标记的链霉卵白素-生物素法（Labeled Streptavidin-Biotin，LSAB）是一种高度敏感的免疫组织化学染色方法，广泛应用于生物学和医学研究中，特别是在病理诊断中。以下是关于LSAB法的详细介绍：
一、原理
LSAB法基于生物素-亲和素系统的高度亲和力，利用链霉卵白素（Streptavidin，SA）代替卵白素（Avidin），与生物素化的第二抗体和过氧化物酶结合，形成复合物，从而放大抗原-抗体反应的信号。LSAB法的基本试剂包括：
1.第一抗体：特异性识别目标抗原的抗体。
2.生物素化第二抗体：与第一抗体结合，并带有生物素标记。
3.辣根过氧化物酶标记的链霉卵白素：与生物素化第二抗体上的生物素结合，形成复合物，携带过氧化物酶，用于后续的显色反应。
二、步骤
LSAB法的一般操作步骤如下：
1.标本处理：将固定后的标本用PBS漂洗，去除固定液和其他杂质。
2.封闭内源性过氧化物酶：使用1%的过氧化氢或过氧化氢甲醇溶液浸泡涂片10~20分钟，以消除内源性过氧化物酶对显色结果的干扰。
3.血清封闭：用二抗的正常血清孵育标本，减少非特异性结合。
4.一抗孵育：滴加第一抗体，在室温下放置1小时或在4℃冰箱内过夜，使一抗与标本中的抗原结合。
5.漂洗：用缓冲液（如TBS）漂洗标本，去除未结合的一抗。
6.二抗孵育：滴加生物素化的第二抗体，在室温下放置30分钟，使二抗与一抗结合。
7.再次漂洗：用缓冲液漂洗标本，去除未结合的二抗。
8.LSAB复合物孵育：滴加辣根过氧化物酶标记的链霉卵白素复合物，在室温下放置10分钟，使链霉卵白素与二抗上的生物素结合。
9.显色：使用DAB（3,3'-二氨基联苯胺）或其他显色底物，在过氧化物酶的作用下，产生颜色反应，显示出抗原的位置。
10.复染和封片：用苏木精对标本进行复染，增加细胞结构的对比度，然后封片保存。
三、特点
1.高敏感性：由于链霉卵白素分子质量小，能够快速穿透组织，与生物素化第二抗体上的生物素高效结合，因此LSAB法具有较高的敏感性，能够检测低丰度的抗原。
2.低非特异性背景染色：链霉卵白素不含糖基，不会与组织中的凝集素结合，因此减少了非特异性背景染色，提高了染色结果的准确性。
3.操作简便：LSAB法步骤相对简单，操作方便，适合大批量标本的检测。
4.适用范围广：LSAB法适用于多种组织标本的检测，包括石蜡切片、冰冻切片等。
四、应用
LSAB法广泛应用于生物学和医学研究中，特别是在病理诊断中。例如，用于检测肿瘤标志物、病毒抗原、细胞因子等，为疾病的诊断和治疗提供重要的依据。此外，LSAB法还可以与其他技术结合使用，如双重或多重免疫染色技术，用于同时检测多种抗原。
五、注意事项
1.标本处理：标本的固定、脱水、包埋等处理步骤对染色结果有很大影响，应严格按照规范操作。
2.抗体选择：选择合适的抗体是保证染色结果准确性的关键。应根据实验目的和标本类型选择合适的抗体。
3.孵育条件：孵育温度和时间对抗体与抗原的结合效率有重要影响，应根据实验条件进行优化。
4.显色控制：显色时间应严格控制，以避免显色过度或不足。
