2024/9/29 13:50:00

细胞污染:细胞培养正常情况下建议每日低倍镜高倍镜下观察,便于及早发现及早处理污染 细胞确定是否污染?

一、细菌污染

培养基短时间内变黄,变浑浊,培养基表面出现漂浮物;细胞生长停滞,逐渐脱落死亡;显微镜下可见高速颤动,作布朗运动的细小颗粒。

 

二、霉菌污染

培养基一般不浑浊,肉眼可见菌落;显微镜下可见菌丝分布于细胞间

 

三、酵母菌污染

培养基变浑浊;显微镜下可见念珠串状颗粒散在于细胞周围

 

四、支原体污染

培养基短时间内变黄;细胞一般无明显改变;显微镜下可见胞浆小颗粒或空泡

 

五、黑胶虫污染

培养基一般无明显改变;显微镜下可见作布朗运动的黑色小点

 

一旦确定污染:

(污染的细胞建议直接丢弃❗️❗️❗️高浓度双抗培养细胞性质可能会受到影响,甚至皱缩脱落,若不死心可以尝试拯救下)

弃培养基,彻底吸净

加入含10%双抗DPBS2-3ml浸泡5分钟,彻底吸净

胰酶稀释一倍室温消化3分钟,清除贴壁污染,彻底吸净

重复步骤2

细胞消化传代,离心机800转低速离心

弃上清,重悬,离心机800转低速离心

加入10%双抗完全培养基(支原体清除剂)重悬,除菌滤膜培养瓶培养

一天一换液(上述方案是在细胞极其珍贵情况下的无奈之举,在细胞易于获得的情况下还是建议直接弃掉污染的细胞,不仅节约时间,而且风险更小)

 

上一篇:实验干货||脂糖凝胶的纯化与回收技巧 下一篇:科研干货|qPCR干粉引物溶解稀释和保存!