一、溶解前的准备
1.确定多肽的性质:
了解多肽的电荷特性(碱性、酸性或中性)。
了解多肽的疏水性,是否含有容易氧化的氨基酸(如Cys、Met、Trp)。
2.选择适当的溶剂:
无菌蒸馏水或去离子水:一般情况下,多肽首选溶解在灭菌的蒸馏水或去离子水中。如果条件允许,使用无氧水更佳,可以通过注入惰性气体(如氮、氦、氩)减压除气得到。
有机溶剂:对于疏水性强的多肽,可能需要使用有机溶剂(如异丙醇、乙腈)或膜变性剂(如DMF、DMSO)辅助溶解。
缓冲液:对于特定实验需求,可能需要使用特定pH值的缓冲液进行溶解。
3.准备实验器材:
确保所有实验器材(如离心管、移液枪、移液管等)都是无菌的。
准备滤膜(如0.45或0.2μm孔径的滤膜)用于过滤除菌。
二、溶解步骤
1.少量试验:
建议先用少量多肽进行溶解试验,以找到最佳的溶解方法和条件。
2.加入溶剂:
将多肽粉末加入适当的溶剂中,轻轻搅拌,避免剧烈振荡。
如果多肽不溶于纯水,可以尝试超声处理(注意:超声处理可能会引起溶液发热和多肽降解,需控制时间和强度)。
3.辅助溶解方法:
对于含有多个碱性氨基酸的多肽,可以使用1-10%的乙酸水溶液进行溶解。
对于含有大量酸性氨基酸的多肽,可以使用1-10%的氨溶液或乙酸乙基吗啡等挥发性碱性缓冲液进行溶解。
对于疏水性强的多肽,可以使用50%的乙酸或膜变性剂(如DMF、DMSO)进行溶解。
4.溶解完全后稀释:
当多肽完全溶解后,可以加入更多的溶剂或缓冲液将其稀释至所需的浓度。
5.过滤除菌:
如果多肽溶液需要无菌,可以使用滤膜进行过滤除菌。
三、溶解后的处理
1.pH值调整:
如果多肽溶液用于特定实验(如层析),可能需要调整pH值至适宜范围。
2.保存:
溶解后的多肽溶液应尽快使用,避免长时间放置导致降解。
如果需要保存,应将其分装成小份,存放在适当的温度条件下(如-20℃以下)。
四、注意事项
1.避免剧烈振荡:在溶解过程中,避免剧烈振荡多肽溶液,以防止多肽降解。
2.控制温度和光照:多肽对温度和光照敏感,溶解过程中应保持适宜的温度和避免强光照射。
3.选择合适的膜变性剂:虽然膜变性剂有助于溶解疏水性多肽,但可能会对多肽的生物活性造成干扰,因此应谨慎使用。