一、实验准备
材料准备:
胰蛋白胨(Tryptone):10克
酵母提取物(Yeast Extract):5克
氯化钠(NaCl):10克
蒸馏水(或去离子水):1升
琼脂粉(Agar):15克(用于配制固体培养基)
氢氧化钠(NaOH):适量,用于调节pH值
锥形瓶、烧杯、玻璃棒、容量瓶、移液器、天平、高压蒸汽灭菌锅、培养皿、封口膜等实验器材
抗生素(可选):根据实验需要选择合适的抗生素,如氨苄青霉素(Amp)、卡那霉素(Kan)等。
二、配制步骤
1.称量:
使用天平准确称量胰蛋白胨10克、酵母提取物5克、氯化钠10克。
2.溶解:
在烧杯中加入约800毫升的蒸馏水。
依次加入称量好的胰蛋白胨、酵母提取物和氯化钠。
用玻璃棒搅拌,直至所有成分完全溶解。
3.调节pH值:
使用氢氧化钠(NaOH)溶液调节溶液的pH值至7.0-7.5之间。通常,使用5mol/L的NaOH溶液逐滴加入,同时用pH计监测,直至达到所需的pH值。
4.定容:
将溶液转移到容量瓶中,或使用玻璃棒引流到合适的容器中。
加水定容至1升。
加入琼脂粉(如配制固体培养基):
在液体培养基中加入15克琼脂粉。
加热并搅拌,直至琼脂粉完全溶解。
5.分装与灭菌:
如果配制的是液体培养基,将其分装到锥形瓶或其他合适的容器中。
如果配制的是固体培养基,无需分装,直接进行下一步。
将培养基放入高压蒸汽灭菌锅中,在121℃下灭菌15-20分钟。
6.冷却与倒平板(如配制固体培养基):
灭菌完成后,将固体培养基取出,放置在55℃左右的水浴中冷却。
待培养基冷却至适宜温度时,加入适量的抗生素(如需要),并充分摇匀。
将培养基迅速倒入无菌培养皿中,每皿倒入约10-15毫升。
轻轻摇晃培养皿,使培养基分布均匀。
待培养基凝固后,用封口膜封好培养皿边缘。
7.保存与使用:
液体培养基冷却后,可储存在4℃的冰箱中备用。
固体培养基凝固后,倒置放在4℃的环境中保存,确保在一个月内使用完毕。
三、注意事项
1.无菌操作:在整个配制过程中,应严格遵守无菌操作规程,避免细菌污染。
2.pH值调节:pH值对细菌的生长有显著影响,应准确调节至适宜范围。
3.抗生素加入时机:抗生素应在培养基冷却到适宜温度后加入,以防止高温破坏抗生素活性。
4.培养基凝固情况:在进行倒平板操作时,要注意培养基的温度,避免培养基凝固过快或过慢影响倒板质量。