一、染色步骤
方法一：涂片法
1.制备细胞悬液：
用含有5%-10%血清的等渗液将培养的悬浮细胞调制成密度为106个/毫升的细胞悬液。
2.涂片：
将1滴细胞悬液滴于一张载玻片的一端，用另一块干净的载玻片，按照血液涂片法将细胞铺展于载玻片上。
注意避免细胞重叠，确保细胞分布均匀。
3.干燥与固定：
载玻片在空气中干燥后，再用甲醇固定细胞。为避免细胞皱缩，应尽快使涂有细胞的载玻片干燥，可摇动载玻片或用吹风机的冷风迅速吹干。
4.染色：
对涂有细胞的载玻片进行吉姆萨染色。吉姆萨染液由天青和伊红组成，具体配制方法可参考相关文献或试剂说明书。
按一定比例滴加吉姆萨染液，覆盖细胞层，染色时间一般为2分钟，但可根据细胞类型和染色效果进行适当调整。
5.冲洗与观察：
移除染液，用自来水冲洗掉粉红色背景后，再用去离子水冲洗细胞。
用显微镜观察单层潮湿细胞。若细胞已干，可重新使细胞潮湿后再观察。细胞核被染成紫红色或紫蓝色，而细胞质则被染成浅红色。
方法二：离心法
1.制备细胞悬液：
同涂片法步骤1。
2.离心涂片：
使用离心涂片机将细胞悬液的细胞直接离心沉淀在载玻片上，使细胞的离心沉淀和涂片同时进行。
离心标本必须对称放置，保持平衡。然后吸取细胞悬液0.1-0.2毫升迅速滴入标本室入口，以1000转/分钟离心5分钟。
3.干燥与固定：
离心完毕后取出载玻片，在空气中干燥后，再用甲醇固定细胞。
4.染色、冲洗与观察：
同涂片法步骤4和5。
方法三：真空过滤法
1.制备细胞悬液：
用含有10%血清的培养液将培养物调制成浓度为106个/毫升的细胞悬液。
2.真空过滤：
取5-10毫升细胞悬液，用直径为25毫米、孔径为0.5微米的Nucleopore多孔滤膜进行真空过滤。
当过滤悬液还剩余2毫升左右时，轻轻加入10毫升平衡盐溶液继续过滤。重复此步骤一次，以确保细胞充分、均匀地过滤。
然后加入10毫升甲醇到平衡盐溶液中，继续过滤至过滤出的液体是纯甲醇为止。
3.干燥与固定：
空气中干燥载玻片，待甲醇完全挥发后，再进行吉姆萨染色。
4.染色、冲洗与观察：
同涂片法步骤4和5。
二、注意事项
1.染液配制：
吉姆萨染液宜现用现配，旧染液染色效果不佳。
吉姆萨对pH极敏感，因此缓冲液的pH值要准确，否则会影响染色效果。
2.染色操作：
染色时间不宜过长或过短，过长会导致背景色过深，过短则可能染色不充分。
染色过程中应保持细胞湿润，避免细胞干燥导致染色不均。
3.显微镜观察：
观察前应将细胞充分湿润，以避免细胞干燥导致形态变化。
使用适当倍数的显微镜观察细胞，以获得清晰的图像。
4.细胞处理：
在染色前，细胞应经过适当的处理，如固定、漂洗等，以确保染色效果。
对于不同类型的细胞，可能需要调整染色步骤和条件。
通过以上步骤和注意事项，可以成功地对原代悬浮细胞进行吉姆萨染色，并清晰地观察到细胞的形态和结构。
