seahorse实验
提前1天铺板
细胞板：我们将在96孔板中使用40%的孔，将中间四个角不加入，作为空白对照组。首先，我们将从六孔板中消化细胞，并进行离心以去除上清液。然后，我们将向每个孔中加入2ml的培养基，并悬浮40ul的细胞与60ul的培养基（四个角除外）。最后，将细胞板放置在培养箱中过夜，贴壁生长即可。
探针板：首先在每个孔中加入200ul去离子水，然后将探针板放入预热至37摄氏度且无二氧化碳的孵箱中孵育。在这个步骤中，确保实验条件的准确性和稳定性将对结果产生重要影响。
配OCR/ECR培养基,放入37度水浴锅ECR:25ml培养基,吸出250ul培养基,加250ul谷氨酰胺
OCR:25ml培养基,吸出3*250ul培养基,依次加入250ul丙酮酸,250ul葡萄糖,250ul谷氨酰胺
配液ECAR:每个孔A液20ul glucose\B液22ul(粉末加720ulECAR培养基)\C液2DG25ul
OCR:A液20ul(粉未+630ulOCR培养基)\B液22ul(粉未+720ulOCR培养基)\C液25ul(粉未+540ulOCR培养基)
计算
由C1V1=C2V2算出需要配置的V1体积
OCR
A液:V2=20ul*孔数
由100*V1=15*V2算出V1
B液:V2=22ul*孔数
由100*V1=10*V2算出V1
C液:V2=25*孔数
由50*V1=5*V2算出V1
ECAR
B液:V2=22ul*孔数
由100*V1=10*V2算出V1
细胞板:
细胞板操作步骤如下：首先吸出80ul培养基，接着加入80ul ECAR/OCAR培养基，再次吸出，随后加入18ul EICAR/OCAR培养基，并将细胞板置于37度的孵箱中进行培养。在进行以上步骤时，请确保操作的准确性和实验条件的严谨性。
探针板
将培养皿中的 dd 水吸出后，加入 200ul 校准液，并将其放入孵箱中。将用于测定细胞代谢活性的 ECAR（细胞外酸化率）和 OCR（细胞耗氧率）的 ABC 溶液分别加入对应的 ABC 孔中，而D孔则不需要添加。空白对照组需要加入溶液，但要注意确保操作过程中不发生溢出。
上机
实验完成后，取出细胞板并进行BCA吸取液体。每个孔中加入20μL的RIPA，进行震荡处理5分钟。随后加入200μL的工作液并充分混合，取出180μL转移到96孔板中。进行30分钟的孵育后，即可测定浓度。
