核蛋白和胞浆蛋白提取试剂盒

产品编号 BB-3112
产品分类 蛋白提取/定量
品牌 华韵生物
规格 50T 100T
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华韵生物 BB-3112-50t 50T ¥600.00
华韵生物 BB-3112-100t 100T ¥1000.00
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产品概述 product description

华韵 HYproExtra 核蛋白和胞浆蛋白提取试剂盒提供全套试剂，适用于从各种原代或传代细胞和各种实体组织，如脑、脊髓、神经结或纤维、脂肪、肝脏、消化道、肾脏、心脏、肌肉、血管、结缔组织等哺乳动物组织中提取核蛋白和胞浆蛋白。提取过程简单方便，可在1小时内完成。制备的核蛋白和胞浆蛋白不仅纯度高，保持天然活性，而且绝少交叉污染。 本试剂盒含有的独特配方能够有效溶解细胞核膜组份。本试剂盒含有的蛋白酶抑制剂混合物，阻止了蛋白酶对蛋白的降解，为提取高纯度的蛋白提供了保证。 本试剂盒提取的蛋白可用于Western Blotting、蛋白质电泳、免疫沉淀、ELISA、转录活性分析、Gel shift凝胶阻滞实验、酶活性测定等下游蛋白研究实验。 本试剂盒提取的蛋白为具有天然蛋白构象的活性蛋白。 本试剂盒中不含有EDTA，与金属螯和层析等下游应用兼容。

保存温度
2-8℃
注意事项
1.蛋白酶抑制剂未开盖使用前也可以2-8℃储存。开盖使用后-20℃储存。
2.蛋白酶抑制剂在2-8℃低温时是固体状态，从冰箱取出后恢复至室温或37℃短时间水浴，变成液体状态后离心至管底部再开盖。
3.试剂拆封后请尽快使用完！
有效期
一年
检测方法
WB,IP等
适用样本
动物细胞/组织
产品特点
1.使用方便，从细胞，组织中提取蛋白不需经过研磨、反复冻融、超声破碎等前处理。
2.提取过程简单方便。
3.含蛋白稳定剂，提取的蛋白稳定。
4.紫外检测蛋白浓度时，背景干扰低。
5.蛋白提取液含多种有效成分，可以充分释放胞浆蛋白和膜蛋白，又可结合释出的蛋白防止沉淀。
6.蛋白酶抑制剂抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制剂配方优化。蛋白酶抑制剂混合物包含6种独立的蛋白酶抑制剂AEBSF、Aprotinin、Leupeptin、Pepstatin A、Bestatin、E-64，每一种抑制剂可特异性抑制某一种或几种蛋白酶活性。该混合物优化的组成使其可以抑制几乎所有重要的蛋白酶活性，包括丝氨酸蛋白酶、半胱氨酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。
产品应用
WB,IP等
仪器准备
1.离心机
2.振荡器
3.匀浆机/匀浆器
4.涡旋混匀器
5.移液器
6.冰箱
7.冰盒
试剂准备
1.PBS缓冲液
2.蛋白定量试剂盒
耗材准备
1.离心管
2.吸头
3.一次性手套
使用注意事项
使用注意事项：
 旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。
 蛋白酶抑制剂在2-8℃时是固体状态，从冰箱取出后恢复至室温或37℃短时间水浴，变成液体状态后离心至管底部再开盖。
 实验过程中的所有试剂须预冷；所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。
 蛋白酶抑制剂储存期间溶液如果出现沉淀，不影响使用，溶解后正常使用。
 如果试剂盒不能短时间内用完，蛋白酶抑制剂混合物不可以一次全部加入提取液。
 可以根据自己实验需要加入其它蛋白酶抑制剂单品。


细胞蛋白提取
1. 提取液准备：
每200 μl蛋白提取液A中加入1 μl蛋白酶抑制剂混合物，混匀后置冰上备用。
每200 μl蛋白提取液B中加入1 μl蛋白酶抑制剂混合物，混匀后置冰上备用。
2. 取5-10×106个细胞，在4℃，1000×g条件下离心5分钟，小心吸取培养基，尽可能吸干，收集细胞。
3. 用冷PBS洗涤细胞两次，每次洗涤后尽可能吸干上清。
4. 每20 μl体积细胞沉淀（约20 mg，2×106个细胞）中加入200-300 μl冷的提取液 A，高速涡旋振荡15秒或吹打混匀，置2-8℃条件振荡15-30分钟。
5. 然后在4℃，1000×g条件下离心10分钟。
6. 将上清吸入另一预冷的干净离心管，即可得到胞浆蛋白，请置于冰上或-80℃冰箱保存备用。
7. 沉淀用PBS洗涤一次，在4℃，1000×g条件下离心5分钟，弃上清。
8. 在沉淀中加入200 μl冷的提取液B，高速涡旋振荡5秒。
9. 置2-8℃条件振荡30分钟，至沉淀明显减少甚至无明显沉淀。
10. 在4℃，14000×g条件下离心10分钟。
11. 将上清吸入另一预冷的干净离心管，即可得到核蛋白。
12. 将上述蛋白提取物定量后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验。

组织蛋白提取
1. 提取液制备：
每200 μl蛋白提取液A中加入1 μl蛋白酶抑制剂混合物，混匀后置冰上备用。
每200 μl蛋白提取液B中加入1 μl蛋白酶抑制剂混合物，混匀后置冰上备用。
2. 取适量组织样本，用手术剪刀尽可能剪碎，加冷PBS，用组织匀浆机/匀浆器匀浆至无明显肉眼可见固体，冰上静置5分钟，小心将上清吸入另一预冷的干净离心管。
3. 在4℃，500×g条件下离心5分钟，弃上清。
4. 每20 mg组织（20-30 μl细胞沉淀体积）中加入200 μl冷的提取液 A，高速涡旋振荡15秒或吹打混匀，置2-8℃条件振荡20-30分钟。
5. 然后在4℃，1000×g条件下离心10分钟。
6. 将上清吸入另一预冷的干净离心管，即可得到胞浆蛋白，请置于冰上或-80℃冰箱保存备用。
7. 沉淀用PBS洗涤一次，在4℃，1000×g条件下离心5分钟，弃上清。
8. 在沉淀中加入100-200 μl冷的提取液B，高速涡旋振荡5秒。
9. 置2-8℃条件振荡30-40分钟，至沉淀明显减少甚至无明显沉淀。
10. 在4℃，12000×g条件下离心10分钟。
11. 将上清吸入另一预冷的干净离心管，即可得到核蛋白。
12. 将上述蛋白提取物定量后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验。

1.细胞裂解速度慢？
为了充分保证提取得到的蛋白的活性，提取液采用独特的保护蛋白的配方，裂解能力温和，下游应用范围广。
适当延长裂解时间。

2.蛋白浓度低？
处理部分组织样本时可能没有裂解完全，导致蛋白浓度低。只要适当延长试剂A和试剂B的处理时间即可。最好在持续振荡的条件下处理，没有振荡器也可间隔几分钟用吸头吹打混匀。

3.用什么方法定量蛋白？
建议用BCA法。不适合用Bradford法，因为试剂A中含有干扰Bradford法的组份，导致定量不准。如果已经进行过透析处理或者用脱盐柱改换过缓冲体系，则可以用Bradford法定量。
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