀后浇注成板，待其凝固。
打孔：在琼脂板上打孔，孔距和孔径根据实验需要确定。
加样：将待测抗原加入对应的小孔内。
扩散与观察：将加样后的琼脂板置于湿盒中，在适宜的温度下扩散一定时间（通常为24-48小时）。观察是否出现沉淀环，并测量沉淀环的直径。
绘制标准曲线：使用不同浓度的标准抗原进行同样操作，测量各浓度下沉淀环的直径，绘制标准曲线。
4. 结果判断
根据沉淀环的直径，在标准曲线上查找对应的抗原浓度。
如果待测抗原的浓度超出标准曲线的范围，则需要调整抗原的稀释度或重新制备标准曲线。
5. 应用
单向琼脂扩散试验是一种常用的定量检测抗原的方法，主要用于检测标本中各种免疫球蛋白和血清中各种补体成分的含量。由于其灵敏度高，因此可用于对免疫性疾病的辅助诊断。
三、注意事项
1.在进行琼脂扩散试验时，应确保所有操作均在无菌条件下进行，以避免细菌污染。
2.琼脂板的制备和打孔应均匀一致，以确保实验结果的准确性。
3.加样时应避免溢出孔外，以免影响实验结果。
4.扩散时间和温度应根据实验需要确定，并保持一致，以确保实验的可重复性。
5.在观察结果时，应注意区分特异性沉淀和非特异性沉淀。特异性沉淀通常清晰、致密，而非特异性沉淀则较为模糊、不规则。
