一、控制血清的使用与储存
1.减少血清冻融次数：
血清在反复冻融过程中，其成分可能发生变化，增加产生黑点的风险。因此，应尽量避免不必要的冻融操作。
建议购买大包装的血清后，分装成小包装，每次使用前融化一小份，以减少冻融次数。
2.正确储存血清：
血清一般储存于-20℃的环境中，以保持其稳定性和活性。
储存时，确保血清包装密封良好，防止水分进入或血清蒸发。
二、优化培养基条件
1.培养基无需37℃水浴：
血清在37℃水浴中可能发生变化，增加产生黑点的风险。因此，在使用前，将血清从冰箱中取出，室温下自然融化即可。
2.保持培养基的pH值在7.0-7.2：
适宜的pH值对细胞的生长和代谢至关重要。过高或过低的pH值都可能影响细胞的生长状态，并可能增加产生黑点的风险。
3.严格控制配制培养基的水质：
使用高质量的水质配制培养基，避免使用含有杂质或微生物的水质。
定期清洗和消毒配制培养基的容器，防止污染。
三、合理控制细胞培养过程
1.掌握细胞传代的最佳时机：
细胞生长过老时，容易破碎产生残骸，这些残骸可能表现为黑点。因此，应定期观察细胞的生长状态，及时传代，避免细胞生长过老。
2.正确操作血清的灭活与分装：
如果需要对血清进行灭活处理（通常用于去除血清中的补体成分），应严格按照操作规范进行，避免灭活过程中产生沉淀物。
在分装血清时，应确保无菌操作，避免污染。
四、识别并处理可能的污染物
1.观察培养基是否混浊：
如果培养基出现混浊，可能是微生物污染的表现。此时，应及时停止实验，检查污染原因并采取相应的处理措施。
2.在显微镜下观察黑点的性质：
如果黑点游动，可能是微生物污染；如果黑点静止不动，可能与血清质量、细胞生长状态或培养基条件有关。
对于疑似污染的样品，应进行无菌试验以确认是否存在微生物污染。
五、其他注意事项
1.避免使用含有杂质的血清：
优质的胎牛血清应无杂质、无沉淀物。在使用前，应仔细观察血清的外观和性状，如有异常，应及时更换。
2.定期更换新批次的血清：
血清的质量可能因批次而异。为了保持实验的稳定性和可靠性，建议定期更换新批次的血清，并在使用前进行小规模的测试培养。
