qPCR干粉引物溶解稀释和保存
1.打开引物前记得先离心!
做qPCR实验时,在打开引物前,请务必记得先进行离心操作!推荐使用3000-4000rpm的离心速度,离心时间为30-60秒。这样可以避免引物干粉在开盖时飘散。
2.引物一般配制成10-100μM
引物通常需要配制成10-100μM的浓度。许多公司在引物标签上明确标明了需要加入的溶液量,以便直接达到100μM的浓度。
可以通过以下计算公式来确定引物的最终浓度:引物终浓度(μM) = 所需引物量(μg) / 引物分子量(g/mol) / 反应体积(L)。
3.溶解引物用什么溶剂?
在溶解引物时,可以选择使用DEPC水,也可以选用经过灭菌的去离子水或者TE缓冲液(pH7.4-8.0)。
4.引物的保存温度和时间:
关于引物的保存:未溶解的引物可以在-20°C下保存至少1年。而溶解后的引物应避免反复冻融,这样至少可以保存半年以上。
引物在高浓度下更为稳定这一观点备受重视。因此,如果实验需要使用多种引物,建议将它们事先溶解并稀释至100μM的储存液,并将其分装保存起来。
在实验操作时,再根据需要将稀释好的引物再度稀释为工作液,以确保实验的顺利进行。