下面是从小鼠脾脏中分离Naive T细胞并将其分化为调节性T细胞（Treg）的详细实验流程方案：
实验材料
小鼠（6-8周龄）
磁珠分选试剂盒（如R&D Systems的Naive T细胞分选试剂盒）
细胞培养基（RPMI-1640, 10% FBS, 1% Pen/Strep）
IL-2、TGF-β、抗-CD3、抗-CD28
流式细胞仪及配套试剂（用于细胞鉴定）
实验步骤
1. 小鼠脾脏的解剖与细胞悬液的制备
1.1 解剖小鼠：将小鼠麻醉后，按照标准解剖程序取出脾脏。
1.2 脾脏细胞悬液的制备：
将脾脏放入冷的PBS中，使用注射器柱塞轻轻压碎脾脏。
通过70 μm的细胞筛网过滤，收集单个细胞悬液。
用PBS洗涤细胞两次，每次离心10分钟，300 g。
2. 磁珠分选Naive T细胞
2.1 细胞计数：使用台盼蓝染色法计数细胞。
2.2 磁珠分选：
将1 mL 2 x 108 个细胞加入到5 mL U型管中。与200 μL的Biotinylated Antibody Cocktail混合，在4℃孵育20~30分钟。
加入250 μL的链霉亲和素（Streptavidin）偶联的磁珠，在4℃孵育20~30分钟。
加入1.55 mL缓冲液，混匀后置于专用磁力架上，室温静置6分钟。
将细胞倒入新的U型管中，此即为Naive T细胞(CD3+CD4+CD62L+CD44low/-)。
为增加细胞纯度，可重复上述分选过程。
3. Treg细胞的分化
3.1 诱导培养基
RPMI 1640 + 10% FBS + 1% Pen/Strep + IL-2 (50 U/mL)+ TGF-β(5 ng/mL) + Anti-CD3 Ab (1 μg/mL) + Anti-CD8 Ab (1 μg/mL)
3.2 诱导分化
将Naive T细胞以1x106 cells/mL的浓度重悬于诱导培养基中。在37℃，5% CO2的培养箱中培养7天。每2~3天进行半换液，一周后，收集细胞。
4. Treg细胞的鉴定
使用抗小鼠CD4、CD25的抗体进行细胞表面标记物的染色。
固定破膜后，使用抗小鼠FoxP3的抗体进行核内染色。
使用流式细胞仪鉴定Treg细胞（CD4+ CD25+ FoxP3+）比例。
若有必要，进行功能性检测，如抑制性实验，以确认Treg细胞功能。
