原代贴壁细胞吉姆萨染色法是一种常用的细胞学染色技术，用于观察和研究原代贴壁细胞的形态和结构。吉姆萨（Giemsa）染色法因其对细胞核和寄生虫的清晰着色而广泛应用于生物学和医学领域。以下是原代贴壁细胞吉姆萨染色法的详细步骤和注意事项：
一、吉姆萨染液制备
1.准备材料：
吉姆萨粉：0.5克
甘油：22毫升
纯甲醇：33毫升
Sorensen缓冲液（pH 6.80-7.38）：适量
2.配制步骤：
将少量甘油与吉姆萨粉在研钵内充分混合，研磨至无颗粒。
将剩余的甘油倒入研钵，于56℃保温2小时。
加入纯甲醇，混匀后即为吉姆萨母液，保存于棕色试剂瓶内。
取9份Sorensen缓冲液和1份吉姆萨母液混合，即得吉姆萨染色液。
二、贴壁细胞染色步骤
1.去除培养液：
小心去除培养器皿内的培养液，避免损伤细胞。
2.漂洗细胞：
用平衡盐溶液（如PBS）反复漂洗单层培养物2次，以去除残留的培养液和杂质。
3.固定细胞：
加入平衡盐溶液，再逐滴加入等体积的甲醇，边加边混合，静置10分钟。
丢弃50%甲醇-平衡盐溶液混合液，加入新鲜的甲醇液浸泡固定细胞10分钟。
用甲醇漂洗细胞1次，以去除残留的固定液。
4.细胞干燥：
将培养器皿内的细胞干燥后储存或直接进行染色。
5.染色：
按2毫升/平方厘米的比例滴加吉姆萨染液，覆盖细胞层。
染色2分钟，或根据细胞类型和染色效果调整染色时间。
6.冲洗细胞：
移除染液，用自来水冲洗掉粉红色的背景色。
再用去离子水冲洗细胞，以确保染色清晰。
7.观察细胞：
使用显微镜观察单层潮湿的细胞。
若细胞已干，可重新使细胞潮湿后再观察。
三、染色结果
正常染色后，细胞核被染成紫红色或紫蓝色，而细胞质则被染成浅红色。
四、注意事项
1.染液配制：
吉姆萨染液宜现用现配，旧染液染色效果不佳。
吉姆萨对pH极敏感，因此缓冲液的pH值要准确，否则会影响染色效果。
2.染色操作：
染色时间不宜过长，否则会导致背景色过深，影响细胞观察。
染色过程中应保持细胞湿润，避免细胞干燥导致染色不均。
3.显微镜观察：
观察前应将细胞充分湿润，以避免细胞干燥导致形态变化。
使用适当倍数的显微镜观察细胞，以获得清晰的图像。
通过原代贴壁细胞吉姆萨染色法，可以清晰地观察到细胞的形态和结构，为细胞生物学和医学研究提供重要的实验依据。
