一、区别
1.标记物不同:
DELFIA(解离增强镧系元素荧光免疫检测)技术使用镧系螯合物(如Eu、Sm、Tb、Dy)作为标记物,这些镧系元素具有独特的荧光性质。
传统ELISA(酶联免疫吸附测定)技术则通常使用酶(如辣根过氧化物酶HRP)作为标记物,通过酶促反应产生颜色变化来检测目标分子。
2.检测原理不同:
DELFIA技术基于时间分辨荧光(TRF)检测原理,利用镧系螯合物发出的荧光寿命长、Stokes位移大的特点,通过时间分辨来降低自发荧光背景干扰,提高信噪比和灵敏度。
ELISA技术则基于抗原-抗体特异性反应和酶促反应原理,通过测量酶促反应产生的颜色变化来定量或定性分析目标分子。
3.检测性能不同:
DELFIA技术具有更高的灵敏度和更宽的动态范围,能够检测到更低浓度的目标分子,并且适用于多种标记分子的结合检测。
ELISA技术虽然操作简便、成本较低,但在灵敏度和动态范围方面可能不如DELFIA技术。
4.操作复杂性不同:
DELFIA技术可能需要更复杂的仪器设备和操作步骤,如荧光检测器和时间分辨荧光测量系统。
ELISA技术则相对简单,通常只需要酶标仪等常规设备即可进行测量。
二、工作原理
1.DELFIA荧光检测技术:
标记与结合:使用镧系螯合物标记的抗体或抗原与待测样本中的目标分子结合。
洗涤与分离:通过洗涤步骤去除未结合的标记物,保留与目标分子结合的标记物。
荧光检测:在特定条件下激发标记物发出荧光,利用时间分辨荧光检测原理测量荧光强度,从而定量或定性分析目标分子的含量。
2.传统ELISA技术:
包被与结合:将已知的抗原或抗体吸附在固相载体表面,加入待测样本使其与固相载体上的抗原或抗体发生特异性免疫反应。
酶标抗体结合:加入酶标记的抗原或抗体,形成抗原-抗体-酶标抗原/抗体复合物。
显色与测量:加入底物使酶催化底物显色,根据颜色的深浅或光密度值来定量或定性分析目标分子的含量。
三、总结
DELFIA荧光检测技术与传统ELISA技术在标记物、检测原理、检测性能和操作复杂性等方面存在显著差异。DELFIA技术以其高灵敏度、宽动态范围和多种标记分子的结合检测能力在生物医学检测领域具有广泛应用前景。而ELISA技术则以其操作简便、成本较低和适用于多种实验需求的特点在生物医学研究中仍然占据重要地位。在选择检测方法时,需要根据具体实验需求和条件进行综合考虑。