一、蛋白质研究步骤
假定你发现一种新的蛋白质:蛋白质X,先后经过
1.如何得到这种蛋白质——蛋白质的分离、纯化技术;
2.这种蛋白质的大小——SDS-PAGE(聚丙烯酰胺凝胶电泳)
3.它的pI是多少?——等电聚焦
4.其他细胞或其他生物体内是否存在?——Western印迹
5.其一级结构如何?——直接测定法、间接测定法
6.其三维结构又如何?——X-射线衍射和核磁共振
二、如何得到这种蛋白质?
蛋白质的分离、纯化技术
准备工作
1.要解决三个问题:
(1)纯化蛋白质的目的;
(2)目标蛋白的测活方法;
(3)纯化蛋白质的原料。
2.纯化步骤:
(1)破碎细胞或组织(混合和匀浆);
(2)去除残渣(离心);
(3)沉淀/浓缩(硫酸铵或聚乙二醇);
(4)纯化(层析);
(5)鉴定
三、这种蛋白质的大小?
SDS-PAGE(聚丙烯酰胺凝胶电泳)
四、它的pI是多少?
等电聚焦
五、其他细胞或其他生物体内是否存在?
Western印迹
六、其一级结构如何?
1.序列分析
2.直接测定法:化学测定法、质谱
3.间接测定法:先得到某一种蛋白质基因的核苷酸序列,然后根据通用的遗传密码表间接推导出由其决定的氨基酸序列。
七、其三维结构又如何?
X-射线衍射和核磁共振