细胞污染:细胞培养正常情况下建议每日低倍镜高倍镜下观察,便于及早发现及早处理污染 细胞确定是否污染?
一、细菌污染
培养基短时间内变黄,变浑浊,培养基表面出现漂浮物;细胞生长停滞,逐渐脱落死亡;显微镜下可见高速颤动,作布朗运动的细小颗粒。
二、霉菌污染
培养基一般不浑浊,肉眼可见菌落;显微镜下可见菌丝分布于细胞间
三、酵母菌污染
培养基变浑浊;显微镜下可见念珠串状颗粒散在于细胞周围
四、支原体污染
培养基短时间内变黄;细胞一般无明显改变;显微镜下可见胞浆小颗粒或空泡
五、黑胶虫污染
培养基一般无明显改变;显微镜下可见作布朗运动的黑色小点
一旦确定污染:
(污染的细胞建议直接丢弃❗️❗️❗️高浓度双抗培养细胞性质可能会受到影响,甚至皱缩脱落,若不死心可以尝试拯救下)
①弃培养基,彻底吸净
②加入含10%双抗DPBS2-3ml浸泡5分钟,彻底吸净
③胰酶稀释一倍室温消化3分钟,清除贴壁污染,彻底吸净
④重复步骤2
⑤细胞消化传代,离心机800转低速离心
⑥弃上清,重悬,离心机800转低速离心
⑦加入10%双抗完全培养基(支原体清除剂)重悬,除菌滤膜培养瓶培养
⑧一天一换液(上述方案是在细胞极其珍贵情况下的无奈之举,在细胞易于获得的情况下还是建议直接弃掉污染的细胞,不仅节约时间,而且风险更小)