一、细胞复苏（以复苏一管细胞至T25培养瓶中为例）

1、准备工作
15ml 离心管、冻存管、胰酶、PBS（磷酸盐缓冲液）、培养基、冻存液、1ml 注射器枪头、移液枪、马克笔、封口膜和垃圾桶。在准备好以上物品后，还需将它们置于紫外灯下照射30分钟，以确保消毒。这一系列准备工作将为接下来的实验操作提供必要的条件和保障。

2、步骤
在实验室操作中，首先从液氮罐中取出存储在其中的冻存细胞。接着，将这些冻存细胞置于37°C的水浴锅中进行解冻处理。随后，将1ml培养基吸取至冻存管中，并均匀地将其吹入细胞悬液中。将处理后的细胞转移至一个15ml的离心管中，再向离心管中加入3ml培养基。进行离心过程（1000rpm/5min），并准备好细胞培养瓶，务必标注好日期、时间、姓名以及细胞的名称。在标记完培养瓶后，向中加入3-4ml培养基。将经过离心的细胞取出，将离心管中的上清液倒掉，再次吸取1ml培养基至离心管中并均匀吹入。取出细胞，并将其吸取至已标记好的培养瓶中。采用8字法或十字法摇匀细胞悬液，然后将其转移至培养箱中进行培养。为确保实验操作的成功和细胞的健康生长，严格遵循操作步骤，确保实验环境的清洁和消毒。

细胞换液

1、准备工作
照紫外30min:PBS、培养基、1ml枪头、移液枪、马克笔、封口膜、垃圾桶。

2、步骤
在显微镜下观察细胞时，应注意观察细胞的状态，如果发现细胞呈现漂浮状，或者培养基的颜色发生改变，这时需要考虑更换培养基。具体操作为：首先打开培养瓶，将旧的培养基倒掉，然后加入1ml PBS 进行清洗（各洗两遍），随后吸走PBS，最后加入3-4ml 新的培养基。这样可以确保细胞在良好的环境中继续生长。在整个操作过程中，需保持操作环境的清洁，并避免细胞受到外界污染。

二、细胞传代（以T25培养瓶传代为例）

1、准备工作
照紫外30min:PBS、培养基、胰酶、1ml枪头、移液枪、新的培养瓶/皿、15ml离心管、马克笔、封口膜、垃圾桶

2、打开离心机
步骤：首先，从培养箱中取出需要处理的培养瓶，然后用1ml PBS溶液进行两次洗涤。接着，吸除PBS液，然后吸取1ml胰酶并加入培养瓶中，轻轻摇动瓶身促进混合。将培养瓶放回培养箱中，进行2-3分钟的消化加速处理。取出培养瓶进行观察，当细胞变得圆润且呈现漂浮状态时，说明消化已充分进行。随后，添加2ml培养基终止消化，并充分混合液体。将含液的培养瓶中的液体转移至15ml离心管中，进行离心处理（速度800rpm/3分钟）。接着，在新的培养瓶上标注相关信息（日期、时间、姓名、细胞名称），并向其中加入适量的培养基（传T25需加入5ml培养基，传T75则需加入10ml培养基）。取出离心管，去除上清液后，再加入1ml培养基并充分混合。将液体转移至新的培养瓶中，进行8字法和十字法摇匀混合。最后，将处理完成的培养瓶放入孵箱中进行后续培养操作。这些步骤将有助于确保实验顺利进行并得到准确的实验结果。

注意：
1、对于细胞传代的过程，通常情况下是将T25培养瓶中的细胞传代到容量为300-400ml的培养瓶中；而T25培养瓶中的细胞需全部传到T75培养瓶中；同时，T75培养瓶中的细胞也需要传代到容量为300-400ml的新培养瓶中。
2、在进行细胞传代时，适宜选择在细胞密度达到80%到90%的时候进行传代操作，以确保细胞状态良好及传代效果最佳。

三、细胞冻存（以T25瓶为例）

1、准备工作
15ml 离心管、冻存管、胰酶、PBS（磷酸盐缓冲液）、培养基、冻存液、1ml 注射器枪头、移液枪、马克笔、封口膜和垃圾桶。在准备好以上物品后，还需将它们置于紫外灯下照射30分钟，以确保消毒。这一系列准备工作将为接下来的实验操作提供必要的条件和保障。

2、打开离心机
步骤：培养箱拿出需要冻存的细胞→倒掉旧培养基→加入1mlPBS清洗两次→加入1ml胰酶→放入培养箱中2-3min加速消化→加2ml培养基终止消化→吹匀后加入离心管中→离心(1000rpm/5min)→标记冻存管(时间、姓名、细胞名称)→拿出离心管,弃上清→加入冻存液并吹匀(要冻存几管细胞就加几ml冻存液)→将细胞加入冻存管中(2ml冻存管不能超过1.5ml)→放入-80℃冰箱→2-3天后移入液氮罐中

最后：
1、培养基（如DMEM、1640）被称作是细胞的营养来源，就好像是它们的主食。为了让细胞生长更快，可以多加点培养基，但要注意不要过度喂食，以免细胞受损。
2、PBS被用来稀释细胞液，就像是为细胞提供洗澡的水一样。这个步骤有助于细胞在实验过程中保持干净健康。
3、胰酶在培养细胞中扮演着消化作用的角色，与培养基的比例通常为1:2（即加入1ml的胰酶时，需要加入2ml的培养基）。这样的处理有助于细胞的分离和处理，确保实验的准确性和稳定性。