2024/12/2 8:50:00

一、蛋白质研究步骤

假定你发现一种新的蛋白质:蛋白质X,先后经过

1.如何得到这种蛋白质——蛋白质的分离、纯化技术;

2.这种蛋白质的大小——SDS-PAGE(聚丙烯酰胺凝胶电泳)

3.它的pI是多少?——等电聚焦

4.其他细胞或其他生物体内是否存在?——Western印迹

5.其一级结构如何?——直接测定法、间接测定法

6.其三维结构又如何?——X-射线衍射和核磁共振

 

二、如何得到这种蛋白质?

蛋白质的分离、纯化技术

准备工作

1.要解决三个问题:

(1)纯化蛋白质的目的;

(2)目标蛋白的测活方法;

(3)纯化蛋白质的原料。

2.纯化步骤:

(1)破碎细胞或组织(混合和匀浆);

(2)去除残渣(离心);

(3)沉淀/浓缩(硫酸铵或聚乙二醇);

(4)纯化(层析);

(5)鉴定

 

三、这种蛋白质的大小?

SDS-PAGE(聚丙烯酰胺凝胶电泳)

 

四、它的pI是多少?

等电聚焦

 

五、其他细胞或其他生物体内是否存在?

Western印迹

 

六、其一级结构如何?

1.序列分析

2.直接测定法:化学测定法、质谱

3.间接测定法:先得到某一种蛋白质基因的核苷酸序列,然后根据通用的遗传密码表间接推导出由其决定的氨基酸序列。

 

七、其三维结构又如何?

X-射线衍射和核磁共振

 

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